Mycobacterium leprae
1. Изучение мазка больного лепрой, окрашенного по Цилю-Нильсену (зарисовать)
В мазке, приготовленном из соскоба слизистой носа и окрашенном по методу Циля-Нильсена, видны в большом количестве палочки проказы, окрашенные в малиново-красный цвет в виде характерных образований: шаров, “связок сигар”, расположенных внутриклеточно. Клеточные элементы окрашены в синий цвет, ядро клетки оттеснено к периферии.
2. Изучение схемы диагностики лепры(зарисовать)
Возбудитель лепры вызывает у человека первично хроническое гранулематозное заболевание – проказу. Палочка проказы обладает цитохромоксидазной, фосфатазной и фенолоксидазной активностью. Многократные попытки выделить чистую культуру на искусственных питательных средах оказались безуспешными. Размножение палочек лепры можно наблюдать при заражении мышей в подушечку лапки или девятипоясных броненосцев.
Методы микробиологической диагностики
- бактериоскопический
- биопроба
- лепроминовая проба
Бактериоскопический. При подозрении на лепру основным методом лабораторного исследования является бактериоскопический. Материалом для исследования служат: соскоб слизистой оболочки носа, скарификат пораженного участка кожи, пунктат лимфатических узлов. Соскоб со слизистой оболочки носа проводят осторожно стерильной палочкой или зондом до появления сукровицы. Мазки
делают на нескольких стеклах. Для взятия скарификата, кожу на подозрительном участке обрабатывают настойкой йода, стерильным скальпелем делают небольшой разрез кожи. Со всей поверхности разреза, особенно в глубине, производят легкий соскоб, выделяющуюся тканевую жидкость наносят на чистые предметные стекла. Пунктат лимфатических узлов (обычно пахового и бедренного) берут асептично и готовят тонкие мазки на чистых стеклах. После высушивания на воздухе мазки фиксируют в пламени горелки, после чего окрашивают по методу Циля-Нильсена.
Микобактерии лепры окрашиваются в ярко-малиновый цвет, клеточные элементы – в синий. В лепрозных поражениях имеются характерные “лепрозные” клетки овальные или круглые, наполненные кислотоустойчивыми микобактериями, характерно расположенными в виде скоплений. Ядро клетки оттеснено к периферии. Большие, сильно раздутые клетки с бактериями носят название лепрозных шаров. Лепрозные микобактерии нужно дифференцировать с микобактериями туберкулеза. Микобактерии лепры более легко окрашиваются фуксином и более легко обесцвечиваются кислотой. Положительные находки подкрепляют клинический диагноз. Отрицательный результат микроскопии не может служить критерием для исключения диагноза лепры. В таких случаях делают биопсию подозрительных участков и проводят гистологическое исследование препаратов.
Биопроба. Биопробу на белых мышах применяют для накопления микобактерий лепры. Для этого гомогенизированным материалом заражают белых мышей в подушечку задней лапки. Предварительно мыши получают иммунодепрессанты. В положительных случаях на месте введения через несколько месяцев развивается инфильтрат, содержащий гранулемы, в которых содержится небольшое количество внутриклеточно лежащих бактерий лепры. Большее количество клеток получают при заражении материалом девятипоясных броненосцев, у которых возникает генерализо-ванная инфекция.
Аллергодиагностика . Лепроминовая проба. Внутрикожную пробу с лепромином применяют для дифференциации клинических форм лепры. Лепромин представляет собой гомогенат кожных поражений при лепроматозной форме, обработанный в автоклаве. Его вводят внутрикожно в объеме 0,1 мл. Через 48 часов на месте введения может появиться пятно или папула (положительная реакция Фернандеса), а через 2–4 недели – бугорок, нередко с некрозом (реакция Мицуды), что указывает на благоприятный прогноз и характерен для туберкулоидной формы проказы, а также для здоровых людей. Отрицательная проба с лепромином характерна для больных с лепроматозной формой.