Определение редукции нитритов
Принцип. Метод основан на способности микроорганизмов восстанавливать соли азотной кислоты (нитриты) до аммиака, гидроксиламина, окиси азота, двуокиси азота, молекулярного азота.
Ингредиенты: бактопептон, калий азотистокислый (KNO2), сульфаниловая кислота, альфа - нафтиламин, уксусная кислота - 5 моль/л.
Приготовление нитритного бульона. Берут калий азотистокислый (KNO2) - 0,2 г, добавляют бактопептона - 5,0 г, воды дистиллированной - до 1000 мл, рН 7,4. Нитритный бульон разливают в химически чистые пробирки с поплавками по 5 мл. Автоклавируют при 0,5 атм. (1150 С) в течение 20 минут.
Приготовление реактива Грисса (см. определение редукции нитратов).
Ход исследования. Перед посевом в среду добавляют 20% инактивированной сыворотки. Посевы выдерживают в термостате при 370 С в течение 5-7 дней. После инкубации в каждую пробирку с культурой вносят реактив Грисса (по 0,1 мл смеси равных объемов реактивов 1 и 2, которые смешивают непосредственно перед употреблением).
Оценка результатов. Красное окрашивание - реакция отрицательная; отсутствие красного окрашивания указывает на восстановление нитритов - реакция положительная; наличие газа в поплавке при отсутствии окрашивания, редукция нитритов до газообразных компонентов - реакция слабоположительная.
Определение желатиназы (см. раздел 2.5.)
ГЛАВА 15
МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ ИДЕНТИФИКАЦИИ МИКРООРГАНИЗМОВ РОДА Haemophilus
Род гемофилус (Haemophilus) по международной классификации бактерий (Берги, 1980) охватывает двадцать разнообразных видов мелких неподвижных не образующих спор грамотрицательных палочек.
Наибольший удельный вес среди заболеваний человека, вызываемых гемофилами, принадлежит палочке инфлюэнцы (Haemophilus influenzae). Этот микроб, как потенциальный возбудитель, выделяется от больных при острых, реже хронических, заболеваниях верхних и нижних дыхательных путей (ринитах, синуситах, фарингитах, трахеитах, эпиглосситах, бронхитах, пневмониях, абсцессах, эмпиемах), гнойных менингитах, эндокардитах, сепсисе, воспалениях суставов. H. aphrophilus выделяется при подострых эндокардитах человека; H. aegyptius является причиной тяжелых остро протекающих конъюнктивитов; H. parainfluenzae, H. haemolyticus, H. parahaemolyticus - нормальные обитатели респираторного тракта человека, но при определенных условиях первые два вида могут вызывать эндокардиты, а после вирусных инфекций - вторичные острые заболевания ротовой полости, глотки, трахеи и бронхов. H. ducreyi вызывает мягкий шанкр - венерическое заболевание с четко выраженной клинической картиной. Для диагностики мягкого шанкра применяют в основном микроскопическое исследование содержимого язвы. H. ducreyi - грамотрицательная палочка с характерным расположением в мазках - в виде длинных параллельных цепочек. Форма палочек напоминает восьмерку, челнок; иногда наблюдается полиморфизм. Бактериологическое исследование при мягком шанкре применяют очень редко, процент положительных результатов невысок, биологические свойства микроба изучены недостаточно.
Микробы рода гемофилов, особенно Н. influenzae, чаще являются причиной заболеваний детей раннего и лиц пожилого возраста, вторичных бактерийных инфекций у больных, ослабленных хроническими соматическими, онкологическими заболеваниями.
При культивировании на искусственных питательных средах гемофилы нуждаются в факторах X и V, источником которых является свежая кровь человека и животных. По потребностям в указанных факторах при росте на искусственных питательных средах различные представители гемофилов дифференцируются внутри рода (см. табл. 9). Фактор крови Х - гемин, активизирует пероксидазы, чем стимулирует рост гемофильных бактерий. Фактор крови V - никотинамидадениндинуклеотид восстановленный (HADH) содержится преимущественно в эритроцитах, являясь составной частью витаминов группы В, принимает участие в окислительно - восстановительных процессах при росте клеток.
Наиболее физиологичными средами для гемофилов являются среды с гретой кровью ("шоколадный" агар). Более пышный рост гемофилов на средах с гретой кровью объясняется тем, что нагревание крови способствует освобождению из эритроцитов факторов роста и разрушению присутствующих в ней ингибиторов V фактора.