Тема 1: Лабораторная диагностика натуральной оспы.

Занятие 31

Тема : Лабораторная диагностика натуральной оспы.

Лабораторная диагностика гриппа, парагриппа, аденовирусных инфекций.

Цель: На основе знаний биологии вируса натуральной оспы (ВНО), особенностей его взаимодействия с макроорганизмом уметь обосновать тактику лабораторной диагностики, специфическую профилактику вызываемого им заболевания.

Знать:

1. Классификацию, морфобиологическую характеристику вируса натуральной оспы.

2. Особенности эпидемиологии, патогенеза и иммунитета при натуральной оспе.

3. Лабораторную диагностику натуральной оспы: материал, методы.

4. Специфическую профилактику натуральной оспы.

Уметь:

1.Вскрывать зараженный куриный эмбрион, проводить индикацию вируса натуральной оспы.

Контрольные вопросы:

1. Особенности вируса натуральной оспы, определяющие принадлежность вызываемого им заболевания к группе особо опасных, карантинных инфекций.

2. Классификация вируса натуральной оспы. Структура вириона и его антигенная характеристика.

3. Культивирование вируса натуральной оспы и методы индикации.

4. Особенности эпидемиологии, патогенеза и иммунитета при натуральной оспе.

5. Материал и методы лабораторной диагностики натуральной оспы.

6. Специфическая профилактика натуральной оспы. Глобальная ликвидация натуральной оспы. Вклад СССР в программу ВОЗ ликвидации натуральной оспы.

7. Вирус основакцины: его происхождение, использование в генной инженерии.

Задания, выполняемые в ходе занятия (УИРС):

1. Провести вирусологическое исследование с целью диагностики натуральной оспы, для чего: вскрыть куриный эмбрион, зараженный материалом от обследуемого с диагнозом «натуральная оспа»; провести индикацию вируса ( макроскопически, микроскопически при импрегнации серебром). Сделать вывод.

Методические указания, выполняемые в ходе УИРС:

1. Проведите вирусологическое исследование с целью диагностики натуральной оспы, для чего (начало исследования см занятие №30)

Вскройте куриный эмбрион, зараженным материалом от обследуемого с диагнозом «натуральная оспа»; проведите индикацию вируса (макроскопически, микроскопически при импрегнации серебром). Перед вскрытием скорлупу над воздушной камерой обработайте дезинфектантом (70% спирт), стерильными ножницами срежьте ее на 2-3 мм выше границы воздушной камеры. Пинцетом снимете белковую оболочку и подрежьте ножницами хорион-аллантоисную оболочку (ХАО) на границе с воздушной камерой. Содержимое эмбриона аккуратно вылейте в стерильную чашку Петри, а ХАО извлеките пинцетом в стерильную чашку Петри и с физ. раствором, расправьте и изучите макроскопически.

Если в исследуемом материале (содержимое везикул) имелся вирус натуральной оспы, то на ХАО через 72 ч инкубирования эмбрионов обнаруживаются мелкие, диаметром около 1 мм, белые, плотные, резко ограниченные бляшки.

При отсутствии следов поражения результаты исследования считаются отрицательными.

Для микроскопического исследования содержимого бляшек приготовьте препарат. Для этого ножницами вырежьте кусочек ХАО, поместите на предметное стекло и разотрите с помощью второго предметного стекла. Препараты высушите на воздухе и окрасьте по Морозову.

Техника окраски по Морозову.

1. Налить реактив №1 (фиксатор – жидкость Руге) на 1-3 минуты, тщательно промыть водой.

2. Налить реактив №2 (раствор танина), нагреть до отхождения паров, дать остыть, тщательно промыть водой.

3. Налить реактив №3 (раствор нитрата серебра), нагреть до отхождения паров, дать остыть, тщательно промыть водой.

Высушить и микроскопировать и иммерсионной системой. В случае положительного результата в препарате выявляют тельца Пашена.

На основании полученных результатов сделайте заключение, заполните бланк-направление и бланк – ответ из вирусологической лаборатории.

Для серологической идентификации полученной культуры вируса используют центрифугат суспензии ХАО и диагностическую сыворотку. Идентификацию проводят в реакции нейтрализации (РН), реакция торможения гемагглютинации (РТГА, РПГА.

Вопросы для самоконтроля:

1. Назовите свойство вируса натуральной оспы (ВНО), позволяющие обнаружить его в световом микроскопе.

2. Обоснуйте возможность использования вирусоскопической диагностики при натуральной оспе.

3. Назовите способы индикации ВНО при его культивировании в курином эмбрионе и культуру клеток ткани; какие свойства вируса лежат в их основе.

4. Кем и когда был предложен метод специфической профилактики натуральной оспы?

5. Назовите свойства вируса оспы коров, позволившие использовать его для специфической профилактики натуральной оспы у людей.

6. Назовите стратегию и тактику программы ВОЗ глобальной ликвидации натуральной оспы. Кем и когда впервые она была предложена.

7. В каком году был зарегистрирован в мире последний случай заболевания натуральной оспы и с какого года в России не проводиться плановая вакцинация?

8. Где сохраняются в настоящее время штаммы ВНО?

9. В чем заключается суть получения генно-инженерных вакцин на основе вируса осповакцины?