Тема: Патогенные стрептококки, клостридии газовой гангрены и столбняка

ББК 52.64 р30

© Генералов И.И., Железняк Н.В., Окулич В.К., Сенькович С.А., Фролова А.В., Данющенкова Н.М., Беренштейн Т.Ф., Зубарева И.В., Моисеева А.М.

© УО «Витебский государственный медицинский университет», 2012

ОГЛАВЛЕНИЕ

ЗАНЯТИЕ №1

Тема: Патогенные стафилококки, псевдомонады

ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ ЗАНЯТИЯ:

1. Знать теоретический материал по теме занятия.

2. Освоить методы лабораторной диагностики стафилококковых инфекций.

3. Изучить биопрепараты по теме занятия.

ВОПРОСЫ К ЗАНЯТИЮ:

1. Стафилококки: таксономия, свойства, резистентность.

2. Факторы патогенности стафилококков. Этиологическая роль стафилококков в развитии гнойно-воспалительных заболеваний.

3. Лабораторная диагностика стафилококковых инфекций. Профилактика и лечение.

4. Псевдомонады: таксономия, свойства, резистентность.

5. Факторы патогенности синегнойной палочки. Этиологическая роль в развитии гнойно-воспалительных заболеваний.

6. Лабораторная диагностика синегнойной инфекции. Профилактика и лечение.

7. Биопрепараты: стафилококковый анатоксин, антистафилококковый иммуноглобулин, типовые стафилококковые бактериофаги.

ЛИТЕРАТУРА:

1. Лекционный материал.

2. Учебник «Медицинская микробиология» под редакцией проф. Д.К. Новикова, проф. И.И. Генералова, 2003, стр. 153-159, 173-176.

3. «Практикум по медицинской микробиологии» С.А.Павлович, 1993, стр. 109-112.

САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ РАБОТА:

1. Микробиологическое исследование гноя при мастите.

В заключении указать вид стафилококка, обнаруженные факторы патогенности, чувствительность к антибиотикам.

2. Микробиологическое исследование слизи из зева.

Второй день исследования проводится на занятии №2.

3. Демонстрация пигментообразования P.aeruginosa на мясо-пептонном агаре.

4. Учет и оценка демонстрационного опыта фаготипирования стафилококков.

ЗАНЯТИЕ №2

Тема: Патогенные стрептококки, клостридии газовой гангрены и столбняка

ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ ЗАНЯТИЯ:

1. Знать теоретический материал по теме занятия.

2. Научиться оценивать ПЦР для обнаружения emm гена М протеина стрептококка.

3. Ознакомиться с конфокальной микроскопией возбудителей газовой гангрены.

4. Научиться бактериологическому методу исследования стрептококков.

5. Ознакомиться с морфологией изучаемых возбудителей.

6. Научиться постановке ИФА для определения цитотоксина C. difficile.

7. Изучить биопрепараты по теме занятия.

ВОПРОСЫ К ЗАНЯТИЮ:

1. Стрептококки: таксономия, свойства, резистентность.

2. Факторы патогенности стрептококков. Этиологическая роль стрептококков в развитии гнойно-воспалительных заболеваний, специфических стрептококковых инфекций.

3. Лабораторная диагностика стрептококковых инфекций. Профилактика и лечение.

4. Возбудители раневой клостридиальной анаэробной инфекции: таксономия, свойства, резистентность.

5. Факторы патогенности возбудителей газовой гангрены. Этиологическая роль в патологии человека.

6. Лабораторная диагностика газовой гангрены. Профилактика и лечение.

7. Возбудители столбняка: свойства, резистентность.

8. Факторы патогенности и механизм действия столбнячного экзотоксина. Патогенез столбняка.

9. Лабораторная диагностика столбняка. Профилактика и лечение.

10. Возбудитель псевдомембранозного энтероколита: таксономия, свойства, резистентность, патогенез, клиническая картина и диагностика.

11. Биопрепараты: противогангренозная сыворотка «Диаферм», противостолбнячная сыворотка «Диаферм», вакцина АКДС, АДС, столбнячный анатоксин.

ЛИТЕРАТУРА:

1. Лекционный материал.

2. Учебник «Медицинская микробиология» под редакцией проф. Д.К. Новикова, проф. И.И. Генералова, 2003, стр. 159-166, 177-188.

3. «Практикум по медицинской микробиологии» С.А.Павлович, 1993, стр. 112-115, 145-150.

САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ РАБОТА:

1. Продолжить протокол исследования слизи из зева (см. протокол в занятии №1).

2. Оценка результатов ПЦР на обнаружение emm гена М протеина стрептококка.

3. Конфокальная микроскопия возбудителей газовой гангрены.

4. Микроскопия и зарисовка в альбом демонстрационных мазков:

ПРЕПАРАТ №1 ПРЕПАРАТ №2

Streptococcus pneumoniae в органахClostridium tetani

окраска по Грамуокраска по Граму

ПРЕПАРАТ №3

Clostridium perfringens

в материале от больного

окраска по Граму

5. Постановка ИФА для определения цитотоксина C. difficile.

Реагенты

1) Иммуносорбент – планшет полистироловый с адсорбированными на внутренней поверхности лунок антителами к цитотоксину C. difficile.

2) Исследуемый материал (копрофильтрат).

3) Положительный контрольный образец (К+), содержащий цитотоксин, инактивированный.

4) Отрицательный контрольный образец (К–), не содержащий цитотоксин, инактивированный.

5) Поликлональные антитела к цитотоксину C. difficile из сыворотки крови кролика.

6) Конъюгат – антитела против глобулинов кролика, меченые пероксидазой хрена.

7) Субстратный буферный раствор, содержащий пероксид водорода.

8) Раствор хромогена тетраметилбензидина (ТМБ).

9) Стоп-реагент – раствор 2M серной кислоты.

Проведение анализа

1) Внесение в лунки исследуемых и контрольных образцов.

В лунки планшета, например, А-1 и А-2, В-1 и В-2, С-1 и С-2 и т.д внести по 100 мкл исследуемого материала.

Внесение контрольных образцов:

100 мкл (К–) в лунки А-11 и A-12;

100 мкл (К+) в лунки В-11 и В-12.

2) Добавление во все лунки по 50 мкл рабочего раствора поликлональных антител к цитотоксину C. difficile. Инкубация 60 мин при 37°С в термостате.

3) По окончании инкубации содержимое лунок тщательно аспирировать в сосуд с дезинфицирующим раствором.

4) Внести во все лунки по 100 мкл рабочего раствора конъюгата. Инкубировать в течение 30 мин при температуре 37°С.

5) По окончании второй инкубации удалить содержимое лунок и промыть планшет 5 раз.

6) Внести во все лунки по 100 мкл рабочего раствора хромогена тетраметилбензидина и инкубировать в темноте в течение 30 мин при температуре 18–25°С.

7) Внести во все лунки по 100 мкл стоп-реагента.

8) Измерить оптическую плотность на многоканальном фотометре при 450 нм с фоновой длиной волны 620–650 нм.

12
• 3
• 4
• 5
• 6
• Далее ⇒