ИММУНОБЛОТИНГ
Метод состоит из трех этапов.
1. Электрофоретическое фракционирование белков ВИЧ в полиакриламидном геле.
Смесь белков наносят вместе с маркерным красителем бромфеноловым голубым на поверхность полиакриламидного геля и препарат помещают в специальную камеру для вертикального электрофореза. Включают слабый постоянный ток и белки ВИЧ двигаются в геле на определенные расстояния, согласно их молекулярной массе. Чем меньше масса белка, тем дальше он продвигается в геле от катода к аноду. Зоны присутствия белка окрашиваются маркерным красителем.
2. Электрофоретический перенос вирусных белков с полиакриламидного геля на нитроцеллюлозную мембрану (НЦМ).
Окрашенные зоны белка ВИЧ в геле отмывают в буфере, содержащем твин-20, и далее помещают в аппарата для горизонтального электрофореза. Подключают слабый постоянный ток и белки начинают двигаться к аноду. В конце полиакриламидного геля устанавливают НЦМ. Белки, двигаясь в геле, переходят на НЦМ. Нитроцеллюлозную мембрану отмывают в буфере, подсушивают. Далее НЦМ разрезают на узкие полоски – стрипы, размером 0,5х10 см. На поверхности стрипов находятся белки с разной молекулярной массой.
3. Выявление антител к белкам ВИЧ.
Стрипы помещают в микрованночку, наносят на них исследуемую сыворотку пациента, инкубируют 30 мин, промывают буфером от несвязавшихся компонентов сыворотки. Затем добавляют кроличью антисыворотку к белкам сыворотки человека. меченую ферментом. Это конъюгат. Буфером отмывают стрипы от несвязавшегося конъюгата. Для визуализации реакции добавляют смесь субстрата и хромогена (Н2О2 и бетанитрохлорбензол).
При наличии в исследуемой сыворотке антител к структурным белкам ВИЧ происходит их адсорбция на соответствующих участках стрипа. Добавляемая антиглобулиновая сыворотка, меченая пероксидазой хрена, фиксируется на антителах исследуемой сыворотки. Пероксидаза хрена расщепляет добавленный субстрат (перекись водорода) и цвет индикатора меняется. Наличие голубых полос на стрипе свидетельствует о присутствии антител в сыворотке крови обследуемого к соответствующим белкам ВИЧ. Опытный стрип сравнивают с контрольным и анализируют: к каким белкам ВИЧ имеются антитела в исследуемой сыворотке. Делают заключение о наличие антител к вирусу.
Тесты к разделу иммунодиагностика.
1. Феномен, основанный на образовании осадка, определяется как...
а) агглютинация,
б) преципитация,
в) нейтраплизации.
2. Метод определения сорбированного антигена относится к феномену...
а) агглютинации,
б) преципитации,
в) нейтрализации.
3. Лизис антигена в клеточной форме относится к методу и феномену...
а) агглютинации,
б) потребления комплемента прямой,
в) агглютинации прямой,
г) потребления комплемента непрямой.
4. Выявление антител с помощью меченых антител, нагруженных на нерастворимый носитель, относится к феномену...
а) иммунофлюоресценции прямой,
б) иммунофлюоресценции непрямой,
в) иммунофлюоресценции торможения.
5. Кольцепреципитация по Асколи относится к методу и феномену...
а) иммунофлюоресценции прямой,
б) преципитации в геле,
в) преципитации в жидкой фазе.
6. Метод гашения болезнетворного действия включает реакции...
а) иммобилизации,
б) нейтрализации,
в) преципитации.
7. РНГА относится к феномену...
а) преципитации,
б) агглютинации,
в) нейтрализации,
г) ИФА.
8. РОГ относится к феномену...
а) преципитации,
б) агглютинации,
б) нейтрализации,
в) иммуноконъюгации.
9. РИФН относится к феномену...
а) агглютинации,
б) преципитации,
в) иммунофлюоресценции,
г) иммуноконъюгации.
10. РИЭФ относится к феномену...
а) агглютинации,
б) преципитации,
в) нейтрализации,
г) иммунофлюоресценции.
11. РИФ относится к феномену...
а) агглютинации,
б) преципитации,
в) нейтрализации,
г) иммунофлюоресценции.
12. ИФАП относится к феномену...
а) агглютинации,
б) преципитации,
в) иммуноконъюгации.
Ответы к тестам по главам
Глава 1. 1б, 2в, 3а, 4б, 5в, 6 Кох, 7б, 8а, 9в.
Глава 2. 1 вирусы и плазмиды, 2-4, 3-3, 4-4, 5 спирохеты, 6 энтеробактериацее, 7 Sta- phylococcus, 8 Mycoplasma, 9 вид, 10 царство, 11 клон.
Глава 3. 1а, 2в, 3 гроздьев, 4 цепочек, 5в, 6б, 7в, 8а, 9а, 10 актиномицеты и грибы, 11а, 12в, 13г, 14в, 15б, 16а, 17б, 18а, 19в, 20а, 21а, 22б, 23а, 24б, 25б, 26а, 27в, 28в, 29б, 30а, 31б, 32б, 33в, 34в, 35б.
Глава 4. 1а, 2б, 3а, 4б, 5а, 6в, 7а, 8а, 9а, 10б.
Глава 5. 1в, 2б, 3б, 4а, 5в, 6в, 7б.
Глава 6. 1в, 2а, 3б, 4а, 5а, 6а, 7б, 8в, 9а, 10в, 11а, 12в, 13а, 14а, 15а.
Глава 7. 1 мутации, 2б, 3б, 4а, 5б, 6а, 7в, 8б, 9а, 10а, 11б, 12б, 13а, 14а,б, 15б, 16а, 17а, 18б, 19б, 20а, 21а.
Глава 8. 1а, 2б, 3в, 4б, 5в, 6а, 7б, 8а, 9б, 10б, 11а, 12б, 13а, 14в.
Глава 9. 1а, 2б, 3а, 4б, 5б, 6б, 7а, 8в, 9в, 10а.
Глава 10. 1в, 2б, 3а, 4а, 5г, 6г, 7б, 8б, 9в,г, 10б,в, 11а, 12в, 13а, 14в, 15г, 16г.
Глава 11. 1б, 2в, 3г, 4б, 5б, 6а,в, 7б, 8а, 9б, 10б, 11б.
Глава 12. 1б, 2а, 3а, 4а, 5а, 6а, 7в.
Глава 13. 1б,г, 2 корковый, 3б, 4а, 5в, 6а, 7б, 8а, 9б, 10б.
Глава 14. 1а,в, 2б,в, 3а,д, 4б, 5а, бв, 7а, 8б, 9а, 10б, 11а,б.
Глава 15. 1а,в, 2а,б, 3б, 4г, 5а, 6б, 7б, 8г, 9б.
Глава 16. 1б, 2б, 3а,б,г,д,е, 4а,б, 5а,в,г,д,е, 6в, 7а, 8б, 9а, 10в, 11б, 12в, 13а, 14б, 15 активный центр антител, 16-2, 17в, 18а,в, 19б, 20а, 21а, 22а, 23б, 24в, 25 сывороточные белки, принадлежащие к классу ИГ.
Глава 17. 1 состояние генетического постоянства молекулярно-клеточного состава внутренней среды организма, 2а, 3 г, 4б, 5б, 6в, 7в, 8б, 9а.
Глава 18. 1а, 2б,в, 3а, 4б, 5а, 6а, 7б, 8в, 9б, 10б, 11б.
Глава 19. 1а, 2в, 3а, 4б, 5в, 6г,д, 7б, 8в, 9в, 10а, 11а, 12в, 13б, 14в.
Глава 20. 1а, 2 большой дозой антигена, 3а, 4 Пирке, 5в, 6в, 7а, 8б, 9б, 10а, 11в.
Глава 21. 1б, 2б, 3а, 4г, 5в, 6б, 7а, 8а, 9 это количественная и функциональная характеристика отдельных факторов и звеньев иммунного ответа на определенном этапе жизни человека или конкретной стадии развития болезни, 10а,б.
Глава 22. 1в, 2а, 3б, 4а, 5в, 6б, 7в, 8а, 9а, 10б, 11а, 12а.
Глава 23. 1б, 2а, 3в, 4б, 5б, 6б, 7б, 8б, 9а, 10в.
Практикум 1а, 2а, 3б, 4б, 5в, 6б, 7б, 8б, 9в, 10б, 11г, 12в.
Литература:
1. Борисов Л.Б. и др. Медицинская микробиология, вирусология и иммунология, М., 2001.
2. Борисов Л.Б. и др. Руководство к лабораторным занятиям по медицинской микробиологии, вирусологии и иммунологии, М. Медицина, 1993.
3. Билич Г.Л., Назарова Л.В. Основы валеологии, С.-П., 1998.
4. Воробьев А.В. и др. Микробиология, М., 1998
5. Галактионов В.Г. Иммунология, М., 2000.
6. Гусев М.В. Минеева А.Л. Микробиология, М., МГУ, 1992.
7. Долгих В.Т. Основы иммунопатологии, Н.Новг., НГМА, 1998.
8. Джавец Э. и др. Руководство по медицинской микробиологии, т.1-3, М., Мед., 1982.
9. Janeway CH.A. et al. Immunobiology, L., 1994.
10. Егоров Н.С. Основы учения об антибиотиках, М., 1996.
11. Козлов И.Г., Емельянов А.О. СD-антигены:обзор данных на апрель 1998 г Russian J. of Immunology. № 3, 1998.
12. Колбанов В.В. Валеология, С.-П. 1998.
13. Королюк А.М., Сбойчаков В.Б. Медицинская микробиология, С.-П., 1999.
14. Королюк А.М., Сбойчаков В.Б. Медицинская вирусология, С.-П., 2002.
15. Королюк А.М., Сбойчаков В.Б. Медицинская микробиология, С.-П., 2002.
16. Коротяев А.И., Бабичев С.А., Медицинская микробиология, вирусология и иммунология, С.-П., 1998.
17. Маянский А.Н. Микробиология для врачей, Н.Новг., 1999.
18. Незлин Р.С. Строение и биосинтез антител, М. Наука, 1972.
19. Никифоров В.А. и Шкарин В.В. Медицинская микробиология, Н.-Новг., 2000.
20. Новиков А.И., Логинова М.М. Болезни кожи инфекционного и паразитарного происхождения, Омск, 2001.
21. Определитель бактерий Берджи, 1 и 2 том, М., Мир, 1997.
22. Отто Prokop, Werner Coller Группы крови человека, Пер. М., 1991.
23. Лолор младший
24. Павлович С.А. Основы иммунологии, Минск, Вышэйная школа, 1998.
25. Петров Р.В. Иммунология, М., Медицина, 1980.
26. Покровский В.И. Медицинская микробиология, М., 1998.
27. Поздеев О.К. Медицинская микробиология, ГОЭТАР, М., 2001.
28. Пфейфер Д. Наглядная иммунология, М., ГЭОТАР, 1998.
29. Райкис Б.Н. Общая микробиология с вирусологией и иммунологией, М., 2002.
30. Райт Р. Основы иммунологии, М., 1991.
31. Соколов Е.И. Клиническая иммунология, М., 1998.
32. Стефани Д.В. и др. Клиническая иммунология детского возраста, М., Медицина, 1977.
33. Турьянов М.Х. Лабораторные тесты. Микробиологическая и вирусологическая диагностика, М., Каппа, 1995.
34. Филде Б. и др. Вирусология, т.1-3, М., Мир, 1989.
35. Чард Т. Радиоиммунологические методы, Перевод, М., Мир, 1981.
36. Шамардин В.А. и др. Сорбированные диагностические иммунореагенты, Алматы, Наука, 1989.
37. Шортанбаев А.Ш. и др. Иммунология и аллергология, Алматы, Наука, 1993.
38. Ярилин А.А. Основы иммунологии, М., 1999.
ПРЕДСТАВЛЕНИЕ
на профессора кафедры микробиологии, вирусологии
и иммунологии ОГМА, доктора мкдицинских наук
Шамардина Виссариона Андреевича
Шамардин В.А. занимает в ОГМА должность профессора на кафедре микробиологии, вирусологии и иммунологии с 1999 г, а с 1998 г на кафедре гигиены труда. Имеет сертификаты по специальностям: Бактериология и Вирусология. Общий медицинский стаж 39 лет, из них по специальности Бактериология 16 лет, по специальности Иммунология 21 год. Имеет 169 научных работ, из них – 18 Авторских свидетельств на изобретения, 1 регламент на производство холерного диагностикума, 2 монографии. Он являлся руководителем 5 защищенных кандидатских диссертаций по микробиологии и иммунологии. Неоднократно выезжал с комиссией Минздрава Каз. ССР на ликвидацию вспышек дизентерии, болезни Боткина, сальмонеллеза и пр. Был руководителем республиканского центра по шигеллезам и ОКИ при Минздраве Каз. ССР. Прошел 6-ти месячную специализацию по Бактериологии и серологическим реакциям в Средне-Азиатском противочумном институте в 1989 г.
Виссарион Андреевич, кроме практического и производственного, имеет значительный научный стаж и преподавательское мастерство. Он работал совместителем в Алма-Атинском медицинском институте на кафедре микробиологии, был заведующим кафедры микробиологии и, вместе с тем, деканом медицинского факультета и зам. директора колледжа с высшим образованием Восточно-Казахстанского университета, а в настоящее время - профессором кафедры микробиологии в ОГМА. Общий педагогический стаж по предмету микробиология – 17 лет. В ОГМА преподавал бактериологию для врачей-бактериологов, читает лекции 2 курсу педтатрического факультета и проводит практические занятия по микробиологии для студентов 2 и 3 курсов лечебного и педиатрического фак. Разработал учебное пособие по общей медицинской микробиологии на 387 стр.
Виссарион Андреевич показал себя опытным и добросовестным специалистом.
Зав. кафедрой, профессор Н.В. Рудаков
19.09.03.
ПРЕДСТАВЛЕНИЕ
на ассистента кафедры микробиологии, вирусологии
и иммунологии, кандидата биологических наук, доцента
Рудь Нину Васильевну
Рудь Н.В. занимает должность ассистента в ОГМА 6 лет, вначале на кафедре гигиены труда (1998 г), а затем с 1999 г на кафедре микробиологии, вирусологии и иммунологии. Имеет сертификаты по специальностям: Бактериология и Вирусология. Общий медицинский стаж работы 33 года, из них по Бактериологии – 20 лет Имеет 33 научные работы, в том числе – 2 Авторских свидетельства на изобретения. В 1992 г прошла 6-ти месячную специализацию по Бактериологии и серологическим методам диагностики в Средне-Азиатском противочумном институте, а в 1995 г цикл учовершенствования при ФПК Алма-Атинского медицинского института.
Нина Васильевна, кроме практической и научной работы, овладела преподавательским мастерством, будучи старшим преподавателем, затем доцентом, а после и.о. заведующим кафедрой микробиологии медицинского факультета Восточно-Казахстанского университета. В настоящее время является ассистентом кафедры микробиологии, вирусологии и иммунологии ОГМА по ПДО. Общий преподавательский стаж 11,5 лет.
Нина Васильевна, кандидат биологических наук, имеет ученое звание доцента. Являясь куратором ПДО на кафедре микробиологии, освоила всю необходимую документацию, приказы, методическую литературу по Бактериологии. Она непосредственно принимала участие в разработке документации по кафедре по специальностям Бактериология, Вирусологи и Паразитология. Она ведет лекции и семинарские занятия с врачами –бактериологами, является руководителем их производственной практики в баклабораториях города.
Рудь Н.В. показала себя грамотным и добросовестным специалистом.
Зав. кафедрой, профессор Н.В. Рудаков
18.09.03.