Методы выделения чистых культур, основанные на биологическом принципе
Биологический принцип разъединения бактерий предусматривает целеустремленный поиск методов, которые учитывают многочисленные особенности микробных клеток. Среди самых распространенных методов можно выделить следующие:
1. По типу дыхания. Все микроорганизмы по типу дыхания разделяются на две основных группы: аеробни (Corynebacterium diphtheriae, Vibrio сholerae и тому подобное) и анаэробные (Clostridium tetani, Clostridium botulinum, Clostridium perfringens и др.). Если материал, из которого следует выделить анаэробные возбудители, предварительно прогреть, а затем культивировать в анаэробных условиях, то вырастут именно эти бактерии.
2. По спорообразованию. Известно, что некоторые микробы (бациллы и клостридии) способны к спороутворення. Среди них Clostridium tetani, Clostridium botulinum, Clostridium perfringens, Bacillus subtilis, Bacillus cereus. Споры стойкие к действию факторов внешней среды. Следовательно, исследуемый материал может быть подданный действию термического фактора, а затем инокулятивно перенесен в питательную среду. Спустя некоторое время на нем вырастут именно те бактерии, которые способны к спороутворення.
3. Стойкость микробов к действию кислот и щелочей. Некоторые микробы (Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium bovis) в результате особенностей их химического строения стойкие к действию кислот. Вот почему материал, который их содержит, например, харкотиння при туберкулезе предварительно обрабатывают равным объемом 10 % раствора серной кислоты, а затем высевают на питательные среды. Посторонняя флора погибает, а микобактерии в результате их резистентности к кислотам, вырастают.
Холерный вибрион (Vibrio сholerae), напротив, является галофильною бактерией, потому для создания оптимальных условий роста его высевают на среды, которые содержат щелочь (1 % щелочная пептонная вода). Уже через 4-6 год на поверхности среды появляются характерные признаки роста в виде нежной голубоватой пленки.
4. Подвижность бактерий. Некоторые микробы (Proteus vulgaris) имеют тенденцию к ползучему росту и способны быстро распространяться по поверхности кое-что влажной среды. Для выделения таких возбудителей их засевают в капельку конденсационной жидкости, которая образуется при охлаждении столбика скошенного агара. Через 16-18 год они распространяются на всю поверхность среды. Если взять материал из верхней части агара, будем иметь чистую культуру возбудителей.
5. Чувствительность микробов к действию химических веществ, антибиотиков и других противомикробных средств. В результате особенностей метаболизма бактерий они можуь иметь разную чувствительность к некоторым химическим факторам. Известно, что стафилококки, аеробни бациллы, которые образуют споры, стойкие к действию 7,5–10 % хлориду натрия. Вот почему для выделения этих возбудителей используют елективни питательные среды (желтково-солевой агар, манит-солевой агар), которые содержат именно это вещество. Другие бактерии при такой концентрации хлорида натрия практически не растут.
6. Введение некоторых антибиотиков (нистатин) используется для торможения роста грибов в материале, который сильно контаминированный ими. И, напротив, добавление антибиотика пеницилину к среде способствует ингибуванню росту бактериальной флоры, если нужно выделить грибы. Добавлениефуразолидону в определенных концентрациях к питательной среде создает селективные условия для роста коринебактерий и микрококков.
7. Способность микроорганизмов проникать через неповрежденные кожные покровы. Некоторые патогенные бактерии (Yersinia pestis) в результате наличия большого количества ферментов агрессии способны проникать через неповрежденную кожу. Для этого шерсть на теле лабораторного животного бреют и в этот участок втирают исследуемый материал, который содержит возбудителя и большое количество стороньои микрофлоры. Через некоторое время животное забивают, а из крови или внутренних органов выделяют микробов.
8. Чувствительность лабораторных животных к возбудителям инфекционных заболеваний. Отдельные животные проявляют высокую чувствительность к разным микроорганизмам.
Например, при любом способе введения Streptococcus pneumoniae белым мышам у них развивается генерализованная пневмококковая инфекция. Аналогичная картина наблюдается при заражении гвинейских свинок возбудителями туберкулеза (Mycobacterium tuberculosis).
В повседневной практике бактериологи пользуются такими понятиями как штамми чистая культурамикроорганизмов. Под штаммом понимают микробов одного вида, которые выделены из разных источников, или из одного и того же источника, но в разное время. Чистая культура бактерий – это микроорганизмы одного вида, потомки одной микробной клетки, которые выросли на (в) питательной среде.