Антибиотиков и антисептиков
Цель: Освоить методику контроля стерильности готовых лекарственных форм противомикробных препаратов.
Задание: Провести испытание на стерильность образца 0,02% водного раствора фурацилина.
Материалы: Образец 0,02% раствора фурацилина; две бутылочки с 40 мл стерильной тиогликолевой среды, рН 7,2; две бутылочки с жидкой стерильной средой Сабуро, рН 5,6; по 1,0 мл бульонных культур тест-штаммов S. aureus (ATCC 653 P) и C. albicans (ATCC 885-653) плотностью 10 КОЕ/мл; пипетки стерильные 5 мл - 4; пипетка стерильная 1 мл - одна; реактивы для окраски по методу Грама; предметные стёкла, микроскоп.
Методика испытания(рис. 10):
1. 5 мл образца испытуемого препарата внести в колбу со средой Сабуро;
2. 5 мл образца препарата внести в колбу с тиогликолевой средой;
3. В колбу с тиогликолевой средой внести 5 мл образца препарата и 0,1 мл взвеси тест-культуры S. aureus (контроль качества нейтрализации);
4. В колбу со средой Сабуро внести 5 мл образца препарата и 0,1 мл взвеси тест-культуры C. albicans (контроль качества нейтрализации);
5. Тиогликолевые среды поместить в термостат при 30-35оС, среды Сабуро инкубируют при 20-25оС. Наблюдение ведут 14 дней.
6. В контрольных посевах должно быть помутнение. В случае помутнения опытных посевов, не дожидаясь окончания срока наблюдения, а при отсутствии помутнения на 14 день инкубации из опытных и контрольных посевов следует приготовить мазки и окрасить их по Граму.
Оценка результатов:
1. Препарат считается стерильным, если в опытных посевах нет роста микроорганизмов, а в контрольных - есть рост.
2. Препарат считается нестерильным, а, следовательно, непригодным к использованию, если в опытных и контрольных посевах обнаружен рост микроорганизмов.
3. Если в контрольных посевах нет роста, исследование повторяют, используя метод мембранной фильтрации.
Среда Сабуро Исследуемый Тиогликолевая среда
образец ГЛС
5 мл 5 мл
0,1 мл 0,1 мл
тест-культуры Candida, 20-25оС тест-культуры Staphylococcus, 30-35оС
14 дней 14 дней
Рис. 10. Методика контроля стерильности готовых лекарственных форм противомикробных препаратов