Биоконтроль сред и определение выживаемости спермиев

Качество сред определяют не только по тому, сколько часов сохраняют подвижность спермии в разбавленной сперме, но главным образом по времени, которое они могут жить при разных степенях разбавления по срав­нению с неразбавленной спермой.

Поэтому каждая среда должна быть проверена на сперме каждого производителя, при этом определяют выживаемость спермиев при разных степенях разбавле­ния спермы, а следовательно, наиболее приемлемую сте­пень разбавления спермы того или иного животного. Чтобы определить пригодность среды для спермы быка и барана, а также установить продолжительность выжи­ваемости спермиев, сперму разбавляют и 2 раза в день определяют активность спермиев. Для этого используют маленькие флаконы. В каждый флакон наливают по 0,5 или 1 мл среды, в первый флакон добавляют 0,5 или 1 мл свежеполученной спермы, перемешивают; затем берут из него 0,5 или 1 мл содержимого и переносят в следующий флакон и т. д. Таким образом получают разбавление спермы в 2,,4, 8 16, 32 и 64 раза; в качестве контроля служит неразбавленная сперма.

5. Образец записи результатов исследования  
Степень разбавления спермы Активность спермиев по дням
  1-й 2-й 3-й 4-й 5-й

1:2 9987766554

1:4 9987766544 И т. д.

Неразбавленная сперма 8 7 5 5 3 3 2 2 1 1

 

 

После разбавления спермы проверяют активность спер-миев и пробир­ки ставят в термос со льдом. Результаты проверки спермы на активность спермиев записывают (табл.5).

На основании полученных данных можно определить наивысшую степень разбавления спермы быка или бара­на, при этом надо учитывать, что сперма этих животных может быть применена при активности не менее 7 баллов. Такое исследование спермы проводят периодически (1 раз в 3 мес или чаще в случае понижения оплодотворяемости маток или при использовании новой серии компонен­тов среды). Можно одновременно на сперме одного производителя провести биоконтроль 2 — 3 сред, поль­зуясь при этом разным температурным режимом в зависимости от состава среды. Кроме того, рекомендуют периодически оставлять на станции 2 — 3 мл разбавлен­ной спермы и проверять ее на активность спермиев два раза в день; с этой же целью можно проверять актив­ность спермиев в сперме, привезенной с пункта после истечения срока хранения спермы.


ХРАНЕНИЕ СПЕРМЫ

ЦЕЛЬ ЗАНЯТИЙ. Ознакомиться с оборудованием для хранения и транспортирования спермы быка, барана, хряка, жеребца.

Объекты исследования и оборудование: свежеполученная сперма быка, барана, хряка, жеребца; синтетические среды для разбавления спермы; одноразовые стеклянные, полиэтиленовые ампулы и пробирки; флаконы из-под антибиотиков, пробки к ним, вата, поролоновые амортизаторы, полиэтиленовые мешочки, электрохолодильник, термосы различных конструкций, сосуды Дьюара, лед, бытовые сумки-холодильники, стеклянные колбы, микроскоп, предметные и покровные стекла, стеклянные пипетки или палочки, резиновые кольца, стеклян­ные банки с притертыми крышками на 50 — 100 мл, марля, перга­ментная бумага или целлофан, резиновые перчатки, защитные очки, фторопластовые пластинки, держатель пластины, контейнеры для сбо­ра и хранения гранул в сосудах с жидким азотом, лопатки для съема гранул с пластины, воронки для ссыпания гранул, корнцанги, шпри­цы на 25 — 50 мл или градуированные пипетки для разлива спермы в лунки фторопластовой пластины, пинцеты, специальное устройство для разбавления спермы, тонкостенная полимерная трубка, автомат ПРЖ, алюминиевые трубы диаметром 40 мм, устройство для замора­живания спермы, полипропиленовые трубочки, анаэростат, вакуумный насос, медное сито (корзина), стаканчики для пайетт.

Краткие методические указания. Занятия проводят в лаборатории кафедры. Студентов (по 2 человека за одним столом) обеспечивают необходимыми материалами и оборудованием. Преподаватель знакомит студентов с оборудованием для хранения спермы, с методами кратко­временного хранения спермы быка, барана, хряка и жеребца и дли­тельным хранением спермы быка и жеребца. Затем студенты само­стоятельно проводят оценку полученной спермы, ее разбавление, фа­сование, упаковку и выполняют приемы по технологии хранения спермы при различных температурах.

Сперму с краткосрочными методами хранения студенты ежедневно в течение 1 — 3 дней проверяют на активность спермиев с записями данных оценки в тетрадь. Производят оттаивание замороженной спермы с длительными сроками хранения и оценивают активность спер­миев с использованием обогревательного столика или термостата или методом подщелачивания капли спермы на предметном стекле.

Существует несколько методов хранения спермы: кратковременное хранение спермы быков, баранов, хряков и жеребцов при плюсовых температурах и длительное хранение в замороженном состоянии в жидком азоте спермы быков и жеребцов.

Хранение спермы быка и барана при температуре 2 — 5°С. Свежеполученную сперму быков или баранов после оценки ее качества разбавляют средой, снова про­веряют под микроскопом на активность спермиев и после разбавления фасуют.

Сперму быков фасуют в одноразовые стерильные стеклянные или полиэтиленовые ампулы, полиэтиленовые пробирки объемом по 1 мл, а также во флаконы из-под антибиотиков. Сперму баранов фасуют в пробирки или флаконы объемом 5—8 мл. Пробирки или флаконы за­полняют спермой до самой пробки во избежание взбал­тывания при транспортировании, что неблагоприятно влияет на выживаемость спермиев. После накопления спермой концы стеклянных ампул запаивают на некоптя- щем пламени, а у полиэтиленовых ампул запаивают конец с отверстием с помощью горячего электроутюга или электропаяльника. Флаконы закрывают стерильной нетоксичной пробкой и резиновым колечком фиксируют этикетку.

Слишком быстрое охлаждение спермы приводит к гибели спермиев от температурного шока. Поэтому фасо­ванную сперму охлаждают до температуры 2—5°С по­степенно в течение 2—3 ч. Для этой цели разбавленную сперму быка вначале помещают в стеклянный стакан с теплой водой (температура 30°С), а затем переносят в водяную баню (температура 22°С) на 20 мин, после чего производят фасование и другие технологические обработки спермы при комнатной температуре.

Сперму барана (фасованную) выдерживают при ком­натной температуре 10—15 мин. Ампулы, пробирки или флаконы обертывают слоем ваты или упаковывают в поролоновые амортизаторы, помещают в такой упаковке в полиэтиленовые или рези­новые мешочки, герметиче­ски закрывают их и постепен­но охлаждают до 2 — 5°С в бытовом электрохоло-дильни­ке или в пищевом термосе со льдом. Упаковку со спермой кладут на поверхность льда или обкладывают ее льдом со всех сторон.

Через 30 — 60 мин после разбавления сперму отправ­ляют в хозяйства на любом транспор-те. К флакону или другим емкостям прикрепляют этикетку с обозначением даты получения спермы, клички производи-теля, количест­ва доз, куда направляется сперма; оформляют ордер (накладную) в двух экземплярах. Сперму перевозят в широкогорлых пищевых или пластмассовых термосах. При температуре окружающего воздуха ниже — 5°С тер­мос со спермой, чтобы она не замерзла, необходимо укрывать войлочным или ватным чехлом (рис. 28).

Разбавленную сперму быка, сохраненную при 2 — 5°С, используют для искусственного осеменения коров и телок в течение 3 сут. при активности спермиев не ниже 7 бал­лов; сперму барана используют в течение 2 сут., иногда 36 ч при активности спермиев не ниже 8 баллов.