Питательные среды
Кровяной агар для постановки САМР-теста. К 2% питательному агару, рН 7,4-7,6, добавляют 0,2% глюкозы и эритроциты барана или крупного рогатого скота. Эритроциты из цитратной крови трижды промывают изотоническим раствором хлорида натрия с целью удаления антигемолизина, который может содержаться в сыворотке, затем ресуспендируют их в том же растворе до первоначального объема крови. К агару добавляют 5% взвеси эритроцитов.
Желчно - щелочной агар ( далее-ЖЩА). Сухой питательный агар - 35,0 г; дрожжевой автолизат - 20,0 мл; глюкоза - 10,0 г; дистиллированная вода - 600 мл. Агар расплавляют, профильтровывают, добавляют свежей бычьей желчи - 400,0 мл и карбонат натрия - 5,0 г.
Стерилизуют готовую среду автоклавированием при 1120 С в течение 15 минут. Перед разливкой в чашки к среде прибавляют 50,0 мл свежей крови (барана, кролика или человека), 12,5 мл 0,01% раствора кристаллического фиолетового и 20 мл раствора гидроксида калия ( далее-КОН).
Молоко с метиленовым синим. Свежее молоко доводят до кипения, оставляют на сутки, освобождают от сливок, вторично кипятят, снова оставляют на сутки и вторично снимают верхний слой. Обезжиренное таким образом молоко фильтруют через толстый слой ваты, подщелачивают 10% раствором карбоната натрия до рН 7,2. К 100 мл молока прибавляют 2,0 мл 1% водного раствора метиленового синего. Приготовленную таким образом среду разливают по 5,0 мл в стерильные пробирки, стерилизуют текучим паром 3 дня по 30 минут.
Энтерококковая дифференциально - диагностическая среда (ЭДДС). Сухой питательный агар - 35 г, автолизат дрожжевой для приготовления питательных сред - 20 мл, глюкоза - 10 г, дистиллированная вода - 800 мл. Расплавляют при нагревании, профильтровывают, стерилизуют при 1120 С в автоклаве 15 минут, рН 7,2-7,4.
Перед разливкой в чашки в питательную среду добавляют ТТХ - 0,1 г; водного раствора кристаллического фиолетового 0,01% - 12,5 мл; налидиксовой кислоты - 0,1 г; стерильного обезжиренного молока, подогретого до 44-450 С - 200 мл; свежей дефибринированной крови (животных или человека) - 50 мл. Содержимое тщательно размешивают и разливают по чашкам по 7 мл.
Сахарно - дрожжевой питательный агар с теллуритом калия. Сухой питательный агар - 35 г, дрожжевой автолизат - 20 мл, глюкоза - 10 г, дистиллированная вода - 1000 мл. Приготовленную смесь расплавляют при нагревании, добавляют лимоннокислого натрия - 5,0 г. Стерилизуют среду при 1120. С в течение 15 минут, рН 7,2-7,4. Перед разливкой среды в стерильные чашки добавляют 50 мл лошадиной сыворотки, 0,1 г налидиксовой кислоты и 0,7 г (35 мл 2% водного раствора) теллурита калия, тщательно размешивают.
Питательный бульон с глюкозой. К 100 мл питательного бульона, рН 7,2-7,4, прибавляют 0,2 г глюкозы.
Приготовленную среду стерилизуют дробно 3 дня подряд по 20 минут или однократно 15 минут при 0,5 атм. в автоклаве.
5% кровяной агар. К 100 мл 2% питательного агара, расплавленного и остуженного до 45 град. С, рН 7,4-7,6, соблюдая правила асептики, добавляют 5 мл дефибринированной бараньей, лошадиной или кроличьей крови. Смесь тщательно перемешивают, разливают в чашки слоем 3-4 мм.