Билирубин¾¾¾¾¾¾¾¾¾¾®Билирубин-глюкуронид

глюкуронилтрансфераза

Образующиеся при этом глюкурониды билирубина хорошо растворимы в воде, секретируются в просвет желчного капилляра и выводится из организма по желчевыводящим путям.

В сыворотке крови содержится две фракции билирубина, вместе составляющие "общий" билирубин:

- неконъюгированный (непрямой, токсичный, свободный, водонерастворимый) существует в виде комплекса с альбумином.

- конъюгированный (билирубин глюкуронид, прямой, нетоксичный, связанный, водорастворимый).

Содержание билирубина в крови в норме составляет 0,5-1,2 мг% (8.5-20.5 мкМ/л в системе СИ), причем 75% приходится на долю неконъюгированного. Определение его уровня в крови является важным диагностическим тестом. Так, при различных поражениях печени и желтухах часто наблюдается гипербилирубинемия - увеличение концентрации билирубина до 30-35 мг% (512.5 -600.0 мкМ/л) и более.

Дифференциальная диагностика различных видов желтух осуществляется на основании исследования содержания фракций билирубина в крови, а также особенностей клинического течения заболевания и др.

ВЫВОД:

ЗАНЯТИЕ 30
ТЕМА: Биохимия почек в норме и при патологии.

Цель занятия: изучить особенности метаболизма почек и биохимическую основу их основных функций в норме и при патологии. Научиться определять основные физико-химические параметры мочи в норме и при патологии.

Исходный уровень знаний и умений:

1. Строение и функция нефронов

2. Механизм образования мочи

3. Механизм действия гормонов - альдостерона, вазопрессина, натрийурического фактора

4. Метаболизм и механизм действия витамина D

5. Принципы и механизмы регуляции кислотно-основного состояния

6. Механизмы регуляции уровня глюкозы в крови, глюконеогенез.

Студент должен знать:

1. Строение и функции нефрона

2. Особенности кровоснабжения почки и нефрона

3. Механизмы действия гормонов

4. Метаболизм и механизм действия витамина D

5. Принципы и механизмы регуляции КОС

6. Метаболизм углеводов, липидов и аминокислот

7. Механизмы регуляции уровня глюкозы в крови

Студент должен уметь:

1. Проводить титрометрический анализ

Структура занятия:

1. Теоретическая часть.

1.1. Основные функции почек:

1.1.1. Экскреторная функция почек. Строение нефрона, особенности его кровоснабжения. Механизм образования мочи (фильтрация, реабсорбция, секреция). Механизм активного транспорта глюкозы, аминокислот. Нарушение процессов фильтрации, реабсорбции и секреции. Общие свойства мочи в норме и при патологии (суточное количество, цвет, прозрачность, плотность, pH и др.). Органические (мочевина, мочевая кислота, креатинин, креатин, пигменты, аминокислоты, пептиды, гормоны) и неорганические (натрий, калий, кальций, магний, аммиак, хлориды, фосфаты, сульфаты, бикарбонаты) компоненты мочи в норме и при патологии. Патологические компоненты мочи (кровь, белок, сахар, билирубин, аминокислоты).

1.1.2. Клиренс, его определение и диагностическое значение.

1.2. Гомеостатические (неэкскреторные) функции почек. Роль почек в регуляции:

1.2.1. Объема циркулирующей крови, внеклеточной жидкости, артериального давления. Ренин-ангиотензиновая система. Вазопрессин. Механизмы действия диуретиков.

1.2.2. Баланса электролитов. Роль альдостерона в регуляции работы Na-K-АТФазы. Механизмы транспорта H⁺, Na⁺, K⁺, Ca⁺⁺, Cl^-, HCO₃^-. Почки и метаболизм витамина D. Почечные камни.

1.2.3. Кислотно-основного состояния. Механизмы ацидогенеза, аммониогенеза.

1.2.4. Уровня глюкозы в крови. Особенности глюконеогенеза в почках.

1.2.5. Эритропоэза.

1.3. Метаболическая гетерогенность почечной ткани. Особенности углеводного, липидного и белкового обмена в почке. Почка как орган катаболизма биологически активных веществ.

1.4. Нарушение обмена при острой и хронической почечной недостаточности.

2. Практическая часть - выполнение лабораторных работ:

2.1. Анализ мочи с помощью тест-полосок корпорации "Байер".

3. Решение задач и проведение контроля конечного уровня

Литература основная:

1. Материал лекций.

2. Березов Т.Т., Коровкин Б.Ф. Биологическая химия, М., Медицина, 1990, стр. 473-487, М., Медицина, 1998, стр. 608-624.

3. Николаев А.Я. Биохимия, М., Высшая школа, 1989, стр. 358-368.

дополнительная:

4. Уайт А. и др. Основы биохимии, том 3, М., Мир, 1981 стр. .

5. Наточин Ю.В. Основы физиологии почки, Л., Медицина, 1982.

6. Почки и гомеостаз в норме и при патологии, М., Медицина, 1987.

ЗАДАЧИ:

1. Определение клиренса характеризует:

а) концентрационную способность почек

б) клубочковую фильтрацию

в) транспорт электролитов

г) канальцевую секрецию

д) кислотно-основное состояние

е) количество функционирующих клубочков

ж) объем циркулирующей крови

з) интенсивность метаболизма почки

2. Содержание каких компонентов сыворотки крови характеризует нарушение выделительной функции почек?

3. При каких заболеваниях наблюдается внепочечная ретенционная азотемия?

4. При каких заболеваниях наблюдается гиперурикемия?

5. В каких случаях наблюдается продукционная азотемия:

а) тяжелые инфекционные заболевания

б) гломерулонефрит

в) почечная недостаточность

г) нефролитиаз

д) злокачественные опухоли

е) инфаркт миокарда

6. При каких заболеваниях наблюдается абсолютная ретенционная внепочечная азотемия?

а) опухоли мочевого пузыря

б) почечной недостаточности

в) гломерулонефрите

г) острой желтой атрофии печени

д) перитоните

е) пневмонии

ж) перелом костей

7. Глюкозурия наблюдается при:

8. Когда отмечается повышение экскреции катехоламинов с мочой?

9. Когда снижается экскреция с мочой 17-кетостероидов?

а) болезнь Аддисона

б) адреногенитальный синдром

в) гиперплазия коры надпочечников

г) опухоли коры надпочечников

д) болезнь Иценко-Кушинга

е) стрессовые состояния

ж) инфаркт миокарда

з) сахарный диабет

10. Способностью растворяться в воде и выделяться через почечный фильтр с мочой обладают:

а) глюкурониды билирубина

б) a-изомер билирубина

в) b-изомер билирубина

г) g-изомер билирубина

д) d-изомер билирубина

11. При каких заболеваниях (состояниях) отмечается относительная азотемия?

а) холера

б) тяжелые инфекционные заболевания

в) камни мочевых путей

г) гломерулонефрит

д) почечная недостаточность

е) хроническая сердечная недостаточность

ж) глистная инвазия

з) неукротимая рвота

12. При каких состояниях наблюдается ретенционная почечная азотемия?

а) почечная недостаточность

б) камни мочевыводящих путей

в) нефротический синдром

г) опухоли мочевого пузыря

д) цирроз печени

е) инфаркт миокарда

ж) полиартрит

13. В каких случаях наблюдается увеличение содержания индикана в крови и моче?

а) начальные стадии развития почечной недостаточности

б) длительные запоры

в) непроходимость кишечника

г) гангрена легких

д) гипертоническая болезнь

е) почечно-каменная болезнь

ж) сахарный диабет

з) дерматит

14. В каких случаях возникает резко выраженная миоглобинурия?

а) краш-синдром (разможжение тканей)

б) тромбоэмболии легочной артерии

в) гипоксия

г) цирроз печени

д) болезнь Аддисона

е) инфаркт миокарда

ж) полиартрит

15. Какие изменения выявляются при краш-синдроме (длительном раздавливании тканей)?

а) снижение диуреза

б) азотемия

в) миоглобинурия

г) увеличение активности в сыворотке крови КФК

д) увеличение активности в сыворотке крови АСТ

е) увеличение активности в сыворотке крови ЛДГ

ж) снижение уровня мочевины.

16. С каким состоянием проводят дифференциальную диагностику миоглобинурий?

а) гемоглобинурия

б) билирубинемия

в) железодефицитная анемия

г) протеинурия

д) азотемия

е) гематурия

17. Появление миоглобинурии при инфаркте миокарда наблюдается?

18. В регуляции объема внеклеточной жидкости участвуют системы:

а) ренин-ангиотензин-альдостероновая

б) гипоталамус-вазопрессин

в) гипоталамус-гипофиз-кора надпочечников

г) калликреин-кининовая

д) симпато-адреналовая

е) гемостаза

19. Гипоосмолярный синдром обусловлен наличием?

20. Ацидогенез в почках активируется при:

21. Диуретики тиазидового ряда, действуют путем?

а) увеличения выведения хлоридов

б) увеличения выведения бикарбонатов

в) уменьшения выведения бикарбонатов

г) усиления реабсорбции калия

д) увеличения выведения натрия

е) ингибирования реабсорбции натрия

ж) ингибирования реабсорбции хлоридов

22. Диуретики - ингибиторы карбангидразы могут вызвать развитие метаболического ацидоза, вследствие увеличения:

Практическая часть:

Лабораторная работа Анализ мочи с помощью тест-полосок корпорации "Байер".

Данные тест-полоски позволяют определить в одной пробе исследуемой мочи 10 показателей: pH мочи, содержание глюкозы, билирубина, уробилиногена, белка, кетоновых тел, нитритов, эритроцитов, лейкоцитов и удельный вес (плотность) мочи.

Реактивы и оборудование: химический стакан, моча, тест-полоска, индикаторная цветная шкала (стандарт), лист белой бумаги, часы с секундной стрелкой.

ХОД РАБОТЫ: В сухой чистый химический стакан набирают свежую (находящуюся при комнатной температуре не более одного часа после сбора пробы) хорошо перемешанную нецентрифугированную мочу. Затем быстро опускают в него тест-полоску таким образом, чтобы все реагентные зоны были полностью погружены в мочу. Через 2 сек. тест-полоску вынимают, удаляя избыток мочи путем соприкосновения полоски с краем стакана и протягиванием ее в таком положении снизу вверх под углом приблизительно 45 градусов.

Примечание: не прикасаться к аналитической зоне тест-полоски руками и не допускать попадания на нее прямых солнечных лучей, влаги т.п.

После помещают тест-полоску на лист белой бумаги в горизонтальное положение и визуально сравнивают цвет реагентных зон на тест-полоске с цветной шкалой стандарта.

Качественный результат тестирования по всем параметрам тест-полоски, за исключением содержания лейкоцитов, можно получить через 1 - 2 мин.. Для получения полуколичественного результата анализа следует точно соблюдать время по каждому параметру ( см. таб.).

Можно провести исследование пригодных для тестирования полосок при помощи анализатора мочи "КЛИНИТЕК" (в случае наличия такового), строго соблюдая инструкцию по эксплуатации данного прибора (количественный анализ).

Таблица: Временные границы полуколичественного анализа мочи с помощью тест-полосок.

Примечание: Возможное изменение окраски реагентных зон, происходящие после 2 мин от начала анализа, не имеет диагностического значения.

Определение индивидуальных показателей.

Вначале целесообразно определить цвет, прозрачность и запах мочи.

1. Определение pH мочи.

Принцип метода: Реагентная зона содержит 2 индикатора кислотности, которые способны изменять свою окраску при определенной pH среды: 0,2% метилового красного; 2,8% бромтимолового синего и 97% нереактивных элементов. Диапазон чувствительности лежит в пределах pH = 5,0 - 8,5.

Метиловый красный - основной индикатор (интервал pH перехода окраски красной (более кислая среда) в желтую (более основная среда) 4,2 - 6,3):

Бромтимоловый голубой - кислый индикатор (интервал pH перехода окраски желтой (более кислая среда) в синюю (более основная среда) 6,0 - 7,6):

Реакция мочи изменяется при патологических состояниях. Кислая моча отмечается при голодании, сахарном диабете (в основном за счет кетоацидоза), лихорадочных состояниях, подагре (гиперурикурия). Щелочная моча бывает при рвоте (потеря Н+ с содержимым желудка), приеме некоторых препаратов (питьевая сода и т.п.), воспалении мочевого пузыря (цистит), пиелит, что связано с повышением уреазной активности патологической микрофлоры:

карбамидамидогидролаза

СО(NН2)2 + Н2О	СО2 + 2NН3
мочевина	(уреаза), КФ 3.5.1.5	защелачивание мочи

2. Определение содержания глюкозы в моче.

Принцип метода: глюкоза в присутствии фермента глюкозооксидазы (КФ 1.1.3.4.) окисляется кислородом воздуха с образованием перекиси водорода:

Состав реагентной зоны: глюкозооксидаза 2,2%; пероксидаза хрена 1,0% (сопряженные ферментные системы); 8,1% иодида калия (хромоген); 69,8% буфер (для создания оптимума pH действия ферментов); 18,9% - нереактивные элементы. Границы чувствительности, т. е. минимально определяемая концентрация 75 - 125 мг/дл (4 - 7 ммоль/л). Физиологические концентрации не учитываются - проба отрицательна. Положительна при концентрации глюкозы в моче выше 5,5 ммоль/л. Цвет реагентной зоны изменяется от зеленого до коричневого. Диапазон чувствительности: 5,5 - больше или равен 111 ммоль/л (1 - больше или равно 20 г/л).

Примечание: При высокой концентрации в моче глюкозы окрашивание реагентной зоны может быть неравномерным; в этом случае оценку следует проводить по наиболее темному тону. Чувствительность реакции снижается при увеличении удельного веса мочи и может зависеть от колебания температуры. Высокая концентрация аскорбиновой кислоты (и других восстанавливающих веществ) и/или кетоновых тел при низкой концентрации глюкозы может привести к неправильному (ложноотрицательному) результату, а присутствие производных фенолфталеина и сульфофталеина - к ложноположительному.

Клинико-диагностическое значение: В моче здорового человека глюкоза присутствует в виде следов (не более 0,4 г/л) и не определяется обычными химическими реакциями, так как она практически полностью реабсорбируется в проксимальных канальцах нефронов. В этом процессе принимают участие ферменты Е1 гексокиназа (глюкокиназа) и E2 щелочная фосфатаза:

Повышение концентрации глюкозы в моче - глюкозурия. Различают 2 группы глюкозурий

- гипергликемические и

- нормогликемические.

В случае гипергликемических глюкозурий увеличение содержания глюкозы моче связано с повышением ее концентрации в плазме крови. Почечный порог для глюкозы составляет приблизительно 9,9 ммоль/л. Среди гипергликемических глюкозурий выделяют физиологические и патологические.

Физиологические:

1. Алиментарная - при приеме пищи, богатой углеводами.

2. Эмоциональная - при психоэмоциональном напряжении (связана в основном с повышенной стимуляцией адреналином мобилизации гликогена печени, а также с инициацией кортикостероидами процессов глюконеогенеза).

3. При воздействии некоторых лекарственных препаратов: преднизолона, кофеина (повышение концентрации внутриклеточной цАМФ приводит к активации каскадного механизма мобилизации гликогена).

Патологические:

1. Нарушения эндокринной регуляции углеводного обмена - сахарный диабет, синдром Иценко-Кушинга (увеличение концентрации глюкокортикоидов и, как следствие, усиление глюконеогенеза - стероидный диабет), акромегалия (интенсификация контринсулярных эффектов соматотропного гормона), феохромоцитома (избыточная продукция катехоламинов), тиреотоксикоз (гиперфункция тиреоидных гормонов).

2. Поражения центральной нервной системы - инсульты, травмы, опухоли головного мозга, энцефалиты.

3. Недостаточность продукции инсулина поджелудочной железой (опухоль, операция, панкреатит).

4. Болезни печени - гепатиты, цирроз, гемохроматоз.

5. Заболевания сердечно-сосудистой системы - гипертонический криз, инфаркт миокарда.

6. Интоксикации - воспаление легких, инфекции, диспепсии новорожденных, ожоги, отморожения, наркоз, лечение глюкокортикоидами и адренокортикотропином.

Нормогликемическая глюкозурия связана в основном с нарушением реабсорбции глюкозы в почечных канальцах.

Причины:

1. Интоксикации ртутью, угарным газом, стрихнином, хлороформом, эфиром, морфином, флоридзином, кодеином, снотворными препаратами (например, барбитуратами), алкоголем (в последних случаях эффект связан с гипервосстановленностью пиридиновых коферментов).

2. Гломерулонефрит, хронический пилонефрит, нефросклероз, диабетический гломерулосклероз, врожденные тубулопатии (синдром Фанкони); беременность; почечный диабет (наследственная патология, связанная с генетически обусловленным изменением активности ферментов реабсорбции глюкозы в почечных канальцах).

3. Патологические процессы самой почечной ткани - хронический нефрит с проявлением нефротического синдрома при острой почечной недостаточности, вторичный почечный диабет.

3. Определение содержания билирубина в моче.

Принцип метода: Диазониевая соль 2,4-дихлоранилина образует с билирубином азобилирубин - комплекс, окрашенный в лиловый цвет.

Состав реагентной зоны: 0,4% диазониевой соли 2,4-дихлоранилина; 37,3% - буфер; 62,3% - нереактивные элементы. Границы чувствительности: 0,4-0,8 мг/дл ( 7-14 мкмоль/л).

Примечание: Большое количество аскорбиновой кислоты в моче может привести к неправильному негативному результату.

Клинико-диагностическое значение: в норме моча содержит минимальные количества билирубина, не выявляемые обычными качественными пробами. Моча, содержащая желчные пигменты, будет иметь желтовато-коричневый или зеленый цвет. Незначительная билирубинурия (в виде щелочных солей) указывает на раннюю стадию заболевания печени. Значительное увеличение билирубина в моче связано с обтурационными желтухами ( например, закупорке желчного протока), а также с прогрессирующими паренхиматозными желтухами. Увеличение идет в основном за счет прямого билирубина. Непрямой билирубин появляется в моче при значительных поражениях почек.

4. Определение уробилиногена в моче.

Принцип метода: Уробилиноген при взаимодействии с пара-диметиламинобензальдегидом образует комплексное соединение розового цвета - уробилиногенальдегид.

Состав реагентной зоны: 0,2% пара-диметиламинобензальдегида; 99,8% - нереактивные элементы.

Границы чувствительности 0,2 мг/дл (3,2 мкмоль/л). Диапазон чувствительности: 0,2 - 8 мг/дл (3, 2 - 131 мкмоль/л).

Примечание: Ложный позитивный результат может быть вызван реакцией с аминосалициловой кислотой и сульфанил-мочевиной; ложное окрашивание наблюдается и в присутствии бензойной кислоты. Ложный негативный результат может быть вызван формалином. Реактивность теста увеличивается с повышением температуры. Оптимум температуры 22 - 26 градусов по Цельсию.

Клинико-диагностическое значение: у здоровых людей концентрация уробилиногена в моче составляет от 0,2 до 1,8 мг/дл. С 2 мг/дл начинается область патологии.

Уробилиноидурия наблюдается при:

1. паренхиматозных заболеваниях печени (гепатиты, циррозы, отравления, лихорадочные состояния сопровождающиеся токсическим поражением печени) вследствие потери печенью способности задерживать и разрушать уробилиноген, всосавшийся из кишечника;

2. гемолитических состояниях (гемолитическая желтуха, гемоглобинурия, рассасывание больших кровоизлияний, обширные инфаркты миокарда) из-за избыточного поступления билирубина во внепеченочные желчные пути и кишечник, где он восстанавливается бактериями в уробилиноген, который всасывается в тонком кишечнике и через venus portae попадает в печень, где в норме разрушается до три- и дипирролов (пропент-диопента и мезобилилейкана);

3. кишечных заболеваниях, связанных с усиленной реабсорбцией желчных пигментов слизистой оболочкой кишечника (энтероколиты, запоры).

Отсутствие в моче уробилиногена при повышенном содержании билирубина указывает на обтурационную желтуху.

5. Определение содержания белка в моче.

Принцип метода: при взаимодействии альбумина с бромфеноловым голубым образуется комплекс зелено-голубого цвета, интенсивность окраски которого прямо пропорциональна содержанию альбумина.

Состав реагентной зоны: 0,3% тетрабромфенолового голубого; 97,3% - буфера; 2,4% - нереактивных элементов.

Границы чувствительности 15 - 30 мг/дл

Диапазон чувствительности 30 - больше или равно 2000 мг/дл (0,30-больше или равно 20 г/л).

Примечание: данный тест характеризует в основном содержание в моче альбумина. Глобулин, тела Бенс-Джонса, микропротеины выявляются слабее. Негативный результат наличия белка не исключает его присутствия. Сильно щелочная моча или растворение в моче антисептиков и средств дезинфекции, например хлоргексидина, может вызвать неправильный позитивный результат.

Клинико-диагностическое значение: В нормальной моче содержатся лишь следы белка (представлен главным образом уромукоидом - продуктом функционирования почечной ткани), не выявляющиеся обычными химическими методами. Появление белка в моче - протеинурия - свидетельствует о нарушении баланса между процессами его фильтрации и реабсорбции.

Виды протеинурий: преренальная, ренальная(клубочковая и канальцевая), постренальная, смешанная.

Причины протеинурий.

1. Преренальной: повышенное артериальное давление, сердечная декомпенсация; функциональные протеинурии, обусловленные

1.1. усиленным распадом белков тканей при физической нагрузке, психо-эмоциональном напряжении, стрессорном состоянии;

1.2. повышенным гемодиализом, связанным с увеличением активности ренина в плазме.

2. Ренальной клубочковой (гломерулярной): усиление проницаемости базальной мембраны почечного фильтра (из-за уменьшения содержания в ней сиалогликопротеинов при врожденном нефротическом синдроме и при атаке протеазами нейтрофилов; из-за снижения отрицательного заряда на мембране - например, при сахарном диабете). Гломерулярная протеинурия встречается и при других патологических состояниях, сопровождающихся поражением почек - токсикозе беременных, амилоидозе, инфекционных и злокачественных заболеваниях, гломерулонефрите, нефропатиях.

3. Ренальной канальцевой (тубулярной) - тубулярные и интерстициальные нефропатии, нефрозы (нарушение реабсорбции - энергозависимого процесса, происходящего путем эндоцитоза белка с образованием эндосом, сливающихся с лизосомами, где идет протеолиз и образовавшиеся аминокислоты через базальную мембрану тубулоцитов возвращаются в кровоток).

4. Смешанной ренальной - хронический пиелонефрит, диффузный абактериальный интерстициальный нефрит, + хроническая почечная недостаточность при хроническом гломерулонефрите.

5. Постренальной (вызванной патологией мочевыводящих путей) - воспалительная экссудация, когда в мочу попадают слизь, кровь, гной из мочевыводящих путей.

6. Определение содержания кетоновых тел в моче.

Принцип метода: Кетоновые тела образуют с нитропруссидом натрия комплексные соединения оранжево-красного (щелочная среда) и вишневого (при подкислении) цвета:

Состав реагентной зоны: 7,1% нитропруссида натрия; 92,9% - буфера (ацетатного).

Граница чувствительности: 5 - 10 мг/дл (0,5 - 1,0 ммоль/л). Диапазон чувствительности: 0,05 - 1,6 г/л ( 0,5 - 16 ммоль/л).

Примечание: Неправильный позитивный результат может возникнуть в сильнопигментированных пробах мочи или при наличии L-дофа-продуктов обмена в моче.

Клинико-диагностическое значение: Кетоновые тела в нормальной моче встречаются в самых ничтожных количествах. Появление небольшой концентрации кетонов в моче может быть вызвано физическими нагрузками, голоданием, недостаточным углеводным питанием (кетогенная диета), во время беременности или при занятии профессиональным спортом. Часто кетоны можно определить в моче до того, как повысится их концентрация в сыворотке крови (из-за действия физико-химических и физиологических механизмов коррекции нарушений кислотно-основного состояния) - ранняя диагностика. Значительная кетонурия наблюдается при сахарном диабете (недостаточность потребления глюкозы тканями приводит к активации альтернативных энергопродуцирующих метаболических путей т.е. липолиза, бета-окисления жирных кислот; и синтеза других транспортных форм субстратов энергообмена - кетоновых тел), увеличении концентрации контринсулярных гормонов (акромегалия, стероидный диабет и т.п.); тиреотоксикозе (повышение расхода углеводов), подпаутинных кровоизлияниях в мозг, черепно-мозговых травмах, возбуждении ЦНС, болезни Гирке. В раннем детском возрасте продолжительные заболевания желудочно-кишечного тракта (дизентерия, токсикоз) могут привести к кетонурии в результате голодания и истощения.

7. Определение содержания нитритов в моче.

Принцип метода и клинико-диагностическое значение: Принцип тестирования основан на том, что при патологии мочевыводящих путей находящиеся в них бактерии (граммотрицательные микробы) превращают нитраты мочи в нитриты. Розовые пятна или уголки не стоит воспринимать как позитивный результат, если же возникает легкое окрашивание всей реагентной зоны в розовый цвет, это указывает на существование характерных бактерий (более 10⁶ микробов/мл). Интенсивность окрашивания не пропорциональна количеству бактерий, и негативный результат не является показателем полного отсутствия бактерий.

Состав реагентной зоны: 1,4% пара-арсаниловой кислоты; 1,3%- 1,2,3,4-тетрагидробензохинолин-3-ола; 10,8% - буфера; 86,5% - нереактивных элементов.

Границы чувствительности: 0,06-0,10 мг/дл (13-22 мкмоль/л) NO₂-.

Примечание: Ложный негативный результат может возникнуть если: 1) время нахождения мочи в мочевом пузыре менее 4 часов (поэтому для анализа рекомендуется брать утреннюю мочу, т.к. чем больше время нахождения мочи в мочевом пузыре, тем точнее результат анализа); 2) возбудитель инфекции мочевыводящих путей действует не производительно; 3) в силу особенностей питания в моче мало нитратов. Ложнонегативный результат также может быть при высоких концентрациях в моче аскорбиновой кислоты и одновременном низком содержании нитритов.

8. Определение содержания эритроцитов в моче.

Принцип метода: Основан на том, что гемоглобин эритроцитов, обладая пероксидазной активностью, разлагает диизопропиленбензона дигидропероксид с выделением атомарного кислорода, который окисляет 3,5,3',5'-тетраметилбензидин в соединение зеленого цвета:

Состав реагентной зоны: 6,8% диизопропиленбензона дигидропероксида, 4% - 3,5,3',5'-тетраметилбензидина, 48% ‑ буфера; 41,2% ‑ нереактивных элементов.

Границы чувствительности: 0,015 - 0,062 мг/дл Hb.

Диапазон чувствительности: 10 - 200 эритроцитов/мкл.

Для свободного гемоглобина реагентная зона окрашивается равномерно в зеленый цвет. Целые (неповрежденные) эритроциты появляются на реагентной зоне в виде зеленых точек.

Примечание: повышенный удельный вес или повышенная концентрация белка может снизить реактивность теста.

Клинико-диагностическое значение: В норме кровь в моче отсутствует. Появление крови с форменными элементами в моче - гематурия; появление в моче кровяных пигментов (гемоглобина и метгемоглобина) - гемоглобинурия. При гематурии моча непрозрачна, имеет красноватый оттенок; при гемоглобинурии моча чаще окрашена в кофейно-бурый цвет. В случае гематурии и гемоглобинурии в моче содержится белок. Гематурии подразделяются на почечные и внепочечные. Почечная гематурия - основной симптом острого нефрита (сопровождается гемоглобинурией). Внепочечные гематурии связаны с воспалительными процессами и травмами мочевых путей (мочевые камни, рак мочевого пузыря, цистит). Гемоглобинурия отмечается при отравлении гемолитическими ядами, тяжелых инфекциях, ожогах, при которых происходит разрушение (гемолиз и связанная с ним гемоглобинемия) эритроцитов.

9. Определение содержания лейкоцитов в моче.

Принцип метода: переход окраски индикаторной зоны от бежевой через серую к сиреневой и далее фиолетовой свидетельствует о пропорциональном увеличении числа лейкоцитов в моче, соответствующим шкале (15 (следы) - 70 - 125 - 500 лейкоцитов/мкл).

Состав реагентной зоны: 0,4% производного пиррола аминокислотного; 0,2% соли диазония; 40,9% буфера; 58,5% нереактивных элементов.

Границы чувствительности: 5-15 лейкоцитов/поле.

Диапазон чувствительности: 15-500 лейкоцитов/мкл.

Примечание: Повышенная концентрация глюкозы, щавелевой кислоты, медикаментов (цефалексин, цефалотин, тетрациклин) приводит к ослаблению реакции. Сильно окрашенные пробы мочи могут повлиять на цвет реагентной зоны. Иногда у пациентов женского пола позитивный результат может быть вызван примесями вагинальных выделений в моче.

Клинико-диагностическое значение: В норме моча не содержит лейкоцитов (до 10 в одном микролитре). Лейкоциты мочи представлены главным образом нейтрофилами, но могут быть обнаружены эозинофилы и лимфоциты. Увеличение числа лейкоцитов в моче (лейкоцитурия) до очень больших количеств (пиурия) свидетельствует о воспалительных процессах в почках и мочевыводящих путях (туберкулез почки, пиелиты, циститы, пиелонефриты).

10. Определение плотности мочи.

Принцип метода: Тест основан на pKs (показатель эмпирической константы высаливания) - изменении различных электролитов в зависимости от концентрации (определяющей ионную силу) ионов в моче.

Состав реагентной зоны: 2,8% бромотимолового голубого; 97,2% - поли-(метил-, винил-, эфир- малеиновой кислоты натриевая соль).

Диапазон чувствительности: 1,000 - 1,030 г/л. Изменение окраски от сине-зеленой через морскую, зеленую, защитную, травяную, хаки до охристой.

Примечание: При уровне pH мочи выше 6,5 результат увеличивается на 0,005. Повышенное значение плотности может быть вызвано присутствием небольшого количества (1-7,5 г/л) белка в моче.

Клинико-диагностическое значение: Плотность мочи в норме колеблется в широких пределах (1,002-1,035 г/л). Она зависит от количества растворенных в ней веществ и количества выделяемой мочи с одной стороны, с другой стороны - от соотношения количеств жидкости, поступившей в организм и выведенной из организма внепочечными путями (потоотделение, диарея и т. п.).

Плотность мочи дает представление о приблизительном количестве о растворенных в ней веществ. Ориентировочно расчет плотного остатка г/л получают, умножив 2 последние цифры (сотые и тысячные доли единицы) относительной плотности на коэффициент 2,6. В норме с мочой выделяется 50 - 75 г/сут плотных веществ. (В норме чем больше объем выделяемой мочи, тем меньше ее плотность и наоборот).

Изостенурия - выделение мочи с постоянной плотностью, равной плотности первичной мочи (1,010 г/л) свидетельствует о почечной недостаточности. Постоянно низкое значение плотности мочи - гипоизостенурия - указывает на нарушения концентрационной функции почек (хронический нефрит, первично или вторично сморщенная почка). При несахарном диабете резко снижается плотность мочи, что связано с нарушением обратной реабсорбцией воды.

При лихорадочных состояниях, общем венозном застое отмечается увеличение плотности и уменьшение объема выделяемой мочи. Сахарный диабет приводит к несоответствию между количеством мочи (наблюдается полиурия) и ее плотностью, повышенной из-за присутствия больших концентраций глюкозы и кетоновых тел.

РЕЗУЛЬТАТЫ РАБОТЫ:

Оформление результатов исследования проводится по следующей форме:

Клинический анализ мочи.

Ф.И.О. исследуемого................. Пол… Дата анализа...........

Далее заполняется таблица:

ОБЩИЙ ВЫВОД:

(В общем выводе делается запись об освоении данного метода анализа и предположительный диагноз, поставленный на основе полученных результатов анализа мочи).

ЗАНЯТИЕ 31
ТЕМА: Биохимия печени. Обмен ксенобиотиков.

Цель занятия: изучить особенности метаболизма печени и биохимическую основу ее основных функций в норме и при патологии. Научиться определять активность щелочной фосфатазы сыворотки (плазмы) крови.

2. Исходный уровень знаний и умений:

1. Особенности кровоснабжения печени (кровообращение портальное и из большого круга).

2. Клеточный состав печени. Строение печеночной дольки, морфо-функциональная гетерогенность гепатоцитов

3. Пути метаболизма углеводов, липидов, аминокислот

4. Механизмы регуляции уровня глюкозы в крови, глюконеогенез

5. Механизмы действия гормонов

6. Метаболизм и механизм действия витамина D

7. Основные функции печени. Регуляция основных гомеостатических параметров организма.

8. Функции детоксикации и экскреции (билирубин, холестерина, стероидных гормонов, лекарств, токсинов и др.)

9. Регуляция желчеобразования и желчевыделения. Функции желчи

Студент должен знать:

1. Клеточный состав печени, строение и функции гепатоцита

2. Особенности кровоснабжения печени и печеночной балки

3. Функциональная гетерогенность гепатоцитов

4. Метаболизм и механизм действия витаминов и гормонов

5. Метаболизм углеводов, липидов и аминокислот

6. Механизмы регуляции уровня глюкозы в крови

7. Микросомальное окисление

8. Механизмы регуляции гемостаза

9. Принципы энзимодиагностики

Студент должен уметь:

1. Работать на колоритметре

Структура занятия:

3. Теоретическая часть.

3.1. Общая характеристика печени как органа гомеостаза. Клеточный состав печени. Метаболическая гетерогенность гепатоцитов.

3.2. Роль печени в углеводном обмене (синтез и распад гликогена, глюконеогенез), функциональные пробы, характеризующие роль печени в углеводном обмене (сахарная кривая, нагрузка глюкозой, фруктозой, галактозой).

3.3. Роль печени в липидном обмене (переваривание и всасывание, синтез ТГ, ФЛ, ХС, ЛП, кетоновых тел). Состав и функции желчи. Печеночные камни, их состав и механизм образования. Функциональные пробы, характеризующие роль печени в липидном обмене (липидный спектр, содержание общих липидов, ТГ, ХС, ФЛ, кетоновых тел). Роль печени в азотистом обмене (синтез белков плазмы, регуляция пула аминокислот, синтез мочевины, обмен билирубина). Механизм развития печеночной комы. Функциональные пробы, характеризующие роль печени в азотистом обмене (электрофореграммы белков плазмы крови, содержание свободных аминокислот, пробы на гемокоагуляцию - протромбиновый индекс и др., аммиак, мочевину, билирубин). Роль печени в гормональном гомеостазе - метаболизм гормонов в печени. Функциональные пробы, характеризующие роль печени в развитии вторичного гиперальдостеронизма.

3.4. Основные пути метаболизма ксенобиотиков:

3.4.1. транспорт в крови и через мембраны,

3.4.2. гидроксилирование и микросомальная ДЦ и др. реакции,

3.4.3. конъюгация (роль ФАФС, УДФГК, АМ, ацетил КоА и др.).

3.5. Пробы на детоксикацию (амидопириновая и др.).

3.6. Энзимодиагностика заболеваний печени:

3.6.1. гепатоцеллюлярных - альдолаза, ЛДГ, АСТ, АЛТ, ГДГ.

3.6.2. холестатических - ЩФ, 5-нуклеотидаза, холинэстераза, ГГТП, ЛАП.

4. Практическая часть - выполнение лабораторной работы:

4.1. Определение активности щелочной фосфатазы сыворотки крови.

4. Решение задач и проведение контроля конечного уровня

Литература основная:

1. Материал лекций.

2. Березов Т.Т. Коровкин Б.Ф. Биологическая химия, М., Медицина, 1990, стр. 427-437, Медицина, 1998 г., стр. 551-564.

3. Николаев А.Я. Биологическая химия, М., Высшая школа, 1989, стр. 411-426.

дополнительная

4. Клиническая биохимия под ред. Базарновой, Киев, 1986 г.

5. Хашен В. Очерки по патологической биохимии М., Медицина, 1978.

6. Зилва Ф. Пэннел П. Клиническая химия в диагностике и лечении, М., Медицина, 1988.

ЗАДАЧИ:

1. При каких заболеваниях отмечается повышение тимоловой пробы?

а) острый ревматизм

б) хронический гепатит в стадии обострения

в) хронический гепатит вне стадии обострения

г) желчно-каменная болезнь

д) цирроз печени

е) хронический гастрит

ж) инфаркт миокарда

з) острая пневмония

2. При каких заболеваниях наблюдается снижение уровня мочевины в крови?

а) острая желтая атрофия печени

б) подагра

в) обтурационная кишечная непроходимость

г) гемолитическая желтуха

д) брюшной тиф

е) гломерулонефрит

ж) гипертоническая болезнь

3. Какие биохимические параметры характеризуют воспалительный процесс при заболеваниях печени?

4. Активность щелочной фосфатазы сыворотки крови повышается при:

5. Активность кислой фосфатазы сыворотки крови повышается при:

6. Активность АЛТ сыворотки крови повышается при:

7. При каких заболеваниях возрастает активность фруктозо-1,6-дифосфатальдолазы сыворотки крови ?

8. Активность фруктозо-1 фосфатальдолазы сыворотки крови повышается при:

а) гемолитической анемии

б) функциональной гипербилирубинемии

в) циррозе печени (неактивная фаза)

г) вирусном гепатите

в) циррозе печени (активная фаза)

д) уремии

9. Какие тесты характеризуют антиоксидантную систему организма?

а) уровень a-токоферола

б) уровень C-реактивного белка

в) уровень гамма-глобулинов

г) уровень общих липидов

д) уровень церулоплазмина

е) активность АЛТ

ж) активность АСТ

10. Основными антиоксидантами организма являются?

11. Ферментами, ингибирующими процесс ПОЛ являются:

а) липоксигеназа

б) ксантиноксидаза

в) NADРH-зависимая микросомальная диоксигеназа

г) супероксиддисмутаза

д) глутатионпероксидаза

е) каталаза

12. Для надпеченочных желтух характерно увеличение в плазме крови:

а) уровня неконъюгированного билирубина

б) уровня билирубин-глюкуронидов

в) уровня желчных кислот

г) активности трансаминаз

д) уровня липидов

е) уровня лактата

13. Для печеночной желтухи характерно повышение уровня :

14. Какой из синдромов поражения печени характеризуется одновременным увеличением активности щелочной фосфатазы и гамма-глутамилтранспептидазы, повышением уровня холестерина, ЛПОНП, ЛПНП и общего билирубина:

15. Какой из синдромов поражения печени характеризуется увеличением активности АЛТ, фруктозо-1 фосфатальдолазы, ЛДГ и содержания билирубина?

16. Какой из синдромов патологии печени характеризуется уменьшением активности холинэстеразы, содержания холестерина, протромбина, и увеличением концентрации билирубина?

17. Какой из синдромов патологии печени характеризуется положительной тимоловой пробой, умеренной гиперпротеинемией, гиперглобулинемией, увеличением уровня фибриногена?

18. Где синтезируется альфа-глобулины и белки гемостаза?

19. Где синтезируются часть бета- и гамма-глобулины?

20. При каких состояниях увеличивается активность гамма-глутамилтранспептидазы?

а) гемолиз

б) обтурация желчевыводящих путей

в) отравление барбитуратами

г) острые инфекции

д) хронический гастрит

е) реактивные гепатиты алкоголиков

ж) язвенная болезнь желудка

21. Активность холинэстеразы крови понижается при:

22. При патологии каких органов наблюдается снижение уровня факторов свертывающей системы крови?

23. При каких заболеваниях становится положительным показатель тимоловой пробы?

24. Какие изменения характерными для печеночной комы?

а) гипопротеинемия

б) повышение уровня аммиака в крови

в) нарушение синтеза мочевины

г) увеличение количества альбумина

д) уменьшение количества альбумина

е) повышение уровня фибриногена

ж) гипергликемия

з) гипогликемия

25. Синдром холестаза характеризуют такие показатели как:

а) активность трансаминаз

б) активность холинэстеразы

в) активность щелочной фосфатазы

г) уровень билирубина

д) уровень общего белка

е) активность кислой фосфатазы

ж) активность лейцинаминопептидазы (ЛАП)

з) билирубин мочи

и) активность гаммаглутамилтранспептидазы (ГГТП)

Практическая часть:

Лабораторная работа №1. Определение активности щелочной фосфатазы сыворотки крови

ПРИНЦИП МЕТОДА: основан на количественном определении неорганического фосфора образующегося в процессе гидролиза бета-глицерофосфата щелочной фосфатазой сыворотки крови:

Фосфор определяют колориметрическим методом по цветной реакции с молибденовым реактивом (молибдатом аммония) в присутствии восстановителя - аскорбиновой кислоты. Продукт реакции - молибденовый синий дает синее окрашивание раствора, интенсивность окраски которого, определяемая на фотоэлектроколориметре, прямо пропорциональна количеству фосфора в пробе.

За единицу активности щелочной фосфатазы принимают прирост 1 мг фосфора на 100 мл сыворотки. Нормальная активность щелочной фосфатазы сыворотки крови взрослых равна 2-4 ед., а у детей, в связи с интенсивным костеобразованием - 5-15 ед.

ХОД РАБОТЫ. В опытную пробирку вносят по 0,1 мл сыворотки крови. В опытную и в контрольную пробирки - 1 мл щелочного раствора бета-глицерофосфата (pH 9,0). Обе пробирки, опытную и контрольную, инкубируют в термостате в течение 1 часа при температуре 37°С. После инкубации пробирки охлаждают, в контрольную пробирку, вносят 0,1 мл сыворотки и 0,9 мл раствора ТХУ (для осаждения белков), а в опытную пробирку прибавляют 0,8 мл раствора ТХУ. Содержимое каждой пробирки фильтруют в цилиндр емкостью 10мл. Осадок на фильтре промывают 1 мл воды. Объем доводят водой до 5 мл и определяют количество неорганического фосфора в опытном и контрольном фильтрате. Для этого в каждый цилиндр приливают по 1 мл молибденового реактива, по 0,5 мл 0,5 %свежеприготовленного раствора аскорбиновой кислоты. Объем проб доводят дистиллированной водой до 10 мл, перемешивают и через 5 минут фотометрируют обе пробы против воды с красным светофильтром в кювете с толщиной слоя 5 мм.

Количество фосфора в пробе определяют по оптической плотности, используя калибровочную кривую.

КЛИНИКО-ДИАГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ.

Активность щелочной фосфатазы сыворотки крови увеличивается при болезнях печени, например при механической желтухе, в меньшей степени она повышается при гепатитах, циррозах и др. Активность щелочной фосфатазы резко возрастает также при рахите.

ВЫВОД:

ЗАНЯТИЕ 32
ТЕМА: Контрольное занятие по разделу «Биохимия крови, почек и печени»

Контрольные вопросы:

1. Функции крови.

2. Кровь. Основные физико-химические константы крови (pH, pCO₂, pO₂, плотность, осмолярность). Их изменения при патологии.

3. Плазма крови, ее количественный и качественный состав. Содержание общих липидов, триглицеридов, холестерина, глюкозы, белка, мочевины, мочевой кислоты, натрия, калия, кальция, хлора, магния, бикарбонатов норме и при патологии.

4. Белки плазмы крови, их классификация. Характеристика их отдельных представителей. Методы фракционирования.

5. Изменение белкового спектра при патологии.

6. Основные небелковые компоненты крови. Остаточный азот, его происхождение, диагностическое значение.

7. Понятие о КОС. Принципы регуляции КОС.

8. Механизмы регуляции КОС: физико-химические и физиологические.

9. Классификация нарушений КОС.

10. Причины и механизм развития метаболического ацидоза.

11. Причины и механизм развития респираторного ацидоза.

12. Причины и механизм развития метаболического алкалоза.

13. Причины и механизм развития респираторного алкалоза.

14. Физиологические механизмы коррекции нарушений КОС.

15. Лабораторная диагностика и оценка нарушений КОС (показатели КОС, электролиты крови, pH мочи) на примере метаболического и респираторного ацидоза.

16. Общая характеристика эритроцита. Особенности метаболизма. Минеральный состав эритроцитов.

17. Характеристика мембран эритроцитов. Антиоксидантная защита. Глутатион, его строение, функции.

18. Hb, его строение, свойства.

19. Производные Hb, виды Hb. Аномальные Hb.

20. Сравнительная характеристика Hb и миоглобина.

21. Дыхательная функция крови, ее регуляция. Роль 2,3-ДФГК. Виды гипоксии, аноксия. Нарушение обмена при гипоксии.

22. Обмен хромопротеидов. Переваривание и всасывание.

23. Биосинтез гема (до порфобилиногена), его регуляция.

24. Распад Hb в клетках РЭС.

25. Обмен билирубина в печени.

26. Превращение билирубина в ЖКТ.

27. Лабораторная диагностика желтух (гемолитической, паренхиматозной, обтурационной).

28. Метаболизм железа (всасывание, транспорт в крови, депонирование).

29. Особенности метаболизма лейкоцитов. Биохимическая основа фагоцитоза.

30. Особенности метаболизма тромбоцитов.

31. Строение и особенности кровоснабжения нефрона. Механизм и биохимические основы образования мочи в отдельных частях нефрона: фильтрация, реабсорбция, секреция.

32. Нарушение процессов фильтрации, реабсорбции, секреции и их лабораторная диагностика.

33. Механизм активного транспорта глюкозы, аминокислот.

34. Общие свойства мочи в норме и при патологии (суточное количество, цвет, прозрачность, удельный вес, pH и др.).

35. Органические компоненты мочи (мочевина, мочевая кислота, аминокислоты, креатин, креатинин, гормоны); неорганические (Na⁺, К⁺, Ca²⁺, Мg²⁺, NH₃⁺, фосфаты, сульфиты, HCO₃^-) в норме и при патологии.

36. Патологические компоненты мочи (кровь, белок, сахар, билирубин). Причины их появления и диагностическое значение.

37. Клиренс в норме и при патологии. Его диагностическое значение.

38. Гомеостатическая функция почек. Роль почек и механизм регуляции:

- объема циркулирующей крови (ОЦК) и артериального давления

- баланса электролитов

- КОС (механизмы ацидо- и аммониогенеза)

- уровня глюкозы в крови (особенности глюконеогенеза в почках)

- уровня биологически активных веществ

- эритропоэза

39. Метаболическая гетерогенность почечной ткани. Особенности липидного, углеводного и белкового обмена почечной ткани.

40. Нарушение обмена при острой и хронической почечной недостаточности.

41. Почечные камни, их состав, причины и механизм возникновения.

42. Клеточный состав печени. Метаболическая гетерогенность гепатоцитов.

43. Печень как главный орган гомеостаза. Особенности липидного, углеводного и белкового обмена печени.

44. Роль печени в углеводном обмене.

45. Функциональные пробы, характеризующие роль печени в углеводном обмене.

46. Роль печени в липидном обмене. Механизм развития жировой инфильтрации и дегенерации печени.

47. Функциональные пробы, характеризующие роль печени в липидном обмене.

48. Роль печени в азотистом обмене. Механизм развития печеночной комы.

49. Функциональные пробы, характеризующие роль печени в азотистом обмене.

50. Роль печени в регуляции КОС.

51. Роль печени в регуляции уровня биологически активных веществ и функциональные пробы, характеризующие эту роль.

52. Роль печени в гормональном гомеостазе - метаболизм гормонов. Общая схема метаболизма гормонов в печени.

53. Основные пути метаболизма ксенобиотиков.

54. Пробы на детоксикацию.

55. Энзимодиагностика заболеваний печени:

- гепатоцеллюлярных

- холестаза

• ⇐ Назад
• 123
• 4
• Далее ⇒