Методы лабораторной диагностики.
Материал: кровь, моча, ликвор, пищевые продукты, вода, сыворотка крови, гомогенат органов (зараженных животных – морских свинок).
Методы микробиологической диагностики:
1. Бактериологический – основной.
2. Микроскопический
3. Серологический
4. Биологический
Микроскопию клинического материала проводят в темном поле, для чего делают «раздавленную» или «висячую» капли и определяют наличие лептоспир по характеру движения. Но обнаружение лептоспир с помощью микроскопии не всегда удается.
Более достоверным методом является бактериологический (культуральный). Для этого кровь больного засевают в несколько пробирок с водно-сывороточной или фосфатно-сывороточной средой и инкубируют в термостате при 280, 37 0 или при комнатной температуре около 3 недель (для предупреждения высыхания среды пробирки закрывают резиновыми пробками или на среды наливают тонкий слой вазелинового масла). Рост начинается с 5-7 дня, его определяют темнопольной микроскопией препарата «раздавленная» капля. На основании микроскопии (морфология и характер движения) может быть установлена принадлежность выделенного микроба к лептоспирам.
Идентификацию проводят в реакции микроагглютинации-лизиса (РМАЛ) с типоспецифическими сыворотками.
С 7-8 дня болезни возможно выделение лептоспир (культуры) из мочи больного.
Для выделения культуры из клинического материала одновременно с посевом на питательные среды заражают чувствительных животных (кроликов-сосунков или морских свинок). У них лептоспиры через 8-14 дней обнаруживаются в брюшной полости и в моче. Проводят микроскопическое и бактериологическое исследование с материалом, взятым у зараженных животных.
На 2-ой неделе болезни можно провести серодиагностику, т.е. поставить реакцию агглютинации-лизиса для обнаружения Ат. Для этого из прогретой исследуемой сыворотки готовят 5-6 двукратных разведений, начиная с 1:50, распределяют по 2-3 капли в несколько рядов панели и в каждый ряд добавляют по 2-3 капли живой молодой культуры типовых штаммов, лептоспир (плотностью в 50 особей в поле зрения). Выдерживают 1 час при 370 или 250 и учитывают в темном поле зрения. За титр принимают разведение, при котором в поле зрения определяется несколько активно движущихся агглютинатов – «жучков». Диагностический титр 1:100 и выше. Повторное исследование для выявления нарастания титра Ат (агглютининов) проводят через неделю.
У больных агглютинины достигают высоких титров и могут сохраняться несколько лет(1:10000 и выше).
Серодиагностику лептоспироза можно осуществить и с помощью РСК. В качестве Аг используют культуры лептоспир или аутолизаты старых культур лептоспир. Сыворотки исследуемые разводят от 1:10 и выше. Положительной считают реакцию в разведении сыворотки 1:10 и выше на «++++» и «+++».
Лечение.
Для лечения лептоспироза применяют антибиотики пенициллинового ряда и тетрациклины, поливалентный лептоспирозный иммуноглобулин.
Важна также патогенетическая терапия в зависимости от клиники.
Профилактика.
Специфическая профилактика проводится по эпидемическим показаниям корпускулярной убитой поливалентной лептоспирозной вакциной, состоящей из наиболее распространенных сероваров лептоспир. Она вводится подкожно двукратно по 2 и 2,5 мл с интервалом 7-10 дней. Ревакцинацию привитых проводят через 1 год, однократно (2мл).
Общие профилактические мероприятия направлены на санитарную охрану водоемов, гигиенические мероприятия, санитарно-просветительную работу.
Приложение 1: «Это интересно знать!»
Приоритет отечественных ученых:
Ради познания научной истины во имя и на благо человечества отечественные микробиологи с риском для собственной жизни работали в опасных эпидемиологических условиях.
Героический опыт самозаражения был проведен Григорием Николаевичем Минхом, привившем себе в 1884 году, т.е. ввел себе, кровь больного возвратным тифом. Это позволило установить, что неизвестный в то время возбудитель возвратного тифа находится в крови. Он доказал, что переносчиком этого заболевания являются кровососущие насекомые. (Г.Н. Минх был первым отечественым паталогоанатомом, изучавшим морфологию крови). После тяжело перенесенного заболевания Г.Н. Минх выздоровел.
Осип Осипович Мочутковский повторил в 1876 году опыт Г.Н. Минха по самозарожению возвратным тифом. Он научно доказал наличие возбудителя возвратного тифа в крови больного и патогенность последней в течение инфекционного периода.
Илья Ильич Мечеников в 1881 году опытами на себе доказал заразность крови людей, больных возвратным тифом.
Все эти данные отечественных ученых были подтверждены экспериментально в 1912-1914 годах. Ш. Николем и Э. Консейем и др.