Справочные и теоретические материалы. Боррелии (Borrelia) — тонкие извитые бактерии (спирохеты) к роду Borrelia

Боррелии (Borrelia) — тонкие извитые бактерии (спирохеты) к роду Borrelia. Вызывают боррелиозы (болезнь Лайма, эпидемический и эндемический возвратные тифы). Передаются человеку через укусы членистоногих (вшей, клещей). Род Borrelia насчитывает около 40 видов, из которых в патологии человека наибольшее значение имеют: В. recurrentis (возбудитель эпидемического возвратного тифа), В. burgdorferi, В. garimii, B.afzelii (возбудители болезни Лайма), В. duttonii, В. persica и др. (возбудители эндемического возвратного тифа). Типовой вид – В. anserina. Обитают у вшей, клещей, грызунов. Боррелии имеют форму тонкой спирали с тремя крупными завитками с заостренным концом. Они окрашиваются краской Романовского-Гимза в сине-фиолетовый цвет, грамотрицательны. Боррелий – строгие анаэробы. Их культивируют на питательных средах, с животными белками (сыворотка крови, асцитическая жидкость, кусочки паренхиматозных органов или свернутый яичный белок). Хорошо размножаются в куриных эмбрионах. Поверхностные антигены чрезвычайно вариабельны вследствие внутригеномных рекомбинаций. Поэтому серологическая идентификация боррелий не может иметь практического значения.

В инвазии В.recurrentis участвует белок наружной мембраны. После проникновения в клетки лимфомакрофагальной системы боррелии размножаются в них, а затем поступают в кровяное русло. Компоненты клеточной стенки, которые освобождаются при лизисе боррелий, оказывают токсическое действие по типу эндотоксина. Поступление боррелий в кровь является причиной первого лихорадочного приступа. В крови больного в этот период накапливаются спирохетолизины, которые лизируют боррелии с освобождением эндотоксина. При этом часть боррелий с измененной антигенной структурой сохраняется и дает новую генерацию, нечувствительную к образовавшимся антителам. При повторном поступлении возбудителя в кровь начинается второй приступ. Одновременно образуются спирохетолизины, растворяющие вторую генерацию боррелий. Такие приступы болезни повторяются 5–6 раз, вызываемые новыми генерациями боррелий с измененной антигенной структурой. Эти приступы повторяются до прекращения поступления в кровь генераций боррелий с измененной антигенной специфичностью, после чего наступает выздоровление больного. В капиллярах внутренних органов под влиянием антител могут образоваться аггрегаты боррелий и тромбоцитов, в результате чего нарушается местное кровообращение с развитием геморрагических инфарктов. При возвратном тифе наблюдается гуморальный иммунный ответ. Постинфекционный иммунитет нестойкий. Регистрируются случаи повторных инфекций.

Резервуаром инфекции в природе является больной человек. Переносчик – платяная вошь. Боррелии вместе с кровью попадают в кишечник вши и размножаются в гемолимфе. Заражение человека возможно только при втирании гемолимфы при расчесах. Для вшей боррелии непатогенны и сохраняются в течение всей жизни насекомого. Трансвариально не передаются.

Основной метод лабораторной диагностики возвратного тифа – микроскопическое исследование крови больного в препарате толстой капли и обычном мазке. Для дифференциации вшивого и клещевого поворотных тифов используют биологическую пробу на гвинейских свинках. У больного берут кровь из пальца во время нападения лихорадки до начала или в перерыве антибиотикотерапии, изготавливают препарат толстой капли и мазок. В период ремиссии можно брать для исследования костный мозг. Высушенную толстую каплю не фиксируют, а непосредственно окрашивают по методу Романовского-Гимза. Можно красить метиленовым синим или фуксином. На толстую каплю наносят краситель Романовского сначала на 5 мин для того, чтобы прошел гемолиз, потом его заменяют на свежий и выдерживают еще 40 мин. Препарат осторожно промывают водой, высушивают и микроскопируют под иммерсионным объективом. Борелии возвратного тифа окрашиваются в сине-фиолетовый цвет и имеют вид тонких длинных нитей с 3–5-ю неравномерными завитками и заостренными концами, расположенных внеклеточно. Величина их в несколько раз превышает диаметр лейкоцитов. Если в толстой капле находятся большие скопления боррелий, их трудно отличить от нитей фибрина. В таких случаях окрашивают обычный мазок крови, перед этим обязательно фиксируют этанолом или смесью Никифорова. При микроскопии мазка достаточно четко видно боррелии с их характерными неравномерными вторичными завитками.

Возбудитель возвратного тифа легко обнаруживают с помощью метода висячей капли в темном поле зрения, где боррелии распознают по их беспорядочным движением. Можно изготавливать из крови и тушевых препараты по Бурри, при микроскопировании которых боррелии выглядят как серебристые нити на темном поле.

В период апирексии с помощью микроскопических методов выявить боррелии не удается. В таких случаях употребляют метод обогащения. У больного берут 8–10 мл крови, отбирают сыворотку, которую центрифугируют в течение 60 мин при 3–4-х тыс. об / мин. Из осадка производится надавленная капля, которую исследуют в темном поле. Из осадка можно изготавливать мазки, которые окрашивают по Романовскому-Гимзе или фуксином Пфейфера.

Культуры боррелий можно выделить от больного путем посева исследуемого материала на жидкие питательные среды с кровью, сывороткой, кусочками тканей и выращивания в анаэробных условиях при температуре 28–30 ° С.

Еще лучше удается вырастить их на хорионаллантоисной оболочке куриных эмбрионов или путем заражения платяной вшей. Однако выделение культур боррелий на питательных средах малоэффективно. Практические лаборатории этими методами не пользуются.

Как дополнительный метод диагностики эпидемического возвратного тифа применяют заражения кровью больных молодых белых крыс или белых мышей. Последним вводят 0,5 мл крови внутрибрюшинно, а белым крысам – 3–5 мл. Через 2–4 дня у зараженных животных исследуют кровь хвостовых вен, где боррелии проявляют микроскопическим методом. Гвинейские свинки нечувствительны к В. recurrentis, но чувствительны к возбудителям клещевых боррелий.

Иногда использовали иммунологическую реакцию Рикенберга-Брусин. Это реакция нагрузки боррелий тромбоцитами. Сыворотку крови больного смешивали с цитратной плазмы крови гвинейских свинок в одинаковых объемах. К этой смеси добавляли культуру боррелий, тщательно перемешивали, инкубировали 15 мин в термостате, а затем изготавливали препарат "надавленные капли" и исследовали в темном поле зрения с иммерсионным объективом. В присутствии специфических антител тромбоциты гвинейской свинки облепляли тела боррелий и последние переставали двигаться. Следовательно, выявление боррелий методом толстой капли и обычных мазков крови в период приступа лихорадки является быстрым и решающим методом лабораторной диагностики эпидемического возвратного тифа.

Спирохеты содержат несколько мембранных липопротеинов, включая Osp (outer surfase proteins – протеины наружной мембраны), которые обозначаются латинскими буквами от А до F. Именно данная группа липопротеинов лежит в основе серотипирования боррелий и конструирования вакцинных препаратов.

На протяжении длительного времени клещи рассматривались как переносчики достаточно узкого круга возбудителей инфекционных заболеваний, относящихся к группе природно-очаговых инфекций. Именно в силу ограниченности распространяемых возбудителей в центральных регионах России им не придавалось большого эпидемиологического значения. Ситуация изменилась только в 80-х гг. ХХ столетия, после того как в США из иксодовых клещей был изолирован новый возбудитель – B. burgdorferi – и была установлена его этиологическая роль в развитии нового заболевания, получившего название «лайм-боррелиоз». Данное заболевание встречается на территориях тех стран, которые являются ареалом распространения иксодовых клещей.

Иксодовые клещевые боррелиозы (ИКБ) представляют собой полиэтиологическую группу зоонозных инфекций из группы спирохетозов, передающихся через укусы иксодовых клещей и характеризующихся склонностью к затяжному и хроническому течению. Возбудителями ИКБ являются представители комплекса геновидов Borrelia burgdorferi sensu lato, относящиеся к роду Borrelia. Патогенные для человека геновиды – это Borrelia burgdorferi sensu stricto, Borrelia afzelii, Borrelia garinii. ИКБ является классическим природно-очаговым заболеванием. Естественным «природным резервуаром» являются многие млекопитающие и птицы, которые, по сути, и кормят клещей. Наибольшее значение в сохранении и циркуляции боррелий в природе имеют мелкие грызуны, что связано с биологическим циклом развития иксодовых клещей. Клещи являются только переносчиками боррелий, а трансовариальный путь передачи возбудителя регистрируется очень редко. Таким образом, каждая новая генерация клещей должна заново инфицироваться боррелиями. Личиночная стадия, будучи малоактивной в поисках прокормителей, обычно обитает в норах мелких грызунов и в гнездах птиц. После инфицирования боррелии очень быстро диссеминируют в организме личинок, попадая в слюнные железы. С этого момента все последующие стадии клеща способны при кровососании передавать боррелии.

Инфицирование людей может происходить только при укусе нимфы или имаго (половозрелой формы клеща). На территории России распространены I. ricinus, I. рersulcatus. Инфицироваться могут и домашние животные, включая мелкий и крупный рогатый скот, существование иных механизмов заражения людей, кроме трансмиссивного, не доказано. Поскольку укус клеща безболезненный, только около 50% больных с установленным диагнозом ИКБ указывают на факт присасывания клеща. Восприимчивость людей к боррелиям высокая. Заболеваемость регистрируется во всех возрастных группах, но чаще болеют лица трудоспособного возраста, в отношении которых можно говорить о профессиональном факторе (охотники, фермеры, работники лесных хозяйств и др.). Заражение городского населения происходит, как правило, в пригородной зоне и связано с сезонными работами на садово-огородных участках, поездками за ягодами, грибами и т. д. В литературе имеются сведения о том, что в городских лесопарковых зонах могут обнаруживаться зараженные боррелиями иксодовые клещи. Иммунитет при ИКБ нестерильный, видоспецифический. Возможны повторные случаи заражения.

Патогенез. Многие стороны патогенеза ИКБ по-прежнему недостаточно изучены. Учитывая склонность заболевания к затяжному и хроническому течению, расшифровка именно этих механизмов имеет наибольшее практическое значение. В месте инокуляции боррелий происходит их первичное накопление, чему способствуют ингибирование фагоцитоза компонентами слюны клещей и отсутствие специфических антител. Накопление возбудителя в месте входных ворот сопровождается развитием местного воспалительного процесса, что соответствует клинической стадии локализованной инфекции. Из-за медленного формирования естественного иммунитета (максимальные титры антител класса IgM регистрируются только к третьей–шестой неделе болезни, а антител класса IgG – к 1,5–3 мес от начала болезни) достаточно быстро происходит гематогенная диссеминация боррелий, характеризующаяся поражением других органов и систем. Боррелии способны преодолевать гематоэнцефалический барьер, вызывая поражение ЦНС. Благодаря способности боррелий к внутриклеточному паразитированию у больных регистрируется длительная персистенция возбудителя, которая предопределяет развитие иммунопатологических реакций, лежащих в основе хронических форм заболевания. Инкубационный период при ИКБ варьирует от 5 дней до 1 мес (в среднем 2–3 нед). Ранний период (до 6 мес) включает локализованную (от неск. дней до 4 нед) и диссеминированную (1–6 мес) стадии. Поздний период (свыше 6 мес) включает персистирующую (6 мес–годы) и резидуальную (постлаймский синдром) стадии.

Диагностика. Ввиду полиморфизма клинических проявлений, склонности к затяжному и хроническому течению, диагностика ИКБ может представлять определенные трудности, поэтому она должна основываться на совокупности эпидемиологических, клинических и лабораторных данных. Рутинные методы исследований при ИКБ практически не информативны. На основании клинико-эпидемио-логических данных (без лабораторной верификации) диагноз ИКБ может быть установлен только в локализованной стадии, при наличии у больного следующих критериев: а) документированный укус иксодового клеща; б) развитие в сроки от 5 дней до 4 нед, от момента укуса клеща, зоны эритемы в месте присасывания клеща; в) развитие типичной мигрирующей эритемы диаметром не менее 5 см. Использование серологических методов диагностики на этой стадии процесса имеет ограниченное применение в виду поздних сроков выработки антител. Все остальные стадии заболевания требуют обязательной лабораторной верификации, включающей проведение серологического исследования. В качестве серологических методов в РФ применяются реакция непрямой иммунофлюоресценции (н-РИФ), ИФА. Материалом для исследования могут служить сыворотка крови и синовиальная жидкость, что определяется вариантом течения заболевания. Несмотря на возможность культивирования боррелий на селективной питательной среде Barbour-Stoenner-Kelly (BSK), бактериологический метод в широкой клинической практике не используется из-за значительных методологических трудностей. Косвенным указанием на возможность инфицирования человека может служить обнаружение боррелий при темнопольной микроскопии в клещах, снятых с пациента.

Терапия. Этиотропная терапия больным ИКБ показана вне зависимости от стадии, варианта и тяжести течения заболевания. Проведение этиотропного лечения персистирующей стадии болезни целесообразно только в периоде обострения. Курс и длительность антибактериальной терапии зависят от стадии и варианта заболевания. На сегодняшний день не существует единых общепринятых стандартов по проведению этиотропной терапии. Ни одна из ныне действующих схем антибактериальной терапии не гарантирует полной элиминации возбудителя. Способ введения антибиотиков (пероральный или парентеральный) определяется вариантом течения ИКБ. Необходимым условием проведением этиотропной терапии является ее длительность (не менее 14–21 дней при пероральном применении и не менее 14–28 – при парентеральном). В качестве препарата первого выбора стартовой терапии ИКБ выступает доксициклин (юнидокс солютаб, вибрамицин, доксициклин, доксициклин-АКОС, медомицин, тетрадокс), назначаемый по 200 мг per os в сутки (2 раза в день). После перенесенного заболевания больной должен находиться на диспансерном наблюдении не менее 2 лет с проведением полного клинико-лабораторного обследования. Средства специфической профилактики отсутствуют.

Leptospira

 

1. Вопросы по теме занятия 12 для самостоятельного изучения их студентами:

1. Род и вид возбудителей лептоспирозов по лытыни

2. Какова морфология лептоспир?

3. Каковы культуральные свойства лептоспир?

4. Какова устойчивость лептоспир во внешней среде?

5. Кто является источником лептоспир?

6. Каковы пути передачи лептоспир?

7. Каков патогенез лептоспироза?

8. Какой формируется иммунитет при лептоспирозе?

9. Какие антитела образуются при лептоспирозе?

10.Что является исследуемым материалом при лептоспирозах?

11.Каковы методы исследования при лептоспирозах?

12.Какие препараты применяются для профилактики лептоспироза?

13.Какие препараты используются для лечения лептоспироза?

2. Дома студенту необходимо письменно ответить на следую-щие вопросы (домашняя работа сдается преподавателю на занятии):

4.Основной путь передачи лептоспир

5.Основной метод диагностики лептоспироза

6.Специфические лечебно-профилактические препараты при лептоспирозе (заполнить таблицу 24):

Таблица 24