ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА № 3 ТЕМА: ФИЗИКО - ХИМИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА БЕЛКОВ

ОПЫТ № 1. ВЫДЕЛЕНИЕ КАЗЕИНА ИЗ МОЛОКА

Принцип метода: В молоке содержится специфический белок казеин, содержащий фосфор. 80% всех белков молока приходится на долю казеина. Этот белок обладает кислыми свойствами и находится в молоке в виде растворимой кальциевой соли. При подкислении казеин выпадает в осадок в виде белых рыхлых хлопьев, которые фильтрованием отделяются от раствора.

Ход работы: В стакан ( 50 мл ) отмеряют 3 мл молока и добавляют 7 мл дистиллированной воды. После перемешивания добавляют 10 1% НС1, т.к. в избытке соляной кислоты осадок казеина растворяется. Перемешивают и оставляют при комнатной температуре на 5 минут до образования рыхлого осадка.

Для удаления соляной кислоты в стакан приливают 10 мл дистиллированной воды, перемешивают и оставляют при комнатной температуре на 5 минут. Жидкость осторожно сливают с осадка. Процедуру повторяют. Осадок фильтруют через бумажный фильтр.

ОПЫТ № 2. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ИЗОЭЛЕКТРИЧЕСКОЙ ТОЧКИ КАЗЕИНА
Принцип метода:Белки являются амфотерными электролитами, поэтому диссоциируют с образованием как положительно, так и отрицательно заряженных групп. При определении рН среды можно добиться такого соотношения ионизированных групп, при котором белковый раствор наименее устойчив и белок выпадает в осадок.

Ход работы: В 5 пробирок приливают из бюретки следующие количества 0,1 н. раствора уксусной кислоты: в первую - 0,25 мл; во вторую - 0,5 мл; в третью -1,0 мл; в четвертую - 2,0 мл; в пятую - 4,0 мл. Из другой бюретки в той же последовательности в каждую пробирку прибавляют 8,75 мл; 8,5 мл; 8,0 мл; 7,0 мл и 5,0 мл воды.

В каждую из пробирок приливают пипеткой по 1 мл раствора казеина и наблюдают

за степенью помутнения раствора.

№ п/п	Реактив
1.	0,1 н. р-р СНзСООН	0,25	0,5	1,0	2,0	4,0
2..	Вода	8,75	8,5	8,0	7,0	5,0
3.	0,4% р-р казеина	1,0	1,0	1,0	1,0	1,0
4.	рН
5.	Степень помутнения

Результаты:_______________________________________________________________
__________________________________________________________________________________

Выводы:________________________________________________________________________________________________________________________________________________

ОПЫТ№3. ОСАДОЧНЫЕ РЕАКЦИИ НА БЕЛКИ

3.1. Осаждение белков при кипячении.

Принцип метода. Для осаждения белка необходимо разрушить его гидратную оболочку и нейтрализовать его заряд. При кипячении происходит денатурация, разрушается гидратная оболочка. Белок теряет заряд, если рН раствора близок к изоэлектрической точке этого белка.

Ход работы. В 5 пробирок вносят по 5 капель раствора яичного белка. Затем добавляют:

во вторую пробирку - 1 каплю уксусной кислоты;

в третью - 10 капель уксусной кислоты;

в четвертую - 5 капель уксусной кислоты и 2 капли насыщенного раствора хлорида

натрия;

в пятую - 2 капли гидроксида натрия.

Все пробирки кипятят 5 минут в водяной бане.

Результаты:

№ пробирк и Реакция среды Наличие факторов стабилизации

Гидратная оболочка (есть/нет) Заряд (есть «+» или «-»/ нет)

1. Нейтральная

2. Слабокислая

5. Сильнокислая

4. Кислая + электролит

5. Щелочная

Выводы:________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

3.2. Осаждение белка ацетоном

Ход работы. В пробирку наливают 5 капель раствора белка, затем добавляют 0,5 мл ацетона, осторожно наслаивая по стенке пробирки.

Результаты:_____________________________________________________________________________________________________________________________________________

Выводы:________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

3.3. Осаждение белков спиртом
Ход работы:В пробирку вносят 5 капель раствора белка, добавляют несколько кристаллов хлорида натрия (NаС1) и приливают 5 мл этилового спирта.

Результаты:_____________________________________________________________________________________________________________________________________________

Выводы:________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

3.4. Осаждение белка органическими кислотами

Принцип метода: органические кислоты, такие как трихлоруксусная и сульфосалициловая кислоты, вызывают денатурацию и осаждение белка.

Ход работы:В пробирку наливают 5 капель раствора белка, затем добавляют 3-4 капли 8% трихлоруксусной кислоты (ССl3СООН ).

Результаты:_____________________________________________________________________________________________________________________________________________

Выводы:_______________________________________________________________________________________________________________________________________________________

3.5. Осаждение белка концентрированной азотной кислотой

Принцип метода: Концентрированная азотная кислота вызывает денатурацию белка и его осаждение. Осадок белка не растворяется в избытке азотной кислоты.

Ход работы:В пробирку вносят 10 капель концентрированной азотной кислоты, затем осторожно из пипетки наслаивают по стенке пробирки примерно 1 мл раствора белка так, чтобы жидкости не смешивались.

Результаты:____________________________________________________________________________________________________________________________________________

Выводы:_____________________________________________________________________________________________________________________________________

3. б. Осаждение белка солями тяжелых металлов

Ход работы:В пробирку вносят 5 капель раствора белка, осторожно, по каплям при встряхивании добавляют раствор сульфата меди (СиS04).

Результаты:_________________________________________________________________________________________________________________________________

Выводы:____________________________________________________________________________________________________________________________________________________

ОПЫТ № 4. ФРАКЦИОННОЕ ВЫСАЛИВАНИЕ БЕЛКОВ

Принцип метода:

Ход работы:К 1 мл неразбавленного яичного белка добавляют 6 мл воды. Образуются небольшое количество белого хлопьевидного осадка глобулинов. Глобулины могут растворяться в слабых растворах солей и не растворяются в дистиллированной воде.

В пробирку наливаем несколько капель насыщенного раствора (NН4)2SO4, после чего происходит растворение выпавшего глобулина.

К 1 мл данного раствора яичного белка. Содержащего альбумины и глобулины приливаем 1 мл насыщенного раствора (NH4)2SO4. Вьпадает осадок глобулинов. Который удаляется фильтрованием.

К фильтрату добавляем кристаллический сульфат аммония до полного насыщения. Образуется осадок яичного альбумина. Который всплывает вверх вследствие высокой плотности жидкости. Осаждение белков солями является обратимым процессом и при добавлении воды белки снова растворяются.

Результаты опыта и выводы оформляют в виде таблицы:

Название белка	Степень насыщения (NH₄)₂SO₄	Результаты опыта	Выводы
Яичный белок	50%
Яичный белок	100%

ОПЫТ № 5. ДИАЛИЗ БЕЛКОВ

Принцип метода:Очень удобным методом очистки белковых растворов от низкомолекулярных примесей, например от избытка солей после высаливания, является диализ.

Диализом называют процесс разделения высокомолекулярных и низкомолекулярных веществ с помощью полупроницаемых мембран (коллодий, целлофан, пергамент и т.д.). Обладая большим диаметром, белковые молекулы не способны проникать через такие мембраны, в то время как частицы низкомолекулярных веществ легко проходят через них.

Ход работы:В пробирку наливают 1 мл раствора яичного альбумина и прибавляют к раствору 1 мл насыщенного раствора сульфата аммония. Образовавшийся осадок отделяют фильтрованием, переносят в пробирку и растворяют физиологическим раствором.

Из листа целлофана, предварительно смоченного дистиллированной водой, делают мешочек (диализатор) и выливают в него содержимое пробирки.

Края мешочка зажимают между двумя стеклянными палочками, прижатыми друг к другу резиновыми колечками, надетыми на концы палочек. Мешочек помещают в стакан с дистиллированной водой, укладывая палочки, зажимающие мешочек, на края стакана. Необходимо проследить за тем, чтобы уровень жидкости в мешочке был ниже уровня жидкости в стакане.

Через 1 час после диализа берут в две пробирки по 1 мл жидкости из стакана и проделывают две реакции:

а) на присутствие SО4²^-: добавляют в первую пробирку 3-4 капли 5%-ного раствора ВаСl2 .

б) на присутствие белка: проделывают биуретовую реакцию.

Жидкость из_ мешочка сливают в пробирку (диализат), отмеривают 10 капель диализата и с ним тоже проделывают биуретовую реакцию.

Результаты:____________________________________________________________________________________________________________________________________________

Выводы:____________________________________________________________________________________________________________________________________________________