Определение сбраживающей способности дрожжей.
С целью выявления сбраживающей способности дрожжей производят высев исследуемых культур на жидкие питательные среды, содержащие не менее 2% глюкозы, находящиеся в пробирках со вкладышами (маленькие запаянные с одного конца трубочки) или в трубках Дунбара. Наличие сбраживающей способности по окончании 24-ой инкубации при комнатной температуре детектируют визуально по присутствию пузырька газа в запаянном конце трубки Дунбара или во вкладыше.
Задание:
1. Приготовить ПС типа Сабуро-бульон (глюкоза – 4%, пептон – 1%), заполнить ею трубки Дунбара или пробирки со вкладышами. Закрыть ватно-марлевыми пробками, простерилизовать.
2. Произвести посев изучаемых дрожжевых культур на жидкую ПС.
3. Определить наличие/отсутствие сбраживающей способность у изучаемых дрожжевых культур.
10.4 Количественный учёт микроорганизмов с помощью счётных камер.
В счётных камерах Горяева можно произвести подсчёт крупных микробных клеток – дрожжей, одноклеточных водорослей, конидий, спор грибов, некоторых бактерий. Счетная камера представляет собой толстостенное предметное стекло с нанесёнными на нём поперечными прорезами, которые образуют три поперечно расположенные плоские площадки. Средняя площадка продольным прорезом разделена пополам, причем на каждой половине нанесена квадратная сетка (рис. 9, а). Две боковые площадки расположены на 0,1 мм выше средней (рис. 9, б). Эти площадки служат для притирания покровного стекла к средней площадке.
Сетка разделена на определенное число больших и маленьких квадратов, по-разному сгруппированных.
Сторона квадрата (ABCD, рис. 12, в) равна 1/20 мм, площадь –1/400 мм2, высота – 1/10 мм объём– 1/4000 мм3или 1/4000000 см3. Большой квадрат ABCD, состоит из 16 малых квадратиков.
Рис. 12. Счётная камера Горяева: а – вид сверху; б – вид сбоку (h – высота камеры),
в – вид при малом увеличении микроскопа.
Каплю взвеси наносят на сетку камеры и сверху накрывают чистым покровным стеклом. Большими пальцами покровное стекло плотно притирают к боковым площадкам камеры до появления ньютоновских колец.
Камеру с исследуемым материалом помещают на предметный столик микроскопа и микроскопируют с объективом 8х и 40х.
Просчитывают количество клеток в пяти больших квадратах, учитывая все клетки, размещенные внутри квадрата и на пограничных линиях.
Находят среднее количество клеток в одном квадрате. Пересчёт на 1 см3 суспензии с учётом разведения производят по формуле:
N = (a · 1000) · K/(h · S),
где N – число клеток в 1 см3 суспензии; а – среднее число клеток в большом квадрате; h – глубина камеры, мм; S – площадь квадрата, мм2; К - разведение исходной суспензии; 1000 – коэффициент пересчёта мм3 в см3.
Задание:
1. Изучить устройство камеры Горяева, притереть покровное стекло до появления ньютоновских колец.
2. Определить титр дрожжевой суспензии прямым счетом в камере Горяева. Рассчитать количество дрожжей в суспензии.
Микробиологические методы исследования воздуха и пищевых продуктов.
Обнаружение и количественный учет микроорганизмов в объектах окружающей среды необходимы при санитарно-гигиенических и экологических исследованиях для моделирования природных систем и разработке основ управления природными процессами, а также при контроле качества окружающей среды и продуктов питания, соответствия их гигиеническим нормативам, обеспечивающим безопасность условий труда и здоровье человека.
В соответствии с гигиеническими нормативами содержание патогенных микроорганизмов не допускается. Непатогенные микроорганизмы могут оказывать аллергенное воздействие на отдельных индивидуумов, вызывать порчу и непригодность использования продуктов и сырья. На содержание живых клеток микроорганизмов впроизводственной зоне установлены гигиенические нормативы.