Методика выполнения лабораторной работы.
Правила работы с микроскопом:
Для освещения микроскопа следует пользоваться искусственным освещением.
1.1 Освещение поля зрения искусственным источником света.
Повернуть зеркало вогнутой стороной.
Вращая рукой револьвер, поставить на центральную оптическую ось малое увеличение (объектив 8), подвести объектив под тубус. Щелчок говорит о том, что объектив закреплен на оптической оси.
Открыть диафрагму осветителя, слегка поднять конденсор, установить зеркало так, чтобы источник света был виден на середине фронтальной линзы объектива.
Смотря в окуляр, уловить зеркалом лучшую освещенность поля зрения; если поле зрения излишне освещено, слегка прикрыть диафрагму или опустить конденсор.
1.2. Установка препарата на фокус. Поставить на столик микроскопа препарат и зажать его клеммами.
Наблюдая сбоку, опустить объектив с помощью макрометрического винта почти до препарата.
Смотря в микроскоп, медленно поднимать тубус до появления отчетливых контуров препарата. Уточнить фокус вращением микрометрического винта не более чем на один-два полных оборота в одну или другую сторону.
При равномерном и полном освещении рассмотреть несколько полей зрения препарата, передвигая столик. Повернуть револьвер, подвести под тубус среднее увеличение (объектив 40, 60), установив его на оптической оси (должен быть щелчок).
Наблюдая сбоку, опустить объектив близко к препарату, но не касаясь его. Глядя в окуляр, медленно поднимать тубус до появления контуров препарата. Уточняя видимость микрометрическим винтом, установить фокус и рассмотреть препарат.
Нанести на препарат небольшую каплю иммерсинного масла. Повернуть револьвер и установить (должен быть щелчок) на центральной оптической оси иммерсионный объектив (90).
Наблюдая сбоку, погрузить иммерсионный объектив в каплю масла, почти соприкасаясь линзой с предметным стеклом препарата. Смотря в микроскоп, осторожно и медленно поднимать тубус, вращая микрометрический винт на себя (не отрывая объектива от масла), до появления контуров препарата. Уточнить фокус микрометрическим винтом. Рассмотреть в препарате несколько полей зрения, передвигая столик боковыми винтами. Сравнить изображения препарата при пользовании сухим объективом и иммерсионным.
Вычислить увеличение микроскопа для данного объектива и окуляра.
После окончания работы микроскоп следует обтереть тряпкой, а объективы (иммерсионные) — мягкой тряпкой, слегка смоченной в спирте. Микроскоп убрать на место, где он хранится.
Предметные стекла с отработанными препаратами опустить в банку с дезинфицирующим раствором.
Приготовление препарата:
Раздавленная капля — это метод приготовления препаратов для микроскопического изучения живых объектов. Применяется при исследовании бактерий, клеток культуры тканей, простейших, ряда водорослей и других мелких организмов.
Для приготовления препаратов по методу раздавленной капли на поверхность чистого сухого предметного стекла наносят каплю воды, физиологического раствора или культуральной жидкости.
Стеклянной палочкой или бактериологической петлей в каплю вносят небольшое количество исследуемой культуры и осторожно распределяют ее в жидкости для получения однородной взвеси.
Если суспензия клеток слишком густая, предварительно приготовляют рабочее разведение культуры. Для этого обычно к 4,5 мл воды, физиологического раствора или среды для роста добавляют 0,5 мл суспензии клеток и тщательно перемешивают. Этим достигается десятикратное разбавление исходной суспензии. При необходимости можно получить более высокие разведения (1:100—1:1000 и т. д.);
приготовленную каплю накрывают покровным стеклом, избегая образования пузырьков воздуха.
Если часть жидкости выступает за края покровного стекла, излишек среды можно убрать узкой полоской фильтровальной бумаги.
Готовые препараты рассматривают в сухих и иммерсионных системах. (см. правила работы с микроскопом)
Неокрашенные организмы выглядят под микроскопом обведенными светлой или темной (в зависимости от фокусировки) полоской (линия Векке), возникающей на границе преломления среды и тела.
Рассмотреть под микроскопом и зарисовать: форму клеток дрожжей, расположение клеток дрожжей.
Произвести подсчет дрожжевых клеток различного возраста (молодые, старые, почкующиеся) в 10 полях зрения. Вычислить процентное соотношение микроорганизмов по формуле:
,
Х — число дрожжевых клеток одного возраста;
Хобщее — общее число дрожжевых клеток;
Х% — процентное соотношение
Сделать вывод о возрасте культуры дрожжевых клеток.
Рисунки выполняются на нелинованой бумаге размером не менее 8х8 см, а затем вклеиваются в лабораторный журнал. Каждый рисунок должен содержать название (название микроорганизма и метод его окраски) и порядковый номер (пример: рис 1. Дрожжевые клетки окраска раствором Люголя). Под рисунком обязательно проставляется увеличение ( например: х120). Оформить отчет по работе, который обязательно должен включать принципиальную схему микроскопа и основные правила работы с ним, а так же рисунок культуры дрожжевых клеток с указание клеток различного типа.