Метод толстого мазка под целлофаном.
Исходный уровень знаний и навыков.
Учащийся должен знать:
1. Представителей трематод описторха, парагонима, фасциолу, дикроцелия.
2. Жизненные циклы, пути заражения трематод, клиническую картину болезни, сроки хранения фекалий
Учащийся должен уметь:
1. Определить яйца трематод по рисункам, таблицам.
2. Формировать меры профилактики.
3. Приготовить нативный мазок, большой мазок, мазок по Като, оценить свою работу, работать с микроскопом.
4. Определять яйца трематод в препаратах, соблюдать правила охраны труда, соблюдать правила сан.-эпид. режима.
Структура занятия:
Теоретическая часть:
Ø Микролекция.
Практическая часть:
Ø Приготовление нативного мазка, большого мазка, мазка по Като, оценка работы, микроскопия
Микролекция.
Сбор и доставка материала
Окончательный диагноз гельминтозов может быть установлен только с учетом результатов лабораторных исследований. Основным методом лабораторной диагностики гельминтозов является обнаружение яиц или личинок гельминтов в фекалиях, моче, крови и других биологических жидкостях при микроскопическом исследовании. Материалами для исследований служат испражнения, содержимое двенадцатиперстной кишки, кровь, мокрота, биопсированные ткани и другие материалы.
Сбор материала для исследования производят в чистую стеклянную или пластиковую посуду, которая сопровождается направлением с указанием ФИО обследуемого. При массовом обследовании допускается сбор фекалий в стаканчики из парафинированной бумаги, целлофановые пакеты.
Испражнения для анализов должны доставляться в лабораторию непозднее одних суток, а при подозрении на стронгилоидоз - немедленно после их выделения. При нарушении этого правила постановка диагноза в связи с разрушением яиц или личинок нередко становится трудной или невозможной.
Для выявления яиц и личинок некоторых видов гельминтов используют специальные методы: метод Бормана, перианальный соскоб, метод мазков-отпечатков с помощью липкой ленты, культивирование личинок на фильтровальной бумаге (метод Харада и Мори) и др.
Практическая часть:
Наиболее распространенным методом исследования фекалий на наличие в них яиц гельминтов являются методы нативного мазка, толстого мазка под целлофаном и большого мазка.
При изучении яиц гельминтов под микроскопом целесообразно сопоставлять видимое изображение с его характеристикой в определителе яиц гельминтов.
Метод нативного мазка
Оборудование:
предметные стекла;
широкая кювета;
пластиковые палочки;
пипетка;
карандаш;
50 %-ный водный раствор глицерина (смешивают равные части глицерина и дистиллированной воды);
сосуд с 0,5% -ным раствором полидеза;
микроскоп.
Ход работы
1. Разложить предметные стекла в кювете, пронумеровать предметные стекла.
2. Нанести пипеткой по 2 капли 50 %-ного водного раствора глицерина на расстоянии 4 см одна от другой на предметные стекла.
3. Взять палочкой кусочек фекалий, размером со спичечную головку (30-50 мг), внести его в каплю глицерина и растереть до равномерной суспензии.
4. На каждом стекле готовят по два нативных мазка, которые не должны сливаться между собой и не доходить до краев, чтобы не испачкать пальцы лаборанта. Для каждой пробы используют новые палочки.
5. Препараты, не накрывая покровными стеклами, исследовать под микроскопом (объектив 8х, окуляр 10-15х).
6. По окончании исследования погрузить препараты в сосуд с 0,5% -ным раствором полидеза.
7. Убрать рабочее место, вымыть руки.
Метод толстого мазка под целлофаном.
Метод предложен К. Като, М. Миуром в 1954 г. Мазок представляет собой слой неразбавленных фекалий на предметном стекле, спрессованный под листком тонкого гигроскопического целлофана, пропитанного глицерином.
Рис. Приготовление толстого мазка под целлофаном:
а - нативный мазок; б - придавливание резиновой пробкой комочка фекалий, покрытых целлофаном; в - толстый мазок под целлофаном (по Ю.А. Березанцеву и Е.Г.Автушенко, 1976)
Оборудование:
широкая кювета;
полоски целлофана 22x30 мм, обработанные смесью Като в течение 24 ч;
смесь Като (3 % -ный раствор малахитового зеленого -6 мл, 6 % -ный раствор фенола - 500 мл, глицерин - 500 мл, 3,5 мл смеси хватает на 100 полосок);
резиновые пробки крупные;
пинцет анатомический;
пластиковые палочки;
карандаш;
микроскоп.
Ход работы
1. Разложить в кювете предметные стекла, пронумеровать предметные стекла.
2. Набрать палочкой фекалии размером с полгорошины (50-60 мг) и поместить на предметное стекло в центр.
3. Достать из банки пинцетом целлофановую полоску, обработанную по Като, и наложить на пробу кала на предметном стекле.
4. Придавить целлофан резиновой пробкой, чтобы кал распределился равномерно, не вытекая за края полоски.
5. Оставить препарат до просветления на 60 мин и затем исследовать под микроскопом (объектив 8-40х, окуляр 10х).
6. По окончании исследования препарат опустить в сосуд с 0,5 %-ным раствором полидеза.
7. Убрать рабочее место, вымыть руки.
Метод большого мазка.
Метод был предложен Ю.А. Березанцевым и Е.Г. Автушенко в 1973 г. Суть метода основывается на применении бинокулярного микроскопа и нативного мазка на стекле 6x9 см, позволяющего одномоментно исследовать до 200-300 мг кала.
Оборудование:
предметные стекла 6x9 см и 7x10 см;
пластиковые палочки;
50 %-ный раствор глицерина (глицерин и дистиллированная вода в равных частях);
пипетки;
сосуд с 0,5 %-ным раствором полидеза;
микроскоп;
эмалированная кювета;
карандаш.
Ход работы
1. Разложить предметные стекла 7x10 см в кювете, пронумеровать предметные стекла.
2. Затем на каждое предметное стекло положить второе предметное стекло 6x9 см.
3. Нанести пипеткой на предметное стекло размером 6x9 см 15-20 капель 50 % -ного раствора глицерина.
4. Взять палочкой из разных мест кусочки кала величиной со среднюю горошину (200-300 мг) и опустить его в раствор 50 %-ного глицерина на предметном стекле.
5. Растереть палочкой кусочек кала в глицерине до равномерной суспензии, чтобы занимаемая им площадь составляла около 33-34 см2. Мазок не покрывать покровными стеклами.
6. Взять большое покровное стекло 7x10 см за края вместе с находящимся на нем большим мазком (чтобы не запачкать пальцы).
7. Исследовать большой мазок при увеличении 34х (объектив 2х, окуляр 17х) и 50х (объектив 4х, окуляр 12,5х). В сомнительных случаях исследования проводят на большом увеличении.
8. По окончании исследования препарат опустить в сосуд с 0,5 %-ным раствором полидеза.
9. Убрать рабочее место, вымыть руки.
При таком методе исследования определяются крупные яйца гельминтов (аскариды, власоглава, анкилостомид, острицы, лентеца широкого, тениид, фасциолы). Они выглядят несколько иначе, в связи с чем необходим некоторый опыт, чтобы их быстро обнаружить. Большие мазки можно применять для исследования на яйца шистосом и личинок угрицы кишечной. Большой мазок содержит в 6—10 раз больше исследуемого материала, чем нативный мазок. Во столько же раз выше его эффективность.