РПГА, РТПГА: определение, компоненты, механизм, практическое применение.
Реакция непрямой гемагглютинации (РНГА) предложена в 1946г. А. И. Кравченко и И. И. Соколовым, которые впервые установили, что эритроциты человека и других животных обладают способностью адсорбировать на своей поверхности бактериальные полисахариды. Такие адсорбированные антигены вступают в реакцию с сыворотками, содержащие соответствующие данному антигену антитела. Несколько позже было обнаружено, что предварительная обработка эритроцитов некоторыми веществами (например, танином) способствует адсорбции на них и белковых молекул (антител).
Определение: РП(Н)ГА – специфическое взаимодействие антител и антигенов, один из которых предварительно адсорбирован на мелкодисперсных носителях (эритроцитах или частицах латекса).
РПГА проводят в 2 вариантах:
А) с известным антигеном, адсорбированном на эритроцитах (антигенный эритроцитарный диагностикум), применяется для обнаружения антител;
Б) с известными антителами, адсорбированными на эритроцитах (антительный эритроцитарный диагностикум). Применяется для выявления антигена и называется иногда РОНГА (реакция обратной непрямой гемагглютинации).
Компоненты:
А) для серодиагностики:
Ø Антитела – сыворотка больного;
Ø Антигены, адсорбированные на эритроцитах – эритроцитарный антигенный диагностикум;
Ø Физ. раствор.
Б) для сероидентификации:
Ø Антитела, адсорбированные на эритроцитах – антительный эритроцитарный диагностикум;
Ø Антигены – исследуемый материал больного, содержащий возбудителя;
Ø Физ. раствор.
Механизм: аналогичен РА.
Постановка и учет:
Реакция ставится в лунках полистироловых пластин.
Этапы:
1. Приготовить последовательные разведения сыворотки или антигена.
2. Добавить эритроцитарный диагностикум (антигенный или антительный).
Учет проводится по внешнему виду осадка эритроцитов в лунках без их встряхивания.
При положительной РПГА образуется кружевной осадок с волнистыми краями – «перевернутый зонтик».
При отрицательной РПГА эритроциты оседают на дно в форме компактного диска – «пуговка».
Преимущества РПГА:
- высокая чувствительность, специфичность;
- простота постановки учета;
- широкие возможности применения.
Практическое применение:
Для серодиагностики и сероидентификации многих бактериальных и вирусных инфекций.
РТПГА.
Иногда для подтверждения специфичности РПГА параллельно с ней ставят РТПГА.
Компоненты:
1. Исследуемый материал.
2. Антительный эритроцитарный диагностикум.
3. Специфическая диагностическая иммунная сыворотка.
4. Физ. раствор.
Механизм:
Реакция положительная:
 |  | ||||
 | |||||
+
 | |
антигены антитела комплекс
(исследуе- (специф. антиген-антитело
мый иммунная
материал) сыворотка)
инкубация 2 часа
+ +
антительный «пуговка»
эритроцитарный
диагностикум
Реакция отрицательная:
 |
+ +
комплекс
Антигены антитела антиген-антитело
(исследуемый (специфич. не образуется
материал) иммунная
сыворотка)
 | |||
 | |||
инкубация комплекс
2 часа 37°С антиген-антитело
с эритроцитом
«зонтик»
Постановка и учет: реакция ставится в полистироловых пластинах в 2 этапа:
1 этап:
- к исследуемому материалу добавить специфическую иммунную сыворотку;
- инкубация 2 часа при 37˚С.
2 этап:
- к компонентам добавить антительный эритроцитарный диагностикум;
- инкубация 2 часа при 37˚С.
!Положительная РТПГА – «пуговка».
!Отрицательная РТПГА – «перевернутый зонтик».
Практическое применение: для подтверждения специфичности РПГА при некоторых инфекциях, например, при холере, туляремии.