РБТЛ (реакция бласттрансформации лимфоцитов

Основан на наличии митогенов, специфически действующих на Т- или на В-лимфоциты, что позволяет раздельно судить о функциональной активности Т- и В-клеток. (Так, ФГА и конканавалин А стимулируют Т-кл., а митоген Лапокосса и ЛПС эшеришии (E.coli) – В-клетки. Схема постановки реакции:

1) выделение лимфоцитов

2) подсчет кол-ва клеток и доведение суспензии до нужной концентрации

3) посев клеток и их последующее культивирование в течение 72 часов

4) регистрация результатов, включая:

а) приготовление мазков для подсчета процента стимулированных лимфоцитов

б) определение интенсивности включения Н-3-тимидина (³Н)

РТМЛ (реакция торможения миграции лейкоцитов)

Используется для изучения акитвности лимфокининов. В основе РТМЛ лежит способность гранулоцитов и моноцитов крови, а также макрофагов к свободной миграции, которая тормозится под действием лимфокина. Миграцию и ее торможение под влиянием лимфокинов изучают в специальных капиллярах или на стекле под слоем агарозы. Результаты ингибиции миграции оценивают по разности площадей миграции клеток.

Оценка гуморального иммунитета (В-системы) включает определение кол-ва В-лимфоцитов в крови с помощью теста розеткообразования лимфоцитов с эритроцитами, несущими на своей поверхности комплекс (антиэритроцитарные АТ + комплемент), с целью выявления на лимфоцитах рецепторов для комплемента и теста иммунофлюоресценции с использованием антисывороток против иммуноглобулинов чка. Функциональную активность В-лимфоцитов оценивают косвенно по уровню сывороточных иммуноглобулинов различных классов – IgG, IgM, IgA, IgE.

35. Комплемент. Свойства, структура, роль в организме, механизмы активации.

СИСТЕМА КОМПЛЕМЕНТА –многокомпонентная самособирающуюся систему белков сыворотки крови, к/я играет важную роль в поддержании гомеостаза. Активируется в процессе самосборки, т.е. последовательного присоединения к образующемуся комплексу отдельных фракций (их 9). Продуцируются они ## печени, мононуклеарными фагоцитами и содержатся в сыворотке крови в неактивном состоянии.

Процесс активации комплемента инициируется 2 путями:

Классический путь (1-4-2-3-5-6…). Инициирующим фактором является иммунный комплекс Аг-Ат, причем только содержащие Fc-фрагменты – IgG и IgM могут связывать С1-фракцию комплемента. При присоединении С1к иммунному комплексу образуется Cl-эстераза формируется энзиматически активный комплекс (С4b+С2а) – С3-конвертазой. Этот фермент расщепляет С3 на С3а и С3b. При взаимодействии субфракции С3b с С4 и С2 образуется пептидаза, действующая на С5. Если инициирующий иммунный комплекс связан с # мембраной, то самособирающийся комплекс С1-4-2-3 обеспечивает фиксацию активированной фракции С5, а затем С6 и С7. Последние три компонента фиксируют С8 и С9. При этом С5а+С6+С7+С8+С9= мембраноатакующий комплекс, после его присоединения # лизируется (гемолиз эритроцитов или бактериолизис).

Особенность альтернативного пути (D-B (P)) в том, что инициация может происходить без участия иммунного комплекса за счет ЛПС # стенки гр–, поверхностных структур вирусов, иммунных комплексов, включающих IgA и IgE. В этом случае необходимо участие сывороточного белка (пропердин), который активен лишь в присутствии ионов Mg²⁺ и факторов В и D. Фактор D в активной форме – протеиназа, расщепляет фактор В с образованием фрагмента Вb, к/й в комплексе с С3b является С3-конвертазой. Функция пропердина – стабилизация комплекса С3b-Вb.

При активации комплемента появляются продукты протеолиза компонентов С4, С2, С3 и С5. Одни из них (фрагменты С4b, С2b, С3b, С5b) участвуют непосредственно в самосборке и активации системы комплемента. В отличие от них низкомолекулярные фрагменты С3а и С5а (АНАФИЛАТОКСИНЫ) играют роль в патогенезе болезней иммунных комплексов и других заболеваний, при которых резко связывание и активация комплемента в Ò.

Комплемент выполняет ряд функций:

цитолитическое и цитотоксическое действие клетки-«мишени»;

анафилотоксины участвуют в иммунопатологических реакциях;

эффективность фагоцитоза иммунных комплексов (через Fc-рецепторы);

фрагмент С3b способствует связыванию и захвату иммунных комплексов фагоцитами, опсонизируя объекты фагоцитоза;

фрагменты С3b, С5а и Вb (хемоаттрактанты), участвуют в развитии воспаления.

В здоровом организме идет постоянное формирование иммунных комплексов (против Аг аутофлоры) Þ белки комплемента быстро обновляются. Потребление комплемента резко при патологиях, связанных с усиленным образованием иммунных комплексов при инфекциях и иммунопатологических состояниях.

36. Радиоиммунный анализ.

Сходен с ИФА, но вместо фермента на иммуноглобулине фиксируется радиоактивная метка (напр., в состав Ig включается атом трития - ³Н). После обработки препарата раствором таких иммуноглобулинов радиоактивное излучение регистрируется (с помощью микродатчиков либо методо сцинтилляций в геле, либо др. методом).

Метод очень чувствителен и относительно легко выполним.

37. Кооперация клеток в иммунном ответе. Процессинг антигенов макрофагами и В-лимфоцитами. Лимфокины.

Патрульные макрофаги, обнаружив в крови чужеродные белки (клетку), предъявляют его Т-хелперам (происходит процессинг АГ макрофагами). Т-хелперы передают АГ информацию на В-лимфоциты, которые начинают бласттрансформироваться и пролиферировать, выделять нужный иммуноглобулин.

Меньшая часть Т-хелперов (индукторы) побуждают макрофагов и макрофаги начинают продуцировать интерлейкин I – активатор основной части Т-хелперов. Те, возбуждаясь, в свою очередь объявляют всеобщую мобилизацию, начиная бурно выделять интерлейкин II (лимфокин), который ускоряет пролиферацию и Т-хелперов, и Т-киллеров. Последние имеют специальный рецептор именно к тем белковым детерминантам, которые были предъявлены патрульными макрофагами.

Т-киллеры устремляются к клеткам-мишеням и разрушают их. Одновременно интерлейкин II способствует росту и созреванию В-лимфоцитов, которые превращаются в плазматические клетки. Тот же интерлейкин II вдохнет жизнь в Т-супрессоры, которые замыкают общую реакцию иммунного ответа, останавливая синтез лимфокинов. Размножение иммунных клеток прекращается, но остаются лимфоциты памяти.

38. Реакция непрямой гемагглютинации и реакция коагглютинации, механизм, практическое использование.

Реакция непрямой гемагглютинации (РНГА). Ставится для обнаружения полисахаридов, белков, экстрактов бактерий, микоплазм, риккетсий и вирусов, иммунные комплексы которых с агглютининами в обычных классических РА увидеть не удается, или же для выявления антител в сыворотках больных к этим высокодисперсным веществам и мельчайшим микроорганизмам.

РНГА для серодиагностики инфекционных болезней. Используя РНГА для обнаружения антител в сыворотках больных, готовят ЭРИТРОЦИТАРНЫЕ АНТИГЕННЫЕ ДИАГНОСТИКУМЫ. Для этого эритроциты обрабатывают 15 мин раствором танина в разведении 1:20 000–1:200 000, что придает им устойчивость и повышает адсорбционную способность. Затем их смешивают с известным антигеном и инкубируют в течение 2 ч при температуре 37°С.. Сенсибилизированные антигеном эритроциты 2–3 раза отмывают изотоническим раствором натрия хлорида и добавляют к сыворотке, разведенной и разлитой в лунки панелей. Контролем служат взвеси интактных и нагруженных антигеном эритроцитов, которые вносят в сыворотки, дающие заведомо положительную и отрицательную реакции.

Результаты реакции учитывают через 2 ч после инкубации в термостате и оценивают плюсами: «++++» – эритроциты покрывают лунку в виде зонтика с неровными краями; «–» – скопление эритроцитов в виде «пуговицы»

РЕАКЦИЯ КОАГГЛЮТИНАЦИИ

Используется для серотипирования моргов и для обнаружения АГ в биологических жидкостях.

Принцип реакции. Используется способность клеток S.aureus неспецифически фиксировать на своей поверхности иммуноглобулин FC-фрагментом благодаря наличию особого белка А. Таким путем получают стафилококковый антительный диагностикум.

Реакция ставится как обычная р-ция агглютинации на среде.

Раздел III.

1. Стафилококки. Лабораторная диагностика стафилококковой инфекции.

Относятся к семейству Micrococcoceae. Род Staphylococcus включает 19 видов, из которых патогенны для человека только некоторые: S.aureus, S.epidermidis и S.saprophyticus. Заболевания вызывают золотистые, реже – эпидермальные и еще реже – сапрофитные стафилококки.

Морфология, физиология. Отдельные клетки имеют форму правильного шара, при размножении образуют скопления в виде гроздьев винограда (slaphyle – виноградная гроздь). Размер от 0,5 до 1,5 мкм. В препаратах из патологического материала (из гноя) располагаются поодиночке, парами или небольшими скоплениями. Золотистые стафилококки имеют способность образовывать нежную капсулу.

Стафилококки – факультативные анаэробы, но лучше развиваются в аэробных условиях, Гр+. На поверхности плотных питательных сред образуют круглые, выпуклые, пигментированные (золотистые, палевые, лимонно-желтые, белые) колонии с ровными краями; в жидких – равномерное помутнение. В лабораториях используют способность стафилококков размножаться в средах с большим количеством (6-10 %) NaCl (ЖСА). Такую концентрацию соли другие бактерии не переносят Þ солевые среды являются элективными для стафилококков. Штаммы золотистых стафилококков, продуцирующие гемолизины, дают на кровяном агаре колонии, окруженные зоной гемолиза.

Стафилококки имеют ряд ферментов, расщепляющих многие углеводы, белки. Дифференциально-диагностическое значение имеет тест на сбраживание глюкозы в анаэробных условиях. Из ферментов, участвующих в патогенезе стафилококковых инфекций, только плазмокоагулаза и частично ДНКаза характерны для S.aureus. Другие ферменты (гиалуронидаза, протеиназа, фосфатаза, муромидаза) непостоянны (но чаще продуцируются S.aureus). Стафилококки ситезируют бактериоцины. Устойчивы к пенициллину (пенициллиназа).

Антигены. Вещества клеточной стенки: пептидогликан, тейхоевые кислоты, белок А, типоспецифические агглютиногены, а также капсула, имеющая полисахаридную природу. Пептидогликан имеет общие АГ с пептидогликанами микрококков и стрептококков. Антигенность тейхоевых кислот связана с аминосахарами. Белок А золотистого стафилококка способен к неспецифическому соединению с Fc-фрагментом IgG, в связи с чем он агглютинируется нормальной человеческой сывороткой. У стафилококков есть 30 белковых типоспецифических антигенов. Но внутривидовая дифференциация по Аг структуре в практике не используется.

Патогенность. Повреждающее действие на клетки и ткани организма человека оказывают токсины и ферменты. Также к факторам патогенности можно отнести капсулу, препятствующую фагоцитозу и связывающую комплемент, а также белок А, инактивирующий комплемент и тормозящий опсонизацию при взаимодействии с Fc-фрагментом IgG.

S.aureus способен выделять ряд токсинов, в частности лейкоцидин, который оказывает губительное действие на фагоцитирующие клетки, главным образом на макрофаги. Гемолизины (, , дельта, ) оказывают лизирующее действие на эритроциты человека и животных (кролика, лошади, барана). Основным из них является -токсин, продуцируемый S.aureus. Помимо гемолитического, этот яд обладает кардиотоксическим действием, вызывает спазм коронарных сосудов и остановку сердца в систоле, он поражает нервные клетки и нейроны, лизирует мембраны и лизосомы клеток, что приводит к освобождению лизосомальных ферментов.

Возникновение пищевых отравлений стафилококковой природы связано с действием энтеротоксинов, продуцируемых золотистыми стафилококками. Известно 6 антигенов различных энтеротоксинов (АВСDЕF).

Эксфолиативные токсины вызывают у новорожденных пузырчатку, локальное буллезное импетиго, генерализованную скарлатиноподобную сыпь. Заболевания сопровождаются внутриэпидермальной отслойкой эпителия кожи, образованием сливающихся пузырей, жидкость в которых стерильна. Фокус стафилококковой инфекции находится чаще всего при этом в пупочной ранке.

Экзоверменты: плазмокоагулаза осуществляет свертывание плазмы (белки как бы одеваются в фиброзный чехол, защищающий их от фагоцитоза). Большие концентрации коагулазы, в организме больного, приводят к уменьшению свертываемости периферической крови, нарушению гемодинамики, прогрессирующему кислородному голоданию тканей.

Гиалуронидаза способствует распространению стафилококков в тканях. Лецитиназа разрушает лецитин, входящий в состав оболочек клеток, вызывает лейкопению. Фибринолизин растворяет фибрин, отграничивающий местный воспалительный очаг, чем способствует генерализации патологического процесса. Патогенетические свойства других экзоферментов стафилококков (ДНКаза, мурамидаза, протеиназа, фосфатаза), часто сопровождающих коагулазную активность, еще не определены.

Экология и распространение. В первые дни жизни человека стафилококки поселяются на слизистых оболочках рта, носа, в кишечнике, а также на коже, входят в состав формирующейся нормальной микрофлоры тела человека.

Стафилококки постоянно поступают в окружающую среду от человека. Они присутствуют на предметах обихода, в воздухе, в воде, в почве, на растениях. Но их болезнетворная активность различна, особое внимание уделяется золотистым стафилококкам как потенциально патогенным для человека. При контакте с источником инфекции носителями S.aureus становятся не все люди. Формированию бактерионосительства способствуют низкое содержание SIgA в носовом секрете и другие проявления функциональной недостаточности иммунной системы. У таких лиц формируется резидентное носительство, т.е. постоянным местом обитания стафилококков становится слизистая оболочка носа, на которой микроорганизмы интенсивно размножаются и выделяются в окружающую среду массивными дозами. В лечебных учреждениях их источником являются больные с открытыми гнойно-воспалительными процессами (инфекция передается контактным путем). Этому способствует длительность выживания стафилококков на окружающих предметах.

Хорошо переносят высушивание, пигмент защищает их от губительного действия солнечного света (прямые солнечные лучи убивают их только через несколько часов). При комнатной температуре они остаются жизнеспособными на предметах ухода за больным в течение 35–50 дней, на предметах твердого инвентаря – десятки дней. При кипячении гибнут мгновенно, чувствительны к дезинфектантам, к бриллиантовой зелени, что позволяет широко применять её для лечения поверхностных воспалительных заболеваний кожи.

Патогенез заболеваний человека. Способны поражать любую ткань человеческого организма. Это местные гнойно-воспалительные процессы (фурункулы, карбункулы, нагноения ран, бронхиты, пневмонии, отит, ангина, конъюнктивит, менингит, эндокардит, энтероколит, пищевые отравления, остеомиелит). Генерадизация любой формы местного процесса завершается сепсисом или септикопиемией. У лиц с иммунодефицитными состояниями стафилококковые инфекции развиваются чаще.

Иммунитет. Взрослые устойчивы, т.к. имеют естественные защитные механизмы и специфические антитела, которые приобретаются в течение жизни при контакте с больными и носителями. В процессе стафилококковой инфекции возникает сенсибилизация организма.

В формировании иммунитета имеют значение как антимикробные, так антитоксические и антиферментные антитела. Степень защиты определяется их титром и местом действия. Большую роль играют секреторные IgA, обеспечивающие местный иммунитет слизистых оболочек. Антитела к тейхоевым кислотам определяются в сыворотках крови взрослых и детей с тяжелыми стафилококковыми инфекциями: эндокардитом, остеомиелитом, сепсисом.

Лабораторная диагностика. Материал (гной) подвергают бактериоскопии и высевают на питательные среды. Кровь, мокроту, фекалии исследуют бактериологическим методом. После выделения чистой культуры по ряду признаков определяют видовую принадлежность. В случае выделения S.aureus определяют плазмокоагулазу, гемолизин, А-протеин.

Серодиагностика: РП (альфа-токсин), РНГА, ИФА.

Для установления источника и путей распространения инфекции, выделенные культуры фаготипируют. Лабораторный анализ непременно включает определение чувствительности выделенной культуры или культур к антибиотикам.

Профилактика и лечение. Профилактика направлена на выявление носителей S.aureus, главным образом среди персонала медицинских учреждений, с целью их санации. Особое внимание уделяется профилактике стафилококковых инфекций у новорожденных.

Для лечения острых стафилококковых заболеваний назначаются антибиотики, выбор которых определяется чувствительностью выделенной культуры к набору препаратов. При септических процессах вводят противостафилококковый иммуноглобулин или антистафилококковую плазму. Для лечения хронических стафилококковых инфекций (хрониосепсис, фурункулез и др.) применяют стафилококковый анатоксин, аутовакцину, которые стимулируют синтез антитоксических и антимикробных антител.

2. Стрептококки. Лабораторная диагностика стрептококковой инфекции.

Род Streptococcus, семейство Streptococcaceae включает 21 вид. Чаще всего вызывают заболевания: S.pyogenes, agalacticae, faecalis, зеленящие (pneumoniae).

Пиогенные стрептококки

Морфология. Гр+, шаровидной или овальной формы. В мазках располагаются парами или короткими, 6–8 клеточными, цепочками. Имеют капсулу, но входящая в ее состав гиалуроновая кислота не антигенна. Неподвижны, спор не образуют.

Стрептококки КУЛЬТИВИРУЮТСЯ на питательных средах с добавлением глюкозы, сыворотки или крови. На поверхности плотных сред образуют мелкие (до 1 мм) бесцветные колонии, в жидких средах – придонный, пристеночный рост, при этом среда прозрачная. По характеру роста на кровяном агаре различают: бета-гемолитические – вокруг колоний образуется прозрачная зона гемолиза; альфа-гемолитические – неширокая, зеленоватая зона; негемолитические – среда не изменяется.

Продуцируют ряд ферментов, дифференциально-диагностическое значение имеет лактаза и сахараза.

АГ. По АГ составу полисахоридной клеточной стенки (субстанция С) стрептококки разделяют на 20 серогрупп (обозначают заглавными буквами латинского алфавита А–V). Внутри серогрупп стрептококки разделяют на серовары (обозначают цифрами). Большинство возбудителей стептококковых инфекций относится к серогруппе А.

АГ свойствами обладают Ig-новые Fc-рецепторы клеточной стенки, липотейхоевые кислоты, а также токсины и ферменты, секретируемые в окружающую среду при размножении микроорганизмами. Патогенность для человека определяется образованием токсинов, внеклеточных ферментов и свойствами самих бактериальных клеток. Перечень заболеваний, вызываемых стрептококками, довольно большой: ангины, хронический тонзиллит, скарлатина, гнойные поражения кожи, флегмоны, сепсис, нефрит, ревматизм, отит и др. Попытки найти дифференциальные признаки стрептококков, вызывающих столь разнообразные по клиническим проявлениям болезни, оказались безуспешными. Только в отношении скарлатинозного стрептококка установлено, что они могут выделять эритрогенный токсин, другие признаки одинаковы с другими стрептококками СЕРОЛОГИЧЕСКОЙ ГРУППЫ А. Нефритогенными считаются стрептококки серовара 12, продуцирующие цитотоксин.

Стрептококки серогруппы В (S. agalactia) могут вызывать послеродовые инфекции и сепсис новорожденных, эрозивный стоматит, урогенитальные инфекции у женщин, сепсис, менингит.

С – возбудители респираторных инфекций, заболеваний МПС.

Ни К– выделены при эндокардитах.

D(энтерококки) – обитают в кишечнике здорового человека, вызывают поражения желчевыводящих путей, могут вызвать эндокардит, попадая в раны гнойно-воспалительную инфекцию. При генерализации – сепсис.

Некоторые (S.mutans, S.salivarius и др.), не содержащие группового Аг, обитают в полости рта. S.mutans участвует в развитии кариеса зубов и пародонтоза.

Стрептококки других серогрупп редко обнаруживаются у человека.

Факторы патогенности. Адгезины – это липидный компонент комплекса липотейхоевой кислоты с белками клеточной стенки, обеспечивают взаимодействие с мембраной эпителия и колонизацию. Защиту от фагоцитоза обеспечивают:

1) антихемотаксический фактор;

2) Ig-новый Fc-рецептор (к IgG) – подавляет фагоцитоз, разрушает комплемент, вызывает дисбаланс иммуноглобулинов;

3) капсула (у серогрупп А и В) – защищает от фагоцитов;

4) М-белок, позволяет расти и размножаться в крови человека, лишенные М-белка клетки фагоцитируются без участия антител. М-белок обеспечивает т/же способность проникать в клетки микроорганизмов и размножаться в них.

ФЕРМЕНТЫ: гиалуронидаза (фактор распространения) и стрептокиназа (фибринолизин) – разрушает фибрин, ограничивающий местный очаг воспаления, способствуя генерализации процесса.

Стрептококки СЕРОГРУППЫ Аобразуют ряд ТОКСИНОВ:

О-стрептолизин (термолабильный белок) – выделяется при размножении, вызывает лизис эритроцитов, разрушает мембраны других клеток, а также мембраны лизосом, обладает кардиотоксическим действием. Этот токсин является АГ и стимулирует синтез анти-О-стрептолизин.

S-стрептолизин (нуклеопротеид), антигенными свойствами не обладает, вызывает лизис эритроцитов, разрушает лизосомы, мембраны митохондрий клеток человека.

Лейкоцидин лизирует полиморфноядерные лейкоциты, выключает фагоцитоз.

Цитотоксины (пептиды) – повреждают клетки. Один из этих токсинов способен повреждать почечную ткань, он выделяется нефритогенными штаммами стрептококков серовара 12.

Эритрогенный токсин (скарлатинозный). Информация об образовании данного токсина поступает в клетку с геномом умеренного фага. Термостабильная фракция эритрогенного токсина стимулирует реакцию ГЗТ.

Экология и распространение. Выделяют возбудителей заболеваний только человека, человека и животных и условно-патогенные для человека. Обитают в полости рта, на слизистых оболочках верхних дыхательных путей, на коже, в кишечнике. Источник – больные и бактерионосители. Путь распространения – воздушно-капельный. Значительная часть заболеваний – эндогенные инфекции, возникают у лиц с иммунодефицитными состояниями.

В окружающей среде (на предметах обихода, в пыли) могут сохраняться в течение нескольких дней, хорошо выдерживают высушивание (сохраняют жизнеспособность, но теряют вирулентность). Чувствительны к нагреванию и дезинфектантам.

Иммунитет. На развитие стрептококковых инфекций влияет состояние микроорганизмов. Часто заболевание развертывается на фоне предварительно возникшей сенсибилизации (повторные ангины, рожистые воспаления, хронические инфекции – тонзиллит, нефрит, ревматизм). Возможно участие аутоиммунных процессов (ревматизм). Имеют АГ, перекрестно реагирующий с сарколеммой мышечных волоконсердца.

Антитела вырабатываются на все БАВ стрептококка (токсины, ферменты). Иммунитет после перенесенных инфекций (кроме скарлатины) малонапряженный и носит типовой антимикробный характер (к М-антигену). Антитела к ферментам, токсинам стрептококков протективными свойствами практически не обладают. Уровень напряженности сенсибилизации проверяют в аллергических пробах.

Лабораторная диагностика. Материалом для БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОГО исследования служат слизь из зева, гной, отделяемое ран, кровь и др. Выделенные чистые культуры идентифицируют, определяют основные их свойства: морфологию, гемолитическую активность, чувствительность к антимикробным препаратам.

СЕРОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА – выявление антител к токсинам и ферментам. При ревматизме – нарастание титров анти-О-стрептолизинов, анти-ДНКазы, антигиалуронидазы в парных сыворотках.

Профилактика и лечение. Специфическая профилактика не разработана. Для предупреждения хронических стрептококковых инфекций, связанных с персистенцией возбудителя и образованием L-форм, используют антибиотикотерапию. За детьми, перенесшими повторные ангины, скарлатину, устанавливается диспансерное наблюдение (профилактика ревматизма). Стрептококки серогруппы А высокочувствительны к пенициллину (бактерицидное действие), устойчивость к пенициллину не приобретается. Сульфаниламиды оказывают бактериостатическое действие на стрептококки. К ним микроорганизмы легко приобретают резистентность.

Особое место занимает СКАРЛАТИНА– острое инфекционное заболевание, возбудитель – гемолитический стрептококк группы А любого серовара, способный продуцировать эритрогенный токсин.

Патогенез. Скарлатина – острозаразное заболевание, протекает циклически со сменой симптомов. На 1 этапе проявляется действие эритрогенного токсина (интоксикация, ангина, мелкоточечная сыпь на гиперемированном фоне).

2 период сопровождается осложнениями в рез действия самих стрептококков (гнойные лимфаденит, мастоидит, отит), т.к. антимикробный иммунитет не выражен, и заражение стрептококками других сероваров, к которым нет соответствующих антител.

Иммунитет. В отличие от других стрептококковых инфекций остается прочный антитоксический иммунитет, т.к. эритрогенный токсин стрептококков всех сероваров АГ-но идентичен. Антимикробный иммунитет типоспецифичен и не защищает от возникновения других стрептококковых заболеваний.

Напряженность антитоксического иммунитета к эритрогенному токсину проверяется внутрикожными пробами. При отсутствии иммунитета самая малая доза токсина дает покраснение и припухлость кожи. Если же в крови есть антитоксины, реакции на введение токсина не возникает.

Стрептококки пневмонии (ПНЕВМОКОККИ).S.pneumoniae – вызывают воспаление легких – пневмонию, что объясняется специфичностью адгезинов, взаимодействующих с рецепторами клеток лёгких.

Морфология, физиология. Им вытянутую форму, напоминающую пламя свечи. Располагаются попарно, каждая пара окружена капсулой. Под капсулой расположен М-белок, по свойствам схожий с S.pyogenes, но имеющий свою АГ специфичность.

На плотных питательный средах, в которые добавлена сыворотка или кровь, пневмококки растут, образуя мелкие колонии, окруженные зоной позеленения (на кровяном агаре). В жидких средах дают равномерную муть.

БХ активность выражена умеренно – расщепляют ряд углеводов и образуют гиалуронидазу, муромидазу, пептиназу.

Имеют 3 основных АГ: полисахаридный АГ клеточной стенки, капсульный антиген и М-белок. По капсульному АГ разделяются на 84 серовара.

Экология и распространение. Обитают в верхних дыхательных путях человека, попадают в нижние дыхательные пути и при застойных явлениях в легких, снижении активности SIgA и макрофагов, разрушении сурфактанта возникает эндогенная пневмония. Заражение воздушно-капельным путем.

Вне организма пневмококки быстро погибают. Они не выдерживают нагревания, дезинфекции. В высушенной мокроте могут сохраняться длительное время. Чувствительны к пенициллину, макролидам.

Патогенность. Образуют гемолизины и лейкоцидин, повреждающие клетки тканей. М-белок и капсула обеспечивают способность к адгезии и устойчивость к фагоцитозу. Выделяющиеся ферменты играют большую роль в развитии патологического процесса: пептидаза расщепляет SIgA, гиалуронидаза способствует распространению микроорганизмов в тканях. При воздействии токсинов и ферментов макрофаги под сурфактантом могут покинуть «линию обороны». Возможна генерализация процесса, которая чаще бывает у детей раннего возраста и пожилых людей. В этих случаях возникают менингит, сепсис.

Иммунитет. Типоспецифический и нестойкий, это объясняет повторное возникновение и возможность перехода в хроническую форму.

Лабораторная диагностика. Для выделения клеток возбудителя необходимо: оптимальная для размножения питательная среда, условия культивирования, правильное взятие исследуемого материала. Выделенные клетки идентифицируют по ряду признаков и дифференцируют от зеленящего (альфа-гемолитического) стрептококка, энтерококков. Пневмококки, имеющие капсулу, подвергают серологическому типированию и определяют чувствительность микроорганизмов к антимикробным препаратам.

Профилактика и лечение. Специфическая профилактика не разработана. В каждом частном случае имеют значение неспецифические мероприятия, направленные на предупреждение возможности возникновения эндогенной инфекции: у больных, вынужденных длительное время лежать, находящихся на гормональной, лучевой терапии, и при снижении общей резистентности организма проводится стимуляция естественных защитных механизмов (режим питания, витаминизация, усиление вентиляции легких массажем и прочими воздействиями). Для лечения пневмонии используют пенициллин, макролидные антибиотики.

ЭНТЕРОКОККИ.S.faecalis (фекальные стрептококки, энтерококки) являются обитателями кишечника человека и теплокровных животных. Входят в группу D.

Морфологически– это шаровидные или овальные бактерии, при делении соединяются в пары или короткие цепочки. Полиморфны, некоторые штаммы подвижны, имеют 1–4 жгутика.

Ферментация отдельных углеводов – непостоянный признак.

Экология и распространение. Энтерококки более устойчивы к действию факторов окружающей среды, чем другие стрептококки. Они выдерживают нагревание до 60°С в течение 30 мин, способны размножаться в средах с 6,5 % NaCI, 40% желчи, при рН 9,5–10,0. Теллурит калия, азид натрия, желчные соли, кристаллический фиолетовый, налидиксовая кислота, а также пенициллин, неомицин не угнетают роста энтерококков, что используется для создания элективных питательных сред.

Патогенез. Способны размножаться в пищевых продуктах, при употребление зараженной пищи развивается пищевая токсикоинфекция. Чаще ее вызывают протеолитические варианты.

Гнойно-воспалительные процессы протекают обычно вяло, хронически. Чаще возникает не моноинфекция, а смешанная, в ассоциации с кишечной палочкой, протеем, стафилококками. Из гноя, отделяемого ран, верхних дыхательных путей, где локализуются патологические процессы, выделяются гемолитические варианты S.faecalis.

Большинство штаммов энтерококков, выделяемых от больных, оказываются устойчивыми к пенициллину, неомицину, обладают ферментами патогенности – коагулазой, гиалуронидазой, ДНК-азой, фибринолизином, протеиназой, муромидазой. При пересевах в лаборатории эти ферменты обычно перестают выделяться

3. Сальмонеллы. Лабораторная диагностика сальмонеллёзов.

Род Salmonella включает возбудителей брюшного тифа и паратифов, сальмонеллеза (S.typhimurium, S.infantis, S.anatum, S.enteritidis).

Морфология. Мелкие палочки, большинство подвижны (перитрихи). Ни спор, ни капсул сальмонеллы не образуют. Большинство сальмонелл хорошо растут на простых питательных средах. На поверхности плот сред образуют небольшие (2–4 мм), прозрачные колонии. Вокруг колоний S.schottmulleri образуется слизистый вал. Это – дифференциально-диагностический признак данного микроорганизма.

Антигены. Обладают О-, Н-, обнаруживаются К-Аг (Vi-Аг у тифозной палочки = 52, 6, 75), локализованные в микрокапсуле.

О-АГ (ЛПС) термостабилен, выдерживает кипячение в течение 2,5 часа, инактивируется формалином. В соответствии с содержанием О-АГ все сальмонеллы разделены на 65 серогрупп, обозначенных буквами лат алфавита (А, В, С3– С14, D и т.д.). В каждую серогруппувключены сальмонеллы с идентичным одним или несколькими О-АГ (серогруппа В содержит сальмонеллы с О-АГ 1,4,12; из них специфичным для серогруппы является 4). Дифференциация сальмонелл внутрисерогрупп проводится по АГ специфичности Н-АГ, которые могут существовать в двух фазах, 1 обозначают строчными буквами лат алфавита (а, b, с, d и т. д.), 2 – обычно арабскими цифрами, редко латинскими буквами. Фазовые вариации Н-АГ сальмонелл происходят с высокой частотой. Каждый серовар сальмонелл имеет наименование – часто по названию места открытия (S.dublin, S.moscow) или по автору (S.schottmulleri), основному симптому вызываемой болезни (S. typhy). Наименованию соответствует АГ формула (S.paratyphi А – 1,2,12,а).

Патогенность связана со способностью проникать и размножаться в макрофагах. После гибели макрофагов микроорганизмы попадают в лимфу, кровь – патологический процесс генерализуется. Но серовары обладают неодинаковыми факторами патогенности Þ клиническая картина сальмонеллёзов разная.

Сальмонеллы – возбудители БРЮШНОГО ТИФА и ПАРАТИФОВ.

Тифозная палочка не ферментирует лактозу(–), сахарозу(–), рамнозу(–), но расщепляет глюкозу(+), мальтозу(+), маннит(+), с образованием кислоты, паратифозные бактерии ферментируют те же углеводы, но с образованием кислоты и газов. На среде Ресселя S.paratyphi А – выделяется кислота и газ, S.typhi – кислота, E.coli – кислота или кислота и газ.

Возбудители тифа и паратифа различаются по АГ структуре. S.paratyphi А составляет серогруппу A, S.paratyphi В (schottmulleri)включена в группу В, а S.typhi– в группу D. Тифозная палочка обладает Vi-АГ, который содержится в вирулентных штаммах и является специфическим рецептором для Vi-фагов. Их используют для фаготипирования в эпидемиологических целях.

Экология и распространение. Возбудители широко распространены. Обитают в организме человека, их можно обнаруживать в местах, куда попадают выделения больных и бактерионосителей. Обладают относительно высокой устойчивостью к действию физических и химических факторов окружающей среды. В сточных водах, в почве, куда они попадают с испражнениями людей, могут длительно сохраняться. Чувствительны к нагреванию и дезинфектантам.

S. typhi и S. paratyphi А вызывают заболевания только у человека, S. paratyphi В (schottmulleri) – преимущественно у человека, но может вызывать заболевания крупного рогатого скота. Источником являются больные и бактерионосители, передача происходит контактным и алиментарным путями.

Патогенез брюшного тифа. Сальмонеллы тифа и паратифов попадают в организм через рот, многие погибают в желудке, а оставшиеся переходят в тонкую кишку. Адгезины обеспечивают прикрепление к микроворсинам кишечного эпителия, инвазивные свойства – проникновение в лимфатические фолликулы. Затем по лимфатическим сосудам возбудители проникают в брыжеечные лимфоузлы, где размножаются. В конце инкубационного периода (в среднем 2 недели) сальмонеллы из лимфоузлов попадают в грудной проток, затем в кровеносную систему – наступает бактериемия, появляются клинические симптомы болезни. Бактериемия сохраняется на протяжении всего лихорадочного периода, но количественно она наиболее выражена в течение 1-й недели болезни.

Гематогенным путем возбудители попадают в различные органы (печень, селезенку, костный мозг и др.), где возникают брюшнотифозные гранулемы. Из органов микроорганизмы повторно поступают в ток крови, поддерживая бактериемию. Наиболее благоприятные условия для существования и размножения – в желчных протоках печени, в желчном пузыре. С желчью они выделяются в просвет 12-ти перстной кишки, попадают в тонкую кишку, где повторно внедряются в уже сенсибилизированные лимфатические фолликулы. Развивается воспалительная аллергическая реакция, в стенке кишки образуются язвы. На 3-й неделиболезни возбудители в большом количестве выделяются с испражнениями. Элиминация возбудителей осуществляется и с мочой. В этот период болезни фекалии и мочу исследуют в диагностических целях.

В патогенезе брюшного тифа большую роль играет интоксикация. Эндотоксин действует на сердечно-сосудистую и нервную системы.

Иммунитет. В сыворотке больных появляются Ig, которые активируют фагоцитоз, способствуют лизису бактерий. Титр антител нарастает от второй к последующим неделям. Определение их используют в серодиагностике.

У переболевших формируется пожизненный иммунитет. Но у части больных возникают рецидивы и бактерионосительство (связано с недостаточным гуморальным иммунитетом). Если иммунная система несовершенна, то постинфекционное бактерионосительство может продолжаться в течение многих лет (причины ещё не изучены).

Лабораторная диагностика. В первые дни болезни и весь лихорадочный период высевают кровь для выделения гемокультуры. В начале второй недели в целях обнаружения агглютининов ставят серологическую реакцию Видаля. В конце второй недели и позже из испражнений и мочи пытаются выделить копро–и уринокультуру сальмонелл.

Выделение гемокультуры. Получив из локтевой вены больного 5– 10 мл крови, засевают ее в соотношении 1:10 в 10% желчный бульон. Посевы помещают в термостат на 18–24 ч. Выросшую культуру микроскопируют и пересевают на среду Эндо, которую снова на сутки помещают в термостат. Выросшие на ней бесцветные колонии микроскопируют и агглютинируют в адсорбированных специфических анти–О–сыворотках на предметных стеклах. Агтлютинируемые колонии пересевают на скошенный агар и, получив на нем спустя 18–24 ч чистую культуру, пересевают ее на ряд Гисса и, главное, ставят развернутую реакцию агглютинации в пробирках, которая позволит окончательно установить видовую принадлежность. Клинический диагноз тифопаратифов в практике чаще всего подтверждают с помощью реакции Видаля.

Реакция Видаля. Для постановки реакции Видаля берут 2–3 мл крови из локтевой вены или 1 мл из пальца, мочки уха и получают из нее сыворотку, которую последовательно разводят в трех параллельных рядах пробирок от 1:100 до 1:1600 и вносят О–диагностикумы (убитые тифопаратифозные бактерии): в пробирки первого ряда – брюшнотифозный, второго – паратифозный А и третьего – паратифозный В. О–антитела к ним в диагностическом титре 1:200 появляются на второй неделе от момента заболевания. Для исключения О–антител, которые могут оставаться у вакцинированных, реакцию Видаля рекомендуют ставить в динамике. У больных через 3–4 дня титр реакции нарастает, у привитых – остается прежним.

Если сыворотка крови больного агглютинирует одновременно два или три вида диагностикумов, следует учитывать титр агглютинации. При этом специфическая агглютинация происходит в больших, а групповая – в меньших разведениях сыворотки.

Исследование испражнений и мочи обычно начинают со второй–третьей недели заболевания, так как к этому времени брюшнотифозные и паратифозные сальмонеллы поступают с желчью в кишечник, а далее в почки. Берут их в стерильные пробирки или баночки. Высевают на среды Плоскирева. Выделение и идентификацию копро– и уринокультуры, как и гемокультуры, проводят поэтапно. Иногда из дуоденального содержимого выделяют биликультуру.

Выздоровевших выписывают из больницы после двукратных отрицательных бактериологических исследований их испражнений.

Профилактика и лечение. Специфическая профилактика состоит в вакцинации, но не проводится, т.к. вакцины малоэффективны. Контактным лицам назначают внутрь брюшнотифозный бактериофаг. Для лечения больных из этиотропных препаратов чаще всего применяют левомицетин.

 

Возбудители ГАСТРОЭНТЕРОКОЛИТОВ (САЛЬМОНЕЛЛЕЗОВ)

Сальмонеллезы клинически проявляются как гастроэнтероколиты, вызывают их многие сальмонеллы различных серогрупп. Они различаются по некоторым БХ признакам, но дифференцируют их в основном по АГ структуре. Наиболее часто вызывают – S. typhimurium, S. infantis, S.enteritidis.

Источник – различные животные (крупный рогатый скот, свиньи, лошади, собаки, кошки, грызуны, домашние птицы), человек заболевает при употреблении мяса, яиц, молочные, кондитерские продукты, изготовленные с использованием яиц, не подвергнутых термической обработке.

Экология и распространение. Устойчивы к воздействию факторов окружающей среды, погибают при кипячении. Но при низких температурах (холодильник) длительно остаются жизнеспособными.

Патогенез. Возбудители сальмонеллеза попадают с пищей. Из просвета кишечника они внедряются в энтероциты, в составе фагосомоподобных вакуолей достигают собственной пластинки слизистой, где фагоцитируются макрофагами и лейкоцитами. Стенка кишки при этом не повреждается. В энтероцитах происходит всасывание продуктов жизнедеятельности, эндотоксина и воздействие микробных ферментов (протеаз, муциназ, декарбоксилаз и др.). В макрофагах сальмонеллы размножаются, а при гибели фагоцитов освобождаются медиаторы воспаления (гистамин, серотонин и др.). По лимфатическим путям бактерии проходят в лимфоузлы, в некоторых случаях – генерализация Þ попадание и размножение во внутренних органах.

Токсины (эндотоксин, энтеротоксин, цитотоксин) оказывают прямое повреждающее действие на # слизистой Þ нарушают проницаемость клеточных мембран, развивается интоксикация, диарея, наступает обезвоживание организма. В патогенезе возбудитель и токсины играют роль пускового механизма, а уже нарушения функции ЖКТ, ССС, НС обуславливают клинику. Через 3-5 дней – выздоровление, иногда при генерализации – болезнь затягивается.

Иммунитетненапряженный, т.е. возможно носительство и повторные заболевания. В сыворотке крови – агглютинины, преципитины, бактериолизины, опсонины. Местный иммунитет: возрастают SIgA. Заболевания, вызванные одним сероваром, не создают иммунитета к другим Þ возможны вторичные инфекции.

Лабораторная диагностика. У больного исследуют рвотные массы, промывные воды желудка, испражнения, а также кровь, при выявлении микробоносителей - испражнения, получаемые после приема слабительного. Для определения факторов и путей передачи сальмонеллезов исследуются остатки пищи, соскобы со столов, разделочных досок, смывы с рук обслуживающего персонала.

Фекальные и рвотные массы берут в количестве 50–100 мл, промывные воды – 100–200 мл, мясо и мясные продукты – по несколько кусков массой 500 г, полужидкие и жидкие продукты (сметана, молоко) – 100–200 мл. Материалы густой и плотной консистенции, вырезанные из глубины кусочки мяса, колбасы, сыры перед посевом на питательные среды растирают в фарфоровых ступках и взвешивают в изотоническом растворе натрия хлорида.

Основным методом лабораторной диагностики являются выделение чистой культуры сальмонелл и ее идентификация.

Бактериологическое исследование. Культуру сальмонелл из различных материалов выделяют, засевая их в чашки Петри со средой Плоскирева. Кровь для получения гемокультуры высевают в желчный бульон. Посевы помещают в термостат. Через 10–12 ч бульонную культуру пересевают на среду Плоскирева. Выросшие на ней бесцветные колонии пересевают на скошенный агар. На третьи сутки полученную культуру пересевают на ряд Гисса и ставят реакцию агглютинации в адсорбированных сыворотках для установления вида. На четвертые сутки определяют биохимические свойства сальмонелл на средах Гисса.

И наконец, для дифференциации сальмонелл, вызывающих сальмонеллезы, от возбудителя паратифа В, который обладает почти одинаковым спектром ферментов, прибегают к биологическому эксперименту, заражая per os белых мышей взвесью культуры. Возбудители сальмонеллезов вызывают у них сепсис, от которого животные погибают через 1–2 суток. Сальмонелла паратифа В для мышей не патогенна.

Профилактика и лечение. Специфическая профилактика не разработана. Антибиотики (левомицетин, ампициллин и др.) - для лечения только генерализованных форм.

4. Шигеллы. Лабораторная диагностика шигеллёзов.

Род Shigella включает 4 вида, различающиеся по биохимическим свойствам и составу АГ. Виды, кроме S.sonnei, разделены на серовары, a S.flexneri – на подсеровары. Чаще всего вызывают шигеллы Флекснера и Зонне.

Морфология. Палочки с закругленными концами, Гр-, не имеют жгутиков, не образуют капсул, большинство снабжены фимбриями (адгезия к эпителию слизистой толстой кишки), имеются половые пили.

Хорошо растут на простых питательных средах

БХ активность выражена слабо: способны ферментировать глюкозу и некоторые другие углеводы с образованием кислоты без газов; не ферментируют лактозу(–), инозит, не гидролизуют мочевину(–), не разжижают желатин(–), не образуют сероводород(–).

АГ. О-АГ. Некоторые серовары видов S.dysenteriae, S.flexneri и S.boydii обладают К-АГ (ПС в структуре ЛПС). Имеются общие АГ со многими сероварами энтероинвазивных эшерихий, вызывающих дизентериеподобные заболевания.

Экология и распространение. Малоустойчивы к воздействию физических, химических и биологических факторов окружающей среды (кипячение, УФ, прямой солнечный свет, 1% раствор фенола). Наиболее чувствительны S.dysenteriae, более резистентны S.sonnei.

В желудочном соке шигеллы выживают несколько минут. В течение 2–3 дней дизентерийные палочки остаются жизнеспособными в кишечнике и на поверхности тела мух (распространение).

Источником является больной человек (или носитель), от которого микроорганизмы попадают на различные объекты, заражают пищевые продукты, посуду, воду. Пути передачи – контактно-бытовой, алиментарный. Заболеваемость увеличивается летом и осенью (употребление зараженных ягод, фруктов, овощей, термически не обрабатываемых).

Патогенез. Дизентерия – острая или хроническая рецидивирующая кишечная инфекция, клинически характеризующаяся симптомами воспаления толстого кишечника и явлениями общей интоксикации. В остром периоде и при обострении у больных отмечаются поносы с болезненными спазмами прямой кишки. В тяжелых случаях в стуле содержатся слизисто–гнойные массы с примесью крови

Дизентерия – антропонозное заболевание. Источником инфекции являются больные различными формами дизентерии и реконвалесценты, бактерионосительство у которых может продолжаться несколько дней и более. Механизм передачи фекально–оральный (водно–пищевой, контактно–бытовой). Особенно часто дизентерия встречается в летне–осенний сезон года, что связано с частыми приемами воды, употреблением овощей и фруктов, активацией мушиного фактора.

В желудке и тонкой кишке значительная часть шигелл погибает и высвобождается эндотоксин Þ чем их больше, тем более выражена интоксикация. Токсины воздействуют на слизистую оболочку ЖКТ, на нервные окончания, сосуды и рецепторы слизистой, всасываясь, вызывают озноб, лихорадку и поражение нервной системы и внутренних органов. Оставшиеся живыми шигеллы с помощью адгезинов прикрепляются к гликокаликсу микроворсинок кишечника, колонизируют слизистую оболочку и проникают в энтероциты, где размножаются. Главная роль в патогенезе дизентерии принадлежит токсинам. Цитотоксины разрушают эпителиальный покров кишечника, развивается катарально-язвенное воспаление. Токсины нарушают обмен веществ, вызывают полигиповитаминоз. В кишечнике – дисбактериоз. Токсигенные S.dysenteriae вызывают заболевания с выраженной интоксикацией и возможным смертельным исходом (особенно у детей раннего возраста).

Иммунитет. Местный – возрастает синтез SIgA, которые покрывают слизистую оболочку и препятствуют адгезии и проникновению в эпителиальные клетки.

Антитела к АГ возбудителя возникают в 1-ю неделю заболевания, достигая максимального титра на 2-й неделе. Но напряженный иммунитет они не формируют. Наряду с этим развивается вторичный иммунодефицит – уменьшается общее количество циркулирующих Т- и В-лимфоцитов, относительно большое число Т-супрессоров и малое количество Т-хелперов, возрастает пропорция лимфоцитов, сенсибилизированных к АГ шигелл и компонентам собственных тканей организма (возможно развитие аутоиммунного состояния).

Лабораторная диагностика.Основной метод подтверждения клинически поставленного диагноза – получение чистой культуры шигелл и ее идентификация до вида и серовара в реакции агглютинации. Возможна экспресс–диагностика дизентерии с помощью реакции иммунофлюоресценции. При этом надо помнить, что бактериальную дизентерию чаще всего вызывают шигеллы Флекснера и Зонне.

Бактериологическое исследование. Испражнения больного немедленно высевают в чашку Петри со средой Плоскирева и помещают в термостат при температуре 37°С на 18–24 ч. На второй день отбирают бесцветные лактозоотрицательные колонии. Делают мазки и раздавленные капли Грамотрицательные неподвижные бактерии пересевают на скошенный агар. На третьи сутки чистую культуру микроскопируют и вновь изучают подвижность. Если в мазке наблюдают Грамотрицательные, а в каплях неподвижные палочки, то их пересевают на ряд Гисса для изучения биохимической активности. Параллельно ставят реакцию агглютинации в пробирках и на предметных стеклах с набором видовых и адсорбированных сывороток. На четвертые сутки учитывают изменения в средах Гисса.

У дизентерийных больных иногда выделяются штаммы, не агглютинирующиеся специфическими сыворотками. В таких случаях ставят реакцию агглютинации с кипяченой в течение 1 ч взвесью культуры в надежде обнаружить агглютинабельность термостабильного антигена шигелл. Прибегают также к фаготипированию, для чего на засеянный шигеллами газон наносят каплю поливалентного дизентерийного фага.

Иногда для идентификации шигелл выделенную культуру наносят на скарифицированную роговицу морских свинок. В отличие от других патогенных энтеробактерий шигеллы вызывают у них выраженный кератоконъюнктивит.

В связи с широким распространением лекарственно устойчивых штаммов шигелл обязательно определяется антибиотикорезистентность выделенной культуры.

Серодиагностика. Серологический метод диагностики дизентерии с помощью развернутой реакции агглютинации используется для выявления стертых форм болезни и при эпидемиологическом обследовании очага инфекции. Лучшие результаты дает реакция непрямой гемагглютинации с эритроцитарными диагностикумами Зонне и Флекснера.

В диагностике дизентерии и для выявления скрытых источников инфекции некоторое значение может иметь внутрикожная аллергическая проба с дизентерином.

Профилактика и лечение. Специфическая профилактика не разработана, т.к. все варианты убитых вакцин малоэффективны. Разрабатываются живые вакцины для применения перорально, так как считается наиболее важным создание местного иммунитета. В сезон подъема заболеваемости и в очагах заболеваний с целью профилактики можно использовать дизентерийный бактериофаг. В лечении дизентерии используют нитрофурановые препараты, антибиотики малоэффективны. А также поливалентный бактериофаг, который выпускается в сухом и жидком виде и в форме суппозиториев.

5. Кампилобактер и хеликобактер. Лабораторная диагностика кампилобактериозов и хеликобактериозов.

Род Campylobacter (изогнутая бактерия) включает 5 видов, из которых патогенными для человека являются С.jejuni, С.fetus и С.coli.

Морфология, физиология. Гр– тонкие спиралевидные (1-2 завитка) палочки. Имеют единичные жгутики, расположенные на одном или обоих концах клетки, с помощью которых совершают винтообразные движения. Спор, капсул не образуют.

Кампилобактеры – микроаэрофилы (содержание кислорода 3–6%), обладают окислительным типом метаболизма. Углеводы не ферментируют. Энергию получают при расщеплении аминокислот. Желатину и мочевину не гидролизуют, обладают оксидазной и каталазной активностью.

Для выделения этих микроорганизмов из фекалий используют плотные питательные среды, к которым добавляют антибиотики для подавления сопутствующей микрофлоры.

Патогенез. Обладают адгезивной способностью - прикрепляются к эпителиоцитам кишечника, а С.pylori – к клеткам желудка (их выделяют при язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки, считая причастными к развитию этого заболевания). С. jejuni после адгезии колонизируют слизистую оболочку тонкой кишки, размножаются и образуют энтеротоксины – термостабильный и термолабильный (сходен с энтеротоксинами холерного вибриона и кишечной палочки, обусловливает диарею). При разрушении кампилобактеров высвобождается эндотоксин.

В патогенезе энтеритов, вызванных кампилобактерами, могут преобладать диарея или дизентериеподобные состояния, связанные с продукцией цитотоксина и, возможно, с инвазией возбудителя в эпителиальные клетки кишечника.

С.fetus у людей пожилого возраста с иммунодефицитными состояниями вызывает некишечные формы кампилобактериоза: сепсис, менингит, поражения печени, легких, мочевыводящих путей, суставов.

Экология и распространение. Обнаруживаются в репродуктивных органах, ЖКТ, в ротовой полости человека и ряда животных.

Энтериты, вызываемые кампилобактериями, возникают у людей всех возрастов, но чаще – у детей. Заболеваемость характеризуется сезонностью (наиболее высокая летом). Источник заражения - больные животные и люди, откуда бактерии попадают в пищевые продукты (чаще накапливаются в мясе, молоке) и воду. К человеку возбудитель попадает через рот, основной путь передачи – алиментарный, возможен и контактно-бытовой, от больных и носителей.

В окружающей среде сохраняются не долго. Устойчивы к действию кислоты желудочного сока и желчи, что обеспечивает кампилобактерам преодоление желудочного барьера и сохранение в желчном пузыре. Чувствительны к обычным концентрациям дезинфектантов.

Патогенные и условно-патогенные кампилобактеры различаются по способности вызывать различные заболевания у людей и животных. Так, С.fetus выделяют из крови людей с лихорадкой, С.jejuni и С. coli вызывают энтериты.

Лабораторная диагностика основана на выделении возбудителя в испражнениях; следует помнить, что на характер колоний возбудителя влияет качество среды - на “свежих” средах колонии более склонны “расползаться”; при посеве фекалий от больных на селективные среды рост возбудителя отмечают на 3 и 4 квадрантах, но следует тщательно осматривать всю чашку, т.к. они могут вырасти на 1 квадранте в окружении колоний контаминирующей микрофлоры.

Для быстрой идентификации можно провести микроскопическое исследование фекалий - кампилобактеры видны как нежные грамотрицательные спиралевидные или S-образные бактерии (особенно часто типичные формы наблюдают при окраске кристаллическим фиолетовым). Также можно применять фазово-контрастную микроскопию суспензии испражнений в жидкой среде (например, в среде для культивирования бруцелл или Мюллера-Хинтона).

Для идентификации кампилобактериозов также могут быть использованысерологические методы, например РА (на 2 недели титр AT составляет 1:8-1:32) или РСК (видоспецифическая реакция, требующая соответствующего АГ). Разработаны экспериментальные партии диагностикумов для выявления AT в реакции РНГА, пригодные для диагностики кампилобактериозов животных и человека.

Лечение. В большинстве случаев заболевание самоограничивается и проводить химиотерапию нет необходимости. К моменту установления диагноза большинство больных находится в стадии выздоровления. Применять антибиотики следует лишь в тяжёлых случаях и при угрозе развития серьёзных осложнений. Бактерии группы Campylobacterjejuni чувствительны к аминогликозидам, эритромицину, тетрациклинам, левомицетину и фуразолидону; резистентны - к пенициллину, цефалотину, бисептолу.

 

Род Helicobacter

Первые сообщения о находках спиралевидных бактерий на слизистой оболочки желудка появились в начале XX в., но лишь появление большого цикла работ в 1983-1984, посвященных многочисленным фактам выявления микроорганизмов на слизистой оболочке желудка больных острыми гастродуоденитами, доказало их существенное значение в этиологии заболеваний. Первые штаммы так называемых “желудочных” кампилобактерий были выделены в Австралии (1982); при этом было установлено наличие микроорганизмов на слизистой оболочке желудка и у здоровых лиц, но их процент был незначителен. Дальнейшие исследования, проведённые во многих странах, подтвердили роль этих бактерий в патогенезе поражений желудка и двенадцатиперстной кишки, а сам возбудитель был идентифицирован как Campylobacter pylori Позднее, в исследованиях на добровольцах Маршалл (1986) воспроизвёл гастрит экспериментальным введением микроорганизмов и получил ретрокультуры, идентичные исходным штаммам. Совершенствование методов культивирования и идентификации кампилобактерий показало необоснованность предложенного систематического положения бактерий, и они были выделены в отдельный род - Helicobacter, включающий Н. pylori (типовой вид) и Н. muslelae. Патогенный для человека вид - Н. pylori.

Морфология. Представлены короткими, изогнутыми или извитыми (чаще S-образными) бактериями грамотрицательные; средние размеры - 2,5-4х0,5 мкм; подвижны (лофотрихи); жгутиков обычно 4-5 (может быть до 7), они часто покрыты чехликами и имеют колбовидные утолщения на концах. Содержание Г+Ц составляет 35-37%, среди жирных кислот в клеточной стенке преобладают гексадекановая, октадеценовая и гексадеценовая.

Культуральные свойства. Лучше всего растут в микроаэрофильных условиях; оптимальный состав газовой смеси: N₂ 85-87%, О₂ 5%, СО₂ 8-10%; в аэробных и анаэробных условиях не растут. Температурный оптимум 37°С, но многие штаммы растут в диапазоне 33-41°С. Наиболее оптимальные среды - КА и ША, но Н. pylori может также расти (несколько медленнее) и на средах без гемина, например содержащих 10% сыворотки. Некоторые штаммы проявляют гемолитическую активность (а-гемолиз), не способны гидролизовать гиппурат.

Через 48-72 ч на твёрдых средах образуют мелкие (около 1 мм) прозрачные блестящие колонии, содержащие характерные бактерии; по мере старения в колониях начинают преобладать кокковидные формы.

На жидких средах образуют поверхностную голубовато-серую пленку и незначительное (часто незаметное) помутнение среды.

Биохимические свойства. Оксидаза и каталаза-положительны; проявляют уреазную, трансферазную и фосфатазную активности; образуют H₂S; не редуцируют нитраты; не свёртывают молоко; инертны к глюкозе.

АГ.Антигенный состав изучен не полностью, но показано наличие нескольких сероваров; агглютинируются неадсорбированными сыворотками к Campylobacter coli. Показано наличие 0-Н-аг а также поверхностных белковых Аг (определяют типоспецифичность), выявляемых моноклональными АТ.

Патогенез. При исследованиях, проведённых у пациентов с острыми гастритами и обострениями хронической патологии, выявлено большое число бактерий, локализующихся в участках воспаления, обычно в антральной части. Проникая через слой слизи, хеликобактеры прикрепляются к эпителиальным клеткам (чаще в области межклеточных ходов), проникают в крипты и железы слизистой оболочки. Активность бактерий приводит к разрушению слизистого слоя и обусловливает контакт желудочного сока со стенкой органа. АГ микроорганизмов стимулируют миграцию нейтрофилов и способствуют развитию острого воспаления-. Локализация Н. pylori в области межклеточных ходов обусловлена хемотаксисом к местам выхода мочевины и гемина, образующихся из разрушающегося гемоглобина эритроцитов в микроциркуляторном русле. Под действием бактериальной уреазы мочевина превращается в аммиак, повреждающий слизистую оболочку желудка и двенадцатиперстной кишки.

Клинические проявления не отличаются от обычных симптомов гастродуоденитов и ни один из симптомов не патогномоничен для хеликобактериоза. Обычно пациенты обращаются к врачу по поводу упорных болей в области эпигастрия. Последние купируются при назначении антибактериальных препаратов, например метронидазола и фуразолидона. Приём традиционных препаратов обычно не оказывает выраженного эффекта, а после их отмены развиваются рецидивы заболевания.

Инкубационный период - 7 сут. Предположительно, заболевание может передаваться при контактах с больным (обычно у детей и подростков, ранее не контактировавших с возбудителем)- На последнее указывают многочисленные факты находок хеликобактеров у детей и подростков, страдающих гастритами; однако, они не имели существенного значения при так называемых “рефлюксных” гастритах при недостаточности привратника. В острой фазе нередко отмечают изменение значения рН желудочного сока, у 40-50% пациентов - тошноту и/или рвоту; через несколько месяцев развиваются признаки хронического гастрита, а в дальнейшем могут появиться симптомы язвенного гастродуоденита.

Лабораторная диагностика основана на выявлении Н. pylori в биоптатах слизистой оболочки желудка и двенадцатиперстной кишки по типичным морфологическим особенностям. Небольшие размеры бактерий требуют тщательного просмотра нескольких полей зрения).

Бактерии хорошо видны в гистологических препаратах, окрашенных гематоксилин-эозином или импрегнированных серебром. Хорошие результаты даёт окраска препаратов акридиновым оранжевым.

Для выявления возбудителя можно с успехом применять фазово-контрастную микроскопию, выявляющую характерную подвижность.

В последние годы широко распространены методы косвенного обнаружения Н. pylori в биоптатах, чаще всего используют определение уреазной активности.

Для получения чистых культур используют кровяные среды (5-17% эритроцитов), дополненные антибиотиками, подавляющими рост контаминирующей микрофлоры (наиболее пригоден цефсулодин).

В настоящее время разработаны тест-системы для иммуноферментного определения Аг хеликобактеров в биоптатах, а также в сыворотке в РСК.

Разработан метод выявления хеликобактеров при язвенном гастрите и дуодените. Комплекс включает бактериоскопию биоптатов в мазках, окрашенных по Граму и фуксином Пфайффера, пробу с мочевиной, пробу на аммиак с реактивом Круппа и посев биоптатов на питательные среды КА, КА с амфотерицином, эритрит-КА с амфотерицином. Посевы культивируют 5-7 сут. при температуре 37°С в микроаэрофильных, аэробных и анаэробных условиях. Принадлежность выделенных культур определяли: по характерной морфологии микроорганизмов и колоний “винтообразной” подвижности: способности к росту в микроаэрофильных условиях и отсутствию роста в аэробных и анаэробных условиях и при температуре 25°С и 42°С; по наличию оксидазной, каталазной и уреазной активности.

Лечение. Хорошие результаты даёт назначение метронидазола и фуразолидона. Возможно назначение амоксиклава, цефокситина и эритромицина; в ряде случаев последний можно заменять тетрациклином.

6. Эшерихии. Лабораторная диагностика эшерихиозов.

Род Eschenchia, вид Е. coli включает условно-патогенные кишечные палочки (обитатели кишечника человека, млекопитающих, птиц, рыб, рептилий) и патогенные для человека варианты, отличающиеся друг от друга антигенной структурой, патогенетическими и клиническими особенностями вызываемых ими заболеваний.

Морфология. Палочки, в препаратах располагаются беспорядочно, подвижные (перитрихи), но есть и варианты, лишенные жгутиков. Фимбрии (пили) имеют все эшерихии.

Размножаясь при температуре 37°С, на плотных средах образуют S- и R-колонии. В жидких средах дают помутнение, затем осадок. Многие штаммы имеют капсулу или микрокапсулу и на питательных средах образуют слизистые колонии.

Продуцируют ферменты, расщепляющие углеводы (до кислоты и газа), белки и другие соединения. БХ свойства определяют при дифференциации эшерихии от представителей других родов, семейства энтеробактерий.

Антигены. Основным является О-АНТИГЕН, положен в основу деления на серогруппы (около 170 О-серогрупп). Многие штаммы отдельных серогрупп имеют общие АГ с микроорганизмами других серогрупп эшерихий, а также с шигеллами, сальмонеллами и другими энтеробактериями.

К-антигены у эшерихий состоят из 3 антигенов – В- и L-Аг термолабильны, разрушаются при кипячении; А-Аг термостабилен, инактивируется при 120°С. У эшерихии известно около 97 сероваров по К-антигенам.

Н-антигены являются типоспецифическими, характеризуют серовар внутри О-групп. Описано более 50 различных Н-антигенов.

АГ структуру отдельного штамма эшерихии характеризуют формулой (буквенно-цифровые обозначения О-, К- и Н-АГ): Е. coli О26:К60(В6):Н2

Экология и распространение. Постоянно выделяются с испражнениями в окружающую среду. В воде, почве остаются жизнеспособными в течение нескольких месяцев, но быстро погибают от действия дезинфектантов и при нагревании.

Условно-пат