Лабораторная диагностика стрептококковых инфекций
Материалом для исследования являются гной, мокрота, слизь из зева и носа, кровь, при отите – отделяемое из слухового прохода.
Микроскопический метод включает приготовление мазка и окраску его по Граму; выявляются грамположительные цепочки кокков. В случае обнаружения пневмококков определяются диплококки ланцетовидной формы, окруженные общей капсулой.
Бактериологический метод – основной, проводят посев на чашки Петри с кровяным агаром. Обращают внимание на рост гемолитических и зеленящих колоний, характерных для стрептококков. S. pyogenes и S. agalactiae дают β-гемолиз, пневмококки и зеленящие стрептококки – α-гемолиз.
Из колоний делают мазки, окрашивают по Граму. При обнаружении грамположительных цепочек кокков ставят каталазный тест, который у стрептококков отрицательный. Колонии пересевают на сывороточный бульон или тиогликолевую среду, где стрептококки дают придонный рост.
Далее определяют серогруппу методом преципитации с группоспецифическими сыворотками к полисахаридным АГ или методом ИФА. Следующий этап – определяют серовар возбудителей путем постановки реакции латекс-агглютинации с М-антисыворотками.
Пневмококк типируют в реакции с сыворотками против полисахаридного капсульного антигена.
Проводят дифференциально-диагностические тесты (см. таблицу 5), позволяющие отличить друг от друга основных возбудителей: S. pyogenes, S. agalactiae, S. pneumoniae, зеленящих стрептококков (S. mutans, S. mitis и других).
S. pyogenes чувствителен к антибиотику бацитрацину. Кроме того, это единственный вид, который дает положительный ПИР-тест (гидролиз пирролидонил-β-нафтиламида). Не гидролизует гиппурат натрия.
S. agalactiae гидролизует гиппурат натрия. Также этот возбудитель дает положительный САМР-тест (назван в честь австралийских исследователей Cristie R., Atkins N.E. и Munch-Petersen E., предложивших в 1944 г. данный метод).
Для этого проводят совместное выращивание на глюкозно-кровяном агаре исследуемой культуры стрептококка и штамма стафилококка, вырабатывающего бета-гемолизин. Посев бактерий выполняют взаимно перпендикулярными штрихами.
При наличии S. agalactiae в месте пересечения культур наблюдается гемолиз, приобретающий форму бабочки.
S. pneumoniae (пневмококк) чувствителен к действию химических факторов. Он не растет в присутствии антисептика оптохина, а также в присутствии желчи. Способен разлагать инулин.
Дополнительно пневмококк можно идентифицировать в реакции «набухания капсулы» (по Нейфельду). Наблюдается увеличение размеров капсулы под действием поливалентной противокапсульной сыворотки в присутствии метиленового синего. Учет реакции производят с помощью метода микроскопии.
Иногда для обнаружения S. pneumoniae используют биологический метод. Внутрибрюшинно заражают белых мышей исследуемым материалом. Погибших мышей вскрывают, делают мазки-отпечатки, посев крови и органов на кровяной агар с последующей идентификацией возбудителя. Метод имеет ограниченное применение, так как не все серовары пневмококков патогенны для мышей.
Зеленящие стрептококки (S. mutans, S. mitis и другие) не имеют капсулы, устойчивы к действию оптохина и желчи.
В диагностике ревматической лихорадки используют серологические исследования, в которых определяют титры антител к ферментам и токсинам стрептококка (антистрептолизиновый тест, определение АТ к гиалуронидазе, дезоксирибонуклеазе). Повышенными считают титры не менее 250 Ед.
Лечение
Все стрептококки серогруппы А чувствительны к β-лактамным антибиотикам, включая бензилпенициллин, в меньшей степени – к макролидам и азалидам
Бензилпенициллин (пенициллин G) остается препаратом выбора для лечения внегоспитальных пневмококковых пневмоний, хотя резистентность к нему постепенно увеличивается. Также для лечения пневмоний используют другие β-лактамы (амоксициллин, цефалоспорины), макролиды и азалиды, фторхинолоны (левофлоксацин).
Профилактика
Для предупреждения развития хронических стрептококковых инфекций, связанных с персистенцией возбудителя и образованием L-форм, необходимо проведение адекватной антибиотикотерапии. За детьми, перенесшими повторные ангины, скарлатину устанавливают диспансерное наблюдение.
Специфическая профилактика пневмококковых заболеваний проводится с помощью вакцин, приготовленных из высокоочищенных капсульных полисахаридов тех серовариантов, которые чаще вызывают заболевания. В настоящее время имеются две такие вакцины – 23-валентная пневмококковая полисахаридная вакцина (PPSV23, Пневмо23) и 7-валентная конъюгированная пневмококковая вакцина (PCV7), которая рекомендуется для вакцинации детей моложе 5 лет.