Бактериологическое исследование
Чистые культуры гемофильная бактерий выделяют путем посева исследуемого материала на специальные питательные среды (кровяной агар, кровяной агар с добавлением сердечно-мозгового экстракта, шоколадный агар). Для подавления кокковой флоры к среде добавляют 15-25 ЕД / мл пенициллина. На простых средах гемофильные бактерии не растут. Спинномозговую жидкость сначала центрифугируют и осадок высевают петлей на одну из плотных сред. При септицемии делают посев 10 мл крови в 100 мл жидкой среды Файддса. Через 24 часа делают высев на агар, где через сутки вырастают маленькие выпуклые прозрачные колонии. На шоколадном агаре колонии появляются через 36-48 ч, они немного больше по размерам и полупрозрачные. На кровяном агаре с добавлением сердечно-мозгового экстракта через сутки вырастают мелкие выпуклые колонии с радужными переливами. Колонии безкапсульних вариантов гемофилов не имеют такого радужного расцвета. Из типичных колоний готовят мазки, окрашивают по Граму и при выявлении грамотрицательных палочек дают предварительное заключение. Н. influenzae первых генерациях может быть в капсульные и безкапсульний форме. Для окончательной идентификации выделенных культур проводят реакцию феномена «набухания капсулы» используют соответствующие агглютинирующие диагностические сыворотки, исследуют на определение потребности для роста X-и Y-факторов. Для выявления исследуемый материал засевают на среду, на поверхность которого затем кладут стандартные диски или полоски, пропитанные X-и Y-факторами. Интенсивный рост бактерий вокруг дисков или полосок подтверждает наличие Н. influenzae. Определяют тесты на каталазную, оксидазную, уреазную, b - галактозидазную, орнитиндекарбоксилазную и гемолитическую активность, ферментацию углеводов, образование индола.
H. influenzae продуцирует каталазу, оксидазу, уреазу, b – галакгозидазу, орнитиндекарбоксилазу, нитратредуктазу, не обладает гемолитической активностью, постоянно ферментирует глюкозу, образует индол, не разжижают желатин.
Серологическую идентификацию культуры, еще на этапе получения изолированных колоний, можно провести с помощью реакции агглютинации на стекле с капсульными антигенами (a, b, с, d, е, f) с соответствующими поли - и монорецепторными диагностическими сыворотками. Выделенную культуру необходимо дифференцировать от возбудителей коклюша и паракоклюша.
Экспресс - методы обнаружения капсульного антигена.
Для диагностики менингита, вызванный гемофильной бактериями, используют также метод встречного иммуноэлектрофореза, реакция позволяет с помощью специфических антисывороток выявлять полисахаридный антиген возбудителя в спинномозговой жидкости и сыворотке крови больного уже в первый день исследования материала. Образование линий преципитации обнаруживает полисахаридные антигены гемофилов, что доказывает этиологическую роль H.influenzae в возникновении заболевания. Реакция латекс - агглютинации позволяет в течение 15 мин дать заключение об отсутствии или наличии в спинномозговой жидкости больного специфических антигенов. Реакция непрямой гемагглютинации является вспомогательным методом диагностики менингококковой инфекции и позволяет существенно увеличить процент лабораторного подтверждения генерализованных форм менингококковой инфекции.
Реакция коагглютинации - серологический тест, в котором используются стафилококки (носитель протеина А, по отношению к иммуноглобулину С). Носитель, погруженный специфическими антителами, представляет собой диагностикум, который позволяет эффективно проводить детекцию разнообразных растворимых антигенов, а также антител.