Развитие отека при снижении онкотического давления крови (перфузионной жидкости
Двух лягушек обездвиживают, фиксируют на дощечке на спине. Вскрывают грудную полость и обнажают сердце. В левую дугу аорты ввязывают канюлю и заполняют ее раствором Рингера с гепарином, другую дугу аорты перевязывают. Для обеспечения перфузии перерезают брюшную вену. Затем лягушек вместе с дощечками взвешивают, укрепляют в лапках штативов; канюли соединяют с перфузионными системами, одна из которых заполнена раствором Рингера, другая - лошадиной сывороткой.
Открывают зажимы на перфузионных системах и регулируют ток жидкости так, чтобы первоначальная скорость ее вытекания была одинаковой. Перфузию лягушек проводят в течение 30-40 мин. Затем, вынув дощечки с лягушками из зажимов и удалив свободную жидкость, лягушек снова взвешивают; отмечают отечность и значительное увеличение веса лягушки, которую перфузировали раствором Рингера.
Реакция бласттрансформации лимфоцитов
Бласттрансформация лимфоцитов - фактически, это размножение делением лимфоцитов в результате контакта с антигеном или аллергеном.
Для постановки реакции бласттрансформации in vitro у больного в асептических условиях берут 5-10 мл крови в пробирку, содержащую 100-200 ЕД гепарина, осторожно перемешивают и помещают на 60 мин в термостат при температуре 37°С для осаждения эритроцитов. После инкубации надосадочный слой плазмы отсасывают в стерильную пробирку. Определяют число лимфоцитов в 1 мкл.
Затем взвесь лимфоцитов разводят питательной средой 199 таким образом, чтобы в 1 мл содержался 1-2 млн лимфоцитов. Приготовленную лимфоцитарную взвесь разливают в стерильные флаконы по 1 мл, добавляют 0,1 мл предварительно оттитрованного аллергена. Флаконы закрывают пробирками и помещают в термостат при температуре 37°С на 72 часа.
Затем готовят мазки, фиксируют и окрашивают по Романовскому. Интенсивность бласттрансформации оценивается путем подсчета бластных клеток на 1000 клеток и определения их процентного содержания.
Реакция оценивается как положительная, если число бластных форм не менее 4% от общего числа культивируемых клеток; максимальное число бластных клеток при действии специфического аллергена может достигать 35%.
Реакция гладкомышечного органа сенсибилизированного животного при контакте с аллергеном (по Шульцу-Дейлу)
Исследование проводят на отрезке изолированной тонкой кишки. Препарат длинной 3-4см готовят из проксимального отдела тощей кишки морской свинки, сенсибилизированной лошадиной сывороткой. С обоих концов на кишку накладывают лигатуру, одну из которых закрепляют на стеклянном крючке, опущенном в сосуд, заполненный раствором Тироде. Другую лигатуру соединяют с миографом для записи сокращений кишки на кимографе. Включают кимограф и в раствор Тироде добавляют сыворотку крови собаки (неспецифический аллерген) и отмечают отсутствие сокращений отрезка кишки. Раствор Тироде заменяют свежим, вводят в него 1-2 мл лошадиной сыворотки (специфический аллерген), отмечают резкое сокращение отрезка кишки.
Реакция Овери.
Морскую свинку наркотизируют, фиксируют на препаровальном столике на спине, тщательно выстригают шерсть на животе. Пассивную сенсибилизацию кожи осуществляют путем внутрикожного введения кроличьей антисыворотки по 0,1 мл в разведениях 1:1; 1:10; 1:100 с интервалом в 1 см по средней линии живота. Для контроля отдельно в ту же область вводят 0,1 мл физиологического раствора. Через 1-2 часа после этого животному вводят внутривенно 1 мл лошадиной сыворотки (антиген) вместе с 1 мл 2% раствора синего Эванса. Спустя 10-20 мин после инъекции иссекают кожу на животе, на внутренней поверхности отмечают появление окрашенных в синий цвет пятен разной величины. Реакция считается положительной, если диаметр окрашенного пятна в месте инъекции сыворотки составляет не менее 5 мм.
Стадии нарушения микроциркуляции при остром воспалении (опыт Конгейма)
Лягушку обездвиживают и фиксируют ее к дощечке на спине. Кожу и мышцы в нижней половине брюшной стенки справа разрезают ножницами, пинцетом осторожно захватывают петлю кишечника и растягивают брыжейку над круглым отверстием дощечки. Петлю кишечника закрепляют булавками. Под малым увеличением в брыжейке наблюдают кровоток. Через 5-10 мин в результате подсыхания в брыжейке развивается острый воспалительный процесс, характеризующийся вначале артериальной гиперемией. Артериальная гиперемия через 30-40 мин после извлечения брыжейки сменяется венозной гиперемией. Продолжают наблюдать прогрессирующее замедление кровотока, которое переходит в стаз.
Прикрыв брыжейку, рассматривают ее при большом увеличении. В венах и капиллярах, в которых хорошо выражено пристеночное стояние лейкоцитов, они постепенно проникают сквозь сосудистую стенку, отделяются от нее, принимают амебовидную форму и оказываются за пределами сосуда (эмиграция лейкоцитов). В капиллярах удается также наблюдать и выход эритроцитов наружу (диапедез эритроцитов). В некоторых участках, в связи с разрывом сосудов, наблюдаются кровоизлияния с массовым выходом крови в окружающую ткань. В других участках можно обнаружить полную остановку движения крови - стаз.