График просмотра и оценка результатов посева диагностического материала
Посевы следует инкубировать с обязательным еженедельным просмотром при 35–37°С до тех пор, пока не появится рост колоний. Если в течение 10 недель рост микобактерий не отмечается, посевы уничтожают автоклавированием.
Во время еженедельных просмотров регистрируют следующие параметры:
- дата появления видимого роста;
- «интенсивность роста» – суммарное число колониеобразующих единиц (КОЕ) на всех пробирках, засеянных данным материалом, если материал засевается на пробирки с одинаковыми средами. Если инокулируются разные питательные среды, результат отмечается для каждой из них. Показатель интенсивности роста имеет большое диагностическое и прогностическое значение в динамике наблюдения за больным в процессе химиотерапии;
- «загрязнение посева» неспецифической микрофлорой или грибами;
- «отсутствие роста».
Все указанные параметры регистрируют в протоколе каждого анализа. Регистрация этих параметров позволяет своевременно выявлять макроскопически видимый рост микобактерий или загрязняющей микрофлоры и осуществлять первичную идентификацию микобактерий на основании регистрации сроков появления роста и его особенностей.
Появление роста кислотоустойчивых микобактерий в течение 7–10 дней культивирования на плотных питательных средах может свидетельствовать либо о выделении быстрорастущих нетуберкулезных микобактерий, к которым комплекс M.tuberculosis не относится, либо о массивном обсеменении материала M.tuberculosis.
Появление роста кислотоустойчивых микобактерий после 3–4 недель культивирования может свидетельствовать о выделении M. tuberculosis, а также других медленнорастущих микобактерий, которые могут относиться к потенциально патогенным нетуберкулезным микобактериям или к безвредным кислотоустойчивым сапрофитам.
Прежде чем дать отрицательный ответ после 10 недель культивирования, необходимо убедиться в отсутствии роста очень медленнорастущих микобактерий, в числе которых могут быть и M.tuberculosis. При оценке результатов необходимо помнить, что используемые для посева питательные среды представляют собой обогащенный субстрат, который легко утилизируется другими микроорганизмами. С этим связан высокий риск загрязнения посевов различными бактериями и грибами, колонии которых визуально трудно отличить от микобактерий. В ряде случаев некоторые загрязняющие посевы микроорганизмы обладают способностью разлагать составные ингредиенты среды с образованием кислоты; это приводит к снижению pH среды, высвобождению малахитового зеленого от его связей с компонентами яичной основы и изменению цвета среды на темно-зеленый. На такой среде микобактерии не растут,и такие посевы подлежат удалению.
Во время еженедельных просмотров посевов при подозрении на загрязнение посева сопутствующей микрофлорой необходимо прежде всего удалить и уничтожить автоклавированием те посевы, в которых отмечается загрязнение всей поверхности питательной среды или изменение самой питательной среды (разжижение или обесцвечивание).
Посевы с частичным загрязнением желательно выдержать до окончания срока инкубации или до появления хотя бы нескольких колоний микобактерий, так как позднее появление загрязнения не исключает роста M.tuberculosis. В таких случаях необходимо сделать мазок из выросшей культуры, окрасить его по Ziehl-Neelsen и при наличии кислотоустойчивых микобактерий попытаться обработать выросшую культуру 3–4% раствором серной кислоты, а после отмывания ее изотоническим раствором хлорида натрия вновь засеять осадок на питательные среды.
Во всех роста необходимо контролировать чистоту выросшей культуры с помощью микроскопии мазка по Ziehl-Neelsen.