Современные методы определения характеристик ГЭК
Аналитические методы используют для характеристики ГЭК как in vitro, так и in vivo. Для уточнения свойств ГЭК и постоянного контроля качества продукта одинаково важны анализ и исходного сырья, и конечного продукта. Для определения концентрации ГЭК в плазме крови проводят преципитацию крахмала ацетоном, затем при помощи трифлюороацетиловой кислоты растворяют и гидролизуют его до изолированных глюкозных фрагментов, которые определяют при помощи ферментного анализа.34 Наиболее современными методами диагностики концентрации ГЭК in vivo являются узкоугольное рассеивающее лазерное излучение и высокоэффективная жидкая хроматография. Благодаря новым диагностическим методикам стало возможным точно определять молекулярную массу ГЭК. В предыдущие годы из-за недостаточных диагностических возможностей, измеряемая молекулярная масса крахмала не всегда соответствовала действительности, в связи с чем свойства ГЭК могли неправильно трактоваться. Например, гетакрахмал, который изначально маркировали как ГЭК 450/0,7, имел истинную молекулярную массу 670 кДа. После проведения правильного измерения маркировку изменили соответственно уточненным данным. Спецификация новых ГЭК, таких как ГЭК 130/0,4, разрабатывалась при помощи новейших методик. В пробах in vivo (например, плазма крови, моча) необходимо использовать методы оценки, подходящие для конкретной среды организма, и строго соблюдать методологию, например для точного определения концентрации необходимо инактивировать амилазу.
Экспериментальные исследования по накоплению в тканях и безопасности Количество ГЭК, которое временно депонируется в тканях, зависит от дозы введенного крахмала, периода полувыведения и почечной экскреции. Абсолютное количество ГЭК в тканях человека невозможно определить прижизненно. Поэтому для количественного сравнения депонирования ГЭК в тканях осуществляют исследования на животных. Jungheinrich и Neff 5 провели анализ литературы, посвященной экспериментальным исследованиям депонирования ГЭК в тканях. Основными работами являются исследование, проведенное Hulse и Jacobi 6 с использованием ГЭК 450/0,7, и сравнительное исследование ГЭК 130/0,4 и ГЭК 200/0,5, проведенное Leuschner и соавт.7.
Результаты этих исследований могут быть объединены, т.к. протоколы предполагали многократные введения препаратов и измерение накопления ГЭК в тканях при помощи ГЭК, меченных радиоактивным 14С. Данные для исследованных типов ГЭК получены с 8 по 10 день и с 24 по 28 день после окончания введения крахмалов, а для ГЭК 130/0,4 и ГЭК 200/0,5 до 52-го дня после последнего введения ГЭК. Остаточная концентрация в плазме крови была ниже для ГЭК 130/0,4 (10-й день: 0,0005% общей введенной дозы препарата), чем для ГЭК 200/0,5 (0,0021%), и продолжала снижаться до 52 дня после окончания лечения. Поскольку основное количество радиоактивного вещества выделилось ранее, суммированная суточная почечная и билиарная экскреция была низка как для ГЭК 130/0,4, так и для ГЭК 200/0,5: через 10 дней после последней инфузии раствора (0,055% и 0,052% соответственно), с 24 по 28 день после окончания лечения (0,030% и 0,039% соответственно). Дальнейшее снижение экскреции отмечалось до 52-го дня после окончания введения препаратов - 0,017% и 0,020% соответственно.
Соответствующие показатели для ГЭК 450/0,7 на всех этапах исследования составляли около 1% и 0,9%. Накопление ГЭК 450/0,7 в тканях (мягкие ткани, печень, почки, селезенка) было значительно больше по сравнению с ГЭК 130/0,4 и ГЭК 200/0,5, и значительно ниже для ГЭК 130/0,4 в сравнении с ГЭК 200/0,5. Общее депонирование в организме через 52 дня после последнего введения крахмала для ГЭК 130/0,4 составляло всего четверть от депонированного количества ГЭК 200/0,5. Уменьшение содержания ГЭК в тканях особенно значимо, т.к. растворы вводили в течение 18 дней. На 52-й день после окончания лечения абсолютное значение остаточной активности в почках было низкой для двух групп (0,019%), отражая длительную экскрецию остаточного ГЭК даже в случае низкого уровня депонирования в организме ГЭК 130/0,4.