I. Учтите и оцените результаты РИФ с синовиальной жидкостью обследуемого с подозрением на бруцеллез и люминесцирующей бруцеллезной сывороткой.

В обычной бактериологической лаборатории основой микробиологической диагностики бруцеллеза являются серологический и аллергический методы.

Серологический метод при бруцеллезе включает комплекс серологических реакций: РА, РНГА, РСК, РИФн, р. Кумбса, ОФР. Из вышеперечисленных реакций широко используется РА в 2-х модификациях: РА на стекле (р. Хеддлсона) и РА в развернутом ряду (р. Райта).

РА Хеддлсона используется при массовых обследованиях. Преимущества этой реакции заключаются в простоте ее постановки, быстроте получения результата, высокой чувствительности и специфичности. Чувствительность реакции обусловлена тем, что ее ставят с неразведенной сывороткой и концентрируемым диагностикумом. Это дает возможность выявлять специфические антитела, находящиеся в сыворотке в низких титрах. Для определения титра антител и динамики их накопления реакцию агглютинации проводят объемным методом в пробирках.

Аллергизация организма при заболевании бруцеллезом позволяет использовать аллергический метод (в/к проба Бюрне).

При этом разная степень информативности этих методов при острых и хронических формах, в разные периоды заболевания определяет большую диагностическую ценность комплексной серо-аллергической диагностики.

2.1. Поставьте, учтите и оцените результаты реакции Хеддлсона с сыворотками обследуемых.

Методика постановки: обезжиренное предметное стекло размером 9х12 см расчерчивают на 6 квадратов. В первом квадрате записывают номер сыворотки; в последующие квадраты вносят ингредиенты согласно таблице 1.

Таблица 1.

Схема постановки РА Хеддлсона

Примечание: физ. раствор, а затем сыворотка вносятся микропипеткой, диагностикум – пастеровской пипеткой.

Содержимое квадратов перемешивают, аккуратно покачивая стекло. Затем стекло равномерно подогревают над пламенем спиртовки до 37° около 2 мин. Стекло необходимо держать высоко над пламенем, чтобы капли не высыхали.

Критерии учета: в случае положительной реакции в первые же минуты появляются хлопья голубого или фиолетового цвета, т. к. бруцеллезный диагностикум окрашен метиленовой синькой или генцианвиолетом. Степень выраженности реакции должна быть не менее ++. Максимальный срок наблюдения 8 мин.

Критерии достоверности: в КС и КА должна отсутствовать спонтанная агглютинация.

Критерии оценки:

- отсутствие агглютинации со всеми дозами сыворотки – результат отрицательный;

- положительная агглютинация с дозой сыворотки 0,04 мл – результат сомнительный;

- положительная агглютинация с дозами сыворотки 0,02-0,01 мл – результат положительный;

- положительная агглютинация на 4 креста со всеми дозами сыворотки – результат резко положительный.

Для диагностики бруцеллеза имеет значение только положительный и резко положительный результаты. В этом случае РА ставится в развернутом ряду (р. Райта).

2.2. Учтите и оцените результаты реакции Райта с сыворотками тех же обследуемых.

Реакция Райта ставится с разведениями сыворотки обследуемого и бруцеллезным диагностикумом, разведенным 1:10. Пробирки термостатируют при 37°С в течение 24 ч. Учет осуществляют по обычной схеме (см. занятие № 10). Диагностический титр реакции равен 1:200. При отрицательном или сомнительном результатах рекомендуется через 7-10 дней повторить реакцию.

Реакция Райта может быть положительной не только у больных, но у вакцинированных и переболевших, поэтому для определения инфекционной природы антител проводится исследование парных сывороток. Нарастание титра антител в 2 и более раз является достоверным серологическим подтверждением заболевания бруцеллезом.

2.3. Учтите и оцените результаты кожно-аллергической пробы Бюрне (см. муляж).

Обследуемому в / к вводят в область предплечья 0,1 мл бруцеллина. Учет реакции проводят через 24 и 48 ч, отмечая при этом размер папулы в см (длина и ширина), наличие гиперемии и болезненности по следующей схеме:

- папула отсутствует – отрицательная реакция;

- папула не больше 1х1 см – сомнительная реакция;

- папула размером 1х1-2,5х2,5 см – слабо положительная реакция;

- папула размером 3х3-4х4 см – положительная реакция;

- папула размером 6х6 см – резко положительная реакция.

При оценке результатов необходимо учитывать, что она может быть положительной не только у больных, но у переболевших и вакцинированных.

На основании полученных результатов реакций Хеддлсона, Райта и пробы Бюрне с учетом клинических и эпидемиологических данных сделайте вывод и заполните бланк-направление и бланк-ответ из лаборатории.

III. Ознакомьтесь и опишите в протоколе биопрепараты, указав, что они содержат, для чего и как применяются.

IV. При подготовке к контрольной работе по теме «Зоонозные инфекции (чума, туляремия, бруцеллез, сибирская язва)» рекомендуется придерживаться следующего плана: