Дослід 2. Аналіз екстрактів антибіотиків методом тонкошарової рідинної хроматографії (ТШХ).

Принцип методу ТШХ базується на різниці в швидкості рухливості хімічних сполук у суміші, що є нанесеними на сорбент при їхньому переміщені в потоці рухомої фази (суміш розчинників). В якості сорбентів використовують дрібнозернистий силікагель, Аl₂О₃, целюлозу, крохмаль, поліамід, тощо. Для тонкошарової рідинної хроматографії антибіотиків використовується суміш розчинників: хлороформ – етанол – метанол - вода у співвідношенні (120:25:6:4,5). Важливо, щоб суміш знаходилась у посудині із щільно закритою притертою кришкою. Суміш готується за добу до виконання досліду для повного насичення посудини парами розчинників.

Матеріальне забезпечення:посудина з розчинниками, силікагелеві пластинка, суміш антибіотиків, мікропіпетки.

Хід роботи:

1. Приготувати силікагелеві хроматографічні пластинки на алюмінієвій основі (Merck UV259). Відступивши 1–1,5 см від нижнього краю, нанести олівцем лінію старту, позначивши через 1 см місця нанесення зразків та підписати їх.

2. Нанести зразки антибіотиків на хроматографічну пластинку, постійно випаровуючи розчинник.

3. Поставити пластинку зі зразками на дно хроматографічної посудини та щільно закрити кришкою.

4. Хроматографічне розділення проводити доти, доки фронт системи розчинників не сягне верхнього краю пластинки.

5. Провести аналіз отриманої хроматограми. Відзначити плями кольорових сполук та порівняти їхнє забарвлення та рухливість (R_f). Визначити на скільки фракцій розділяться окремі зразки. Роздивитися хроматограму в ультрафіолетовому світлі та відмітити олівцем сполуки, які не простежуються при видимому світлі.

Розміщення зони речовини на хроматографії характеризується значенням Rf, що відповідає відношенню відстані від стартової лінії до центру зони речовини до відстані від стартової лінії до лінії фронту розчинників. Значення Rf є постійною величиною для даної речовини у даній системі розчинників. За цим значенням проводять ідентифікацію компонентів суміші.

 

Контроль виконання лабораторної роботи

1. Пояснити протипухлинну дію антибіотиків. Чи всі антибіотики можуть бути використаними як протипухлинні? Поясніть механізм дій афідиколіну, актиноміцину D.

 

2. На чому грунтується метод отримання ДНК?

 

3. Який принцип визначення ДНК за фосфором?

4. З мінералізатом ДНК провели реакцію з розчином амонію молібдату і отримали позитивну реакцію – молібденову синь. Який складник ДНК дає позитивну реакцію?

А. Пуринові основи

В. Піримідинові основи

С. Пуринові нуклеозиди