Методы выявления геликобактеров(Л.И.Аруин.Хронический гастрит.Амстердам,1993,с.298
12а Метод Вартин-Старри
Фиксация в 10% формалине,проводка парафин.
Приготовление растворов:
1.Подкисленная вода-трижды дистиллированной воды 1000 мл
лимонной кислоты 10 г
2.Раствор нитрата серебра:нитрат серебра 2,0 г
подкисленная вода 100,0 мл
Для приготовления 1%-го раствора добавить равный объем подкисленной воды
3.Раствор гидрохинона:гидрохимнон 0,15г
подкисленная вода 100 мл
4.Раствор желатина:особо чистый желатин 10,0 г
подкисленная вода- 200 мл
5.Проявитель: 2% раствор нитрата серебра-1,5 мл
5% раствор желатина -3,75 мл
0,15% раствор гидрохинона -2,0 мл
растворы подогреть до 50-60 град.С,смешать в указанном порядке,использовать немедленно
Окраска:
1.Депарафинированные срезы довести до подкисленной воды
2.1% раствор нитрата серебра при 55-60 град.С-30 мин.
3.Проявитель-3-5 мин(срезы ставновятся коричневыми)
4.Промыть в теплой воде(55-60 град),затем в дистиллированной воде
5.Обезвоживание,просветление,бальзам.
РЕЗУЛЬТАТЫ:Геликобактеры черные,хорошо видна их изогнутая форма,фон-желтовыатый или кориневый
12б 2-й метод Вартин-Старри
1.Депарафинированные срезы помещают в раствор,содержащий 20,0 мл 5 г на л
азотнокислого серебра в ацетатном буфере рН 4 и облучают 1 мин микроволновым
процессором.
2.Без отмывания срезы переносят в свежеприготовленный проявитель(10 20 г на литр азотнокислого серебра + 50 г желатины+14 мл 1,5 г на литр гидрохинона в ацетатном
буфере в ацетатном буфере при рН 4 при 60 град.С,промывают в ацетатном буфере при 60 град.и в дистиллированной воде
3.Фиксируют в 30г на литр тиосульфата натрия
4.Промывают,фиксируют,обезвоживают,заключают в бользам
РЕЗУЛЬТАТЫ:геликобактеры окрашиваются в черный цвет
12в Метод Гимзы:
Растворы:
1 Основной раствор:Краска Гимзы-1,0г,глицерин-54 мл,спирт 96%-84 мл(профильтровать)
2.Рабочий раствор:основной раствор-1,0 мл,дистилл.вода -38,0 мл,0,1% раствор углекислого калия-2,0 мл
ОКРАШИВАНИЕ:
1.Депарафинированные срезы в дистилл.воду на 10-15 мин
2.Рабочий раствор 20 мин
3.Промывка в дистиллир.воде.Обезвоживание,просветление,бальзам
РЕЗУЛЬТАТЫ6геликобактеры окрашиваются в синий цвет
12г Метод с карболовым фуксином:
Реактивы:
Основной фуксин 0,4 г+фенол кристалл. 2,0 г,+абсолютный спирт 4,0 мл,+дистилл.воды 100,0 мл
Окрашивание:
1.Депарафинированные срезы в краситель на 5 мин
2.Ппромыть в проточной воде
3.Промыть в ацетоне
Срезы можно не заключать и просматривать под иммерсией
РЕЗУЛЬТАТЫ:геликобактеры темно-красные
12д Окраска толуидиновым синим:
Реактивы:
Натрия ацетат 1,943 г,натрия барбитурат 2,943 г,дистиллированной воды до 100 мл(основной раствор)
К 10 мл основного раствора добавить 22 мл М:10 раствора соляной кислоты,
18 мл дистиллированной воды и 1 мл 1%-го толуидинового синего О
А-двуосновной ацетат натрия(№ НСО )-9,465 г
дистиллир.воды до 1 л
Б-кислый фосфат калия(КН РО )-9,08
дистилл.воды до 1 л
К 25 мл раствора А добавить 25 мл раствора Б и 1 мл 1% толуидинового синего.
Продолжительность окрашивания 10-15 мин
РЕЗУЛЬТАТЫ:геликобактеры и ядра клеток в т.ч.,ПМЯ лейкоцитов окрашиваются в темно-синий цвет,фон слабый.