Основные методы исследования системы комплемента и их клиническое значение.
Система комплемента –этоферментативная система сыворотки крови, главной функцией которой является лизис антигенов. Белки, входящие в систему комплемента, называются компонентами комплемента. До активации компоненты комплемента находятся а неактивной форме.
Система комплемента является одним из основных неспецифических гуморальных факторов защиты организма. Компоненты комплемента и рцепторы для них, а также образующиеся в процессе активации фрагменты и комплексы участвуют во многих процессах, они вызывают:
-непосредственное уничтожение микроорганизмов путем лизиса;
-усиление фагоцитоза;
-активацию и хемотаксис лейкоцитов в очаг воспаления;
-нейтрализацию некоторых вирусов;
Удаление иммунных комплексов.
В настоящее время известно 3 механизма активации системы комплемента:
· Классический путь;
· Альтернативный путь;
· Лектиновый путь.
· Комплемент - это группа сывороточных белков, состоящая из протеаз и их активаторов. Существуют два механизма активации комплемента - классический и альтернативный . Комплемент играет важную роль в защите от микробов, активирует катаболизм циркулирующих иммунных комплексов и участвует в регуляции функций иммунной системы.
· Определение гемолитической активности комплемента . Для исследования компонентов классического пути активации комплемента определяют его гемолитическую активность. Суть метода заключается в следующем:
· - разные разведения сыворотки больного и нормальной сыворотки добавляют к эритроцитам барана, покрытым антителами;
· - степень гемолиза оценивают фотометрически по выходу гемоглобина в раствор.
· За единицу гемолитической активности комплемента принимают величину, обратную тому разведению сыворотки, при котором разрушаются 50% эритроцитов.
· Существуют модификации метода, основанные на применении небольших объемов исследуемой сыворотки. Определение гемолитической активности комплемента по 100% гемолизу основано на гемолизе в геле. Суть этого метода заключается в следующем:
· - в геле, содержащем покрытые антителами эритроциты барана, делают лунки;
· - в лунки вносят разные разведения исследуемой и нормальной сывороток;
· - гемолитическую активность комплемента оценивают по диаметру зон гемолиза.
· Активность комплемента зависит от целого ряда факторов, поэтому нарушение правил забора и хранения сыворотки обычно приводит к ошибочным результатам исследования.
· Определение гемолитической активности комплемента позволяет обнаружить недостаточность компонентов комплемента , прежде всего участвующих в образовании мембраноатакующего комплекса. Кроме того, оценка этого показателя может использоваться для выявления активации комплемента, например при СКВ и гломерулонефрите , хотя чувствительность метода для этого недостаточно высока.
· Оптимальный метод выявления активации комплемента заключается в определении продуктов расщепления его компонентов.
· Альтернативный путь активации комплемента исследуют редко.
· Определение компонентов комплемента обычно проводят при обследовании больных саутоиммунными заболеваниями и при подозрении на генетический дефект комплемента .
· Количественное определение компонентов комплемента в большинстве лабораторий проводят с помощью простой радиальной иммунодиффузии и нефелометрии . Однако если функциональный дефект компонентов комплемента не сопровождается изменением их антигенных свойств, эти методы неинформативны. Так, у 15% больных с наследственным отеком Квинке количественные методы исследования выявляют нормальный уровень ингибитора С1-эстеразы, в то время как его активность снижена.
· Функциональные исследования позволяют оценить активность отдельных компонентов комплемента в сыворотке. Оценку активности компонентов комплемента проводят следующим образом:
· - к стандартной сыворотке, лишенной какого-либо компонента комплемента, добавляют исследуемую сыворотку (источник недостающего компонента комплемента);
· - определяют гемолитическую активность комплемента.
· Если гемолитическая активность комплемента не восстанавливается до нормы, значит активность этого компонента комплемента в исследуемой сыворотке снижена. Иногда дополнительно оценивают активность регуляторных компонентов комплемента, например ингибитора С1-эстеразы.
· Исследование активности компонентов комплемента проводится только в специализированных лабораториях.