Окраски основным фуксином
Методики выявления микробной флоры в гистологических микропрепаратах
(А.В.Цинзерлинг: Современнные инфекции.Патологическая анатомия и вопросы патогенеза.Санкт-Петербург,СОТИС,1993.с.20-26)
После депарафинирования срезов(три порции ксилола,затем этанол нисходящей концентрации, окрашенные срезы заключаются в бальзам(быстрое осушение фильтровальной бумагой,быстрое обезвоживание 96% этанолом,просветление ксилолом
и заключение в бальзам).
Выявление возбудителей с помощью световой микроскопии.
1.Окраска метиленовым синим по Леффлеру:
-срез поместить в краситель(30 мл насыщенного, примерно 10%-го спиртового р-ра
метиленового синего + 100 мл 0,015-го едкого калия) на 5-10 мин,
-дифференцировать в 0,25-0,5% р-ре уксусной кислоты под контролем микроскопа-
несколько секунд)
-сполоснуть водой
-заключить в бальзам.
2.Окраска тионином по Нисслю:
-срез поместить в краситель(1 мл насыщенного, примерно 10%-го спиртового р-ра
тионина+ 10 мл 1%-го водного фенола) на 3-10 мин
-обезводить и дифференцировать 96% этанолом под контролем микроскопа 0,5-2 мин.
-заключить в бальзам.
РЕЗУЛЬТАТЫ: При обеих окрасках ядра клеток окрашиваются отчетливо,цитоплазма клеток и остальные компоненты тканей почти не видны.Выявляются грамположительная и грамотрицательная флора,причем первая окрашивается интенсивнее.
Окраски основным фуксином.
Возможно несколько вариантов окраски,в основе которых лежит применение насыщенного примерно 10%-го р-ра основного фуксина на 96% этаноле(НРОФ).
3а. Окраска по Пфейферу:
-срез поместить в краситель(0,1 мл НРОФ + 100 мл 5% водного фенола) на 5 мин.
-сполоснуть водой
-дифференцировать разведенным солянокислым этанолом-1 часть соляно-кислого
этанола(1% соляная кислота в 70% этаноле) на 4 части дистиллированной воды
(дважды налить)
-смыть водой
-заключить в бальзам.
РЕЗУЛЬТАТЫ: Ядра клеток и бактериальная флора,особенно грамположительная,окрашиваются в малиновый цвет,цитоплазма клеток и другие компоненты клеток почти не видны.
3б Окраска по Цилю-Нильсену:
-срез покрыть фильтровальной бумагой(ее края не должны заходить за край стекла)
на бумагу налить раствор карболового фуксина(1 часть НРОФ на 10 частей 5%-го
водного фенола),срез подогреть до появления паров,оставить краску на срезе еще на
20-30 минут или срез без подогревания оставить в красителе на 15-18 часов
-снять бумагу,сполоснуть срез в воде
-дифференцировать в 1%-м соляно-кислом спирте(1 часть солянокислого этанола-
1% соляная к-та в 70% этаноле на 4 части дистиллированной воды) до бледно-розо-
вого цвета
-промыть в воде
-окрасить гематоксилином или метиленовым синим по Леффлеру
-сполоснуть в воде
-заключить в бальзам
РЕЗУЛЬТАТЫ:ткань красится гематоксилином или метиленовым синим,кислото- и спиртоустойчивые бактерии(в частности,туберкулезные),и ооцисты криптоспоридий-малиновые.
3в Окраска основным фуксином-метиленовым синим.
Окраска применяется главным образом для мазков,но применима при парафиновой проводке,если не загрязнены спирты.
-срез поместить в краситель(10 мл дистиллированной воды ,к которой добавлены
1-2 капли НРОФ и 3-4 капли насыщенного примерно 10%-го р-ра метиленового
метиленового синего.Смесь красок имеет синий цвет с фиолетовым оттенком.Р-ры приготавливаются по Селлеру на этаноле,при модификации Павловского-на метаноле:до употребления они должны созревать не менее 1 недели в теплом месте)на 0,5-5 мин под контролем микроскопа
-заключить в бальзам.
РЕЗУЛЬТАТЫ:ядра сине-фиолетовые,цитоплазма сиреневая,микроорганизмы синие(более темная грамположительная флора и светлее-грамотрицательная)Кроме того,при ОРВИ в цитоплазме пораженных клеток выявляются малиново-красные ФВ-включения.