Жануарларды ан сары суынан Leptospirainterrogans-а арсы антиденелерді анытайтын иммуноферментті тест-жйе

 

Талдауды аидасы

ИФТ-ны негізгі рамдыры – иммуносорбент жне

иммуноферментті конъюгат. Иммуносорбент –	яшытары
		тазартылан лептоспироз антигендерімен
Анти-IgG-КРС	Фермент				сезімталдандырылан
антитело		(сенсибилизацияланан)	полистиролды
		планшет. Конъюгат – ажелкек (хрен)
		пероксидазасымен конъюгацияланан, ірі
	Специфическое	ара	малды	G	класындаы
	иммуноглобулиндерге арсы антидене.
	антитело
		Планшет	яшытарына	зерттелінетін
	Антиген Leptospira	сары	суды		йан	кезде	ІМ
	лептоспирозы	оздырыштарыны	тнді
Твердая фаза
антиденесі антигендермен	атты	фазада

осылады да антиген-антидене кешенін тзеді. Тзілген кешендерді

 

тнді иммуноферментті конъюгаттты кмегімен анытайды. Байланыспаан бос компоненттерді шайып тастааннан кейін яшытара пероксидаза ерітіндісін (сутегіні асын тотыы) жне ТМБ хромогенін осады. Егер кешенде атты фазада иммунопероксидазды конъюгат болатын болса ерітінді боялады.

 

Пероксидазды реакцияны стоп-реагент осу арылы тотатады жне яшытардаы ерітіндіні 450/620 нм. кезіндегі оптикалы тыыздыын лшейді.

 

Талдауды жргізуді негізгі кезедері

 

Процедура	Кешен
тзілуі

 

 

· Тазартылан лептоспирозды антигендермен сенсибилизацияланан полистиролды планшет

 

· Планшет яшытарына лгілерді сйылту шін 80 мкл-ден ерітінді жне 20 мкл-ден баылау мен сары су лгілеріненгізу керек.

 

· 60 мин бойы 37 °С-та стайды (антиген-антидене кешені тзіледі).

 

· яшытарды шаюа арналан буферлік ерітіндімен 4 рет шаю.

 

· яшытара конъюгатты 100 мкл ерітіндісін енгізу

 

· 30 мин бойы 37°С –та стайды(конъюгатпен кешен тзеді).

 

· яшытарды шаюа арналан ерітіндімен 6 рет шаю.

 

· яшытара 100 мкл сутегі асын тотыы мен ТМБ-ны анытаушы оспасын енгізеді.

 

· 30 мин блме температурасында стайды

(боялады)

 

· Реакцияны 50 мкл стоп-реагент осу арылы тотату

 

· 450/620 нм кезінде оптикалы тыыздыын тіркеу

 

 

 

 

 

Сапа крсеткіштеріні сипаттамасы

 

„DIA – Leptospirosis - C” тест-жйесіні сезімталдыын жне тнділігін анытау шін лептоспираларды р трлі сероварианттарына о нтиже берген (микроагглютинация реакциясы бойынша) сары суды 955 лгісі, сондай-а МАР бойынша теріс нтиже берген сары суды 1414 лгісі зерттелінді. Нтижесінде МАР бойынша о нтиже берген сары сулар ИФТ бойынша да о нтиже берді. Ал МАР бойынша теріс нтиже берген 154 лгі ИФТ бойынша о нтижеге ие болып шыты, оларды 14-28 кннен кейін МАР бойынша айта тексергенде 120-сында о нтиже расталды.