Выражение результатов определения активности ферментов

Требования к материалу при определении ферментов

Кровь натощак или не ранее, чем через 4 ч. после приема пищи.

Только негемолизированная сыворотка

Быстро отделять сыворотку от сгустка крови (не позже 2 ч. с момента взятия крови).

Хранение сыворотки при комнатной температуре для большинства ферментов не более 6—8 ч., при 4°С — около одной недели, а в замороженном состоянии — в течение одного месяца. Исключение: ЛДГ (активность в течение первых трех дней лучше сохраняется при комнатной температуре)

Избегать повторных замораживаний и оттаиваний денатурация белка, потеря ферментативной активности.

Требования к материалу при определении ферментов (продолжение)

Если определение проводится в замороженной сыворотке, оттаивание сыворотки должно производиться на водяной бане при температуре 37°С.

Сыворотка лучше, чем плазма. Если в качестве материала используется плазма - учитывать, что многие антикоагулянты могут ингибировать ферментативную активность. ЛДГ и амилаза теряет активность в "оксалатной" плазме, альдолазы – при использовании фторидов, . Фториды нельзя использовать при определении альдолазной активности. Оксалат и цитрат ингибируют амилазную активность и т.д.

Интерференция лекарств - салицилаты повышают активность аминотрансфераз, сульфаниламиды подавляют активность карбоангидразы, препараты опия могут увеличивать активность амилазы и т.д.

Выражение результатов определения активности ферментов

Единица активности (Е) фермента - количество фермента, которое катализирует превращение 1 мкмоль субстрата (или образование 1 мкмоль продукта реакции) за 1 мин при заданных условиях. При этом необходимо указывать температуру, при которой проводилась ферментативная реакция. Активность ферментов в сыворотке или плазме крови следует выражать в единицах на 1 л.

Возможно выражение результата в каталах (долях катала) на литр (1 мкат = 60 ЕД).

48. АсАТ, АлАТ, методы определения, клинико-диагностическое значение. Коэффициент де Ритиса.

АсАТ и АлАТ осуществляют межмолекулярный перенос аминогрупп между аминокислотами и кетокислотами. Отличаются по названиям аминокислоты, от которой отщепляется аминогруппа.

Содержание АсАТ в тканях (по убывающей) – сердечная мышца, печень, скелетная мускулатура, головной мозг, почки, семенники. Активность в сердечной мышце в 10000 раз выше, чем в сыворотке. В эритроцитах – в 10 раз больше, чем в сыворотке. Поэтому сыворотка не должна содержать даже следов гемолиза.

Содержание АлАТ в тканях (по убывающей)– печень, поджелудочная, сердце, скелетная мускулатура.

Методы определения: спектрофотометрические, колориметрические, хроматографические.

Норма в сыворотке: АсАТ — 10-30 МЕ/л при 30С; АлАТ — 7-40 МЕ/л при 30С.

Диагностическое значение определения АсАТ и АлАТ в сыворотке

Инфаркт миокарда АсАТ (в 2-20 раз), АлАТ в 98% случаев. Ч/з 6-12 час., максимум – 24-48 часов, нормализация ч/з 4-5 дней. Степень повышения коррелирует с прогнозом. При стенокардии– в норме.

Заболевания печени: АлАТ, АсАТ при поражении гепатоцитов. Максимум на 6-10 день, нормализуется на 15-20 день. АлАТ отмечается рано (уже в инкубационом периоде) и даже при безжелтушных формах.

Снижение АсАТ и АлАТ - при недостаточности пиридоксина (витамина В6), процедуры гемодиализа; ХПН, Беременность.

Коэффициент де Ритиса: АсАТ / АлАТ = 1,33.- соотношение активности сывороточных АСТ (аспартатаминотрансфераза) и АЛТ (аланинаминотрансфераза). Коэффициент де Ритиса в пределах нормальных значений (0,91-1,75) обычно характерен для здоровых людей. Однако, повышение АСТ при одновременном росте отношения АСТ/АЛТ (коэффициент де Ритиса больше 2) свидетельствует о поражении сердца, и можно с уверенностью говорить об инфаркте миокарда или ином процессе, связанным с разрушением кардиомиоцитов. Коэффициенте де Ритиса меньше 1 говорит о поражении печени. Высокие уровни ферментемии при всех видах вирусного гепатита за исключением дельта-гепатита характеризуются низким коэффициентом де Ритиса и прогностически являются неблагоприятным признаком течения болезни.

Коэффициент Шмидта: для дифференциальной диагностики заболеваний печени - АсАТ + АлАТ /ГлДГ (глютамат дегидрогеназа). При паренхиматозном гепатите ГлДГ меняется незначительно, а при механических желтухах – ГлДГ, но АсАТ + АлАТ .

49. ЛДГ и ее изоферменты, методы определения, клинико-диагностическое значение.

ЛДГ— гликолитический фермент, обратимо катализирующий окисление лактата в пировиноградную кислоту.

L-лактат + НАД пируват + НАДФ + Н⁺

Активность в тканях: практически во всех органах, нааибольшая активность в почках, сердечной мышце, скелетной мускулатуре и печени. Много в эритроцитах.

Требования к материалу: полное отсутствие гемолиза (ЛДГ в эритроцитах в 100 раз, чем в сыворотке).

Определяют спектрофотометрическими и колориметрическими методами.

Норма в сыворотке – до 195 МЕ (при 25⁰С).

Клиническое значение определения активности ЛДГ сыворотки крови:

Инфаркт миокарда. ЛДГ спустя несколько часов после ИМ , max через 36_48 ч (в 10—15 раз по сравнению с нормой). У больных стенокардией не повышается. Диагностическая точность при трансмуральном инфаркте 97±1,7% .

Заболевания печени. ЛДГ в сыворотке при поврежедении целостности гепатоцитов- паренхиматозная желтуха. При механической желтухе в начале заболевания активность ЛДГ в норме, а на более поздних стадиях ЛДГ.

Прогрессирующая мышечная дистрофия ЛДГ

Активность ЛДГ возрастает также при хронических лимфогранулематозах, лейкозах, пернициозной анемии и других заболеваниях