Тема 2.9.1: «Коринебактерии дифтерии».
Методические указания
По теме 2.9. «Патогенные возбудители воздушно-капельных
бактериальных инфекций»
Тема 2.9.1: «Коринебактерии дифтерии».
1. Таксономия:
Отделу Firmicutes, семейству Corynebacteriaceae,
род Corynebacterium относятся следующие виды:
патогенный для человека и животных вид – C.diphtheriae
коринебактерии, патогенные для растений;
непатогенные коринебактерии:
а) дифтероиды – C. xerosis
б) псевдодифтерийные палочки (ложнодифтерийные палочки
Гоффмана) – C. рseudodiphtheriticum (hoffmani)
2. C.diphtheriaeвызывают у человека дифтерию – острую инфекцию дыхательных путей, которая характеризуется образованием в зеве и слизистой носа серовато-белых наложений (пленок), спаянных с подлежащей тканью. В зависимости от входных ворот и локализации возбудителя в организме различают следующие формы заболевания: дифтерия зева, носа, гортани, трахеи, бронхов, глаз, уха, кожи, наружных половых органов у девочек, раневой поверхности.
3. Материал для исследования: отделяемое слизистой оболочки зева, носа, глаза, влагалища, раны, уха, а также секционный материал и дифтерийные пленки (при наличии).
4. Элективные питательные среды и характер роста:
Среда Клауберга (КТА, кровяно-теллуритовый агар) является основной средой для выделения C.diphtheriae, на которой они образуют различные колонии в зависимости от биовара.
vargravis (грубый, шероховатый) – формирует плотные сухие шероховатые (R-формы), розеткообразные колонии диаметром 1,5-2 мм, с волнистым краем серого или темно-серого (черного), цвета. Колонии – хрупкие – при раздавливании петлей они крошатся на мелкие кусочки. Их можно также «двигать» петлей по поверхности агара без нарушения целостности. Они не дают гемолиза.
var mitis (гладкий, тонкий) – образует серые матовые колонии диаметром 1,5-2 мм с ровным краем и гладкой поверхностью, блестящие (S-формы). Характерна вариабельность размеров колоний. Дают небольшую зону гемолиза.
var intermedius – образует колонии RS-формы: мелкие, серые, прозрачные колонии диаметром 0,5-1 мм.
На среде Тинсдаля-Садыковой («Т», сывороточный агар с теллуритом калия и циститом) – рост такой же, как на среде Клауберга, кроме того, вокруг колоний всех биоваров образуется темно-коричневый ободок.
5-10% кровяной агар – растут как на среде Клауберга, только mitis без гемолиза.
20% сывороточный агар – растут как на среде Клауберга, только без гемолиза.
Среда Бучина (хинозольная, дифференциально-диагностическая среда) – колонии C.diphtheriae фиолетового цвета, а колонии C.xerosis и C. hoffmani – бесцветные или голубоватые на фиолетовом фоне среды.
На сывороточном и сахарном бульонах биовар gravisобразуетпленку и зернистый осадок;биовар mitis – диффузное помутнение;биовар intermedius – муть и зернистый осадок.
Чистую культуру коринебактерий выделяют на скошенных элективных средах Ру (свернутая лошадиная сыворотка) и Лёффлера (3 части бычьей сыворотки и 1 часть сахарного бульона), которые выглядят одинаково – косячки белого цвета. Можно использовать и 20% сывороточный скошенный агар.
На средах Ру, Лёффлера –коринебактерии дифтерии через 8-14 часов вырастают в виде изолированных небольших (точечных) выпуклых желтовато-кремовых колоний с гладкой или слегка зернистой поверхностью, напоминающих «шагреневую кожу».
5. Методы лабораторной диагностики:
1. Бактериологический – основной
2. Микроскопический
3. Серологический
4. Кожно-аллергический
5. Биологический
6. ПЦР - диагностика
6. Тесты идентификации C.diphtheriae:
1. Учитывают результаты пробы на токсигенность (с колониями) и дают предварительный ответ.
2. Проверяют однородность чистой культуры, т.е. делают мазок со скошенной элективной среды, окрашивают по Леффлеру и микроскопируют.
3. Делают посев чистой культуры на короткий «пестрый» ряд Гисса (сахароза, глюкоза, крахмал, мочевина) 37оС 24 часа.
4. Посев чистой культуры в столбик среду Пизу для определения цистиназной активности 37оС 24 часа.
5. Проводят серологическую идентификацию культуры путем постановки РА на стекле с поливалентной агглютинирующей дифтерийной сывороткой.
6. Повторяют пробу на токсигенность с чистой культурой 37оС 24 часа.
7. Делают пробу на чувствительность к антибиотикам методом диффузии в агар с применением бумажных дисков 37оС 24 часа.