ПРАВИЛА РАБОТЫ С КУЛЬТУРАМИ МИКРООРГАНИЗМОВ

В лаборатории микроорганизмы выращивают на плотных и жидких питатель­ных средах, которые разливают в пробирки, колбы, матрасы и чашки Петри (рис. 2.2). Посуду и питательные среды предварительно стерилизуют.

Внесение микроорганизмов в стерильную среду называется посевом, или инокуляцией. Посев микроорганизмов требует соблюдения определенных пра­вил, которые необходимо выполнять, чтобы предохранить исследуемую куль­туру от загрязнения посторонними микроорганизмами. Перед посевом следует тщательно надписать на пробирке (колбе или чашке Петри) название микро­организма и дату посева.

Клетки микроорганизмов для посева или приготовления препаратов берут бактериологической петлей или иглой (рис. 2.3), если микроорганизмы выраще­ны на плотной среде. В том случае, когда микроорганизмы выращены в жидкой питательной среде, лучше пользоваться не петлей, а стерильной пипеткой. Бактериологические петли и иглы делают, используя тонкую проволоку из вольфрама или нихрома, которую закрепляют в металлическом или стеклян­ном держателе. Диаметр бактериологической петли — 4 — 5 мм.

Бактериологическую петлю (иглу) перед взятием клеток микроорганизмов стерилизуют. Для этого проволоку накаливают докрасна в пламени горелки и одновременно обжигают примыкающую к петле часть держателя, которую бу­дут вводить внутрь сосуда, содержащего микроорганизмы. Петлю рекомендует­ся держать в пламени горелки почти вертикально, чтобы проволока была рав­номерно раскалена на всем протяжении. При прокаливании необходимо пом­нить, что наивысшая температура развивается в верхней и периферической частях пламени (рис. 2.4), поэтому не следует опускать петлю непосредственно к горелке. Сразу же после стерилизации петлю (иглу) вводят в сосуд с микро­организмами. Чтобы не повредить клетки микроорганизмов, петлю (иглу) вна­чале охлаждают, прикасаясь ею к внутренней поверхности сосуда или к пита­тельной среде, свободной от клеток микроорганизмов, и только после этого захватывают небольшое количество микробной массы.

Приготовление препаратов

Препараты готовят, как правило, на предметных стеклах, толщина которых не должна превышать 1,2—1,4 мм. Более толстые стекла не позволяют полу­чить резкое изображение краев диафрагмы осветителя в плоскости препарата, так как оно оказывается в толще стекла, а это нарушает фокусировку конден­сора и резко снижает четкость изображения. Толстые предметные стекла недо­пустимы при работе с иммерсионным объективом, когда необходимо полно­стью использовать числовую апертуру системы.

Существенным моментом является подготовка поверхности предметных сте­кол, что особенно важно при изготовлении фиксированных препаратов. По­верхность стекла должна быть тщательно очищена и обезжирена, чтобы капля жидкости равномерно расплывалась по стеклу, а не собиралась в выпуклые, медленно высыхающие капельки. Наиболее надежный способ обезжиривания -обработка стекол хромовой смесью с последующим споласкиванием водой и спиртом. В повседневной работе, однако, вполне достаточно бывает тщательно натереть сухое стекло мылом, после чего вытереть его чистой хлопчатобумаж­ной салфеткой. Хорошее обезжиривание достигается протиранием вымытых и высушенных стекол ватой, смоченной эфиром (после этого промывание во­дой не требуется), или обжиганием поверхности стекол в пламени горелки (жир при этом сгорает). Запрещается кипячение стекол в растворах щелочей, в том числе моющих средствах, а также длительное выдерживание стекол в та­ких растворах, так как щелочи разъедают стекло, делая его поверхность мато­вой. Хранить чистые обезжиренные стекла можно в сухом состоянии или в этаноле.

Покровные стекла, применяемые для приготовления препаратов микроор­ганизмов, также должны быть тщательно вымыты и высушены. Толщина по­кровных стекол не должна превышать 0,15 — 0,17 мм. Более толстые стекла резко ухудшают качество получаемого изображения.