Микробиологическая диагностика
Лекция 20 (4.09.12)
Коринебактерии дифтерии. Микобактерии туберкулеза.
Туберкулез
Эпидемический порог по заболеваемости 1,5 %
по красноярскому краю на сегодняшний день 3,2-3,4 % - эпидемия туберкулеза
Первичная лекарственная устойчивость микробактерий туберкулеза - 49%
Вторичная лекарственная устойчивость микробактерий туберкулеза - 74-78%
Лекарственная устойчивость микобактерий туберкулеза
1. Первичная лекарственная устойчивость
2. Приобретенная (вторичная)
3.
Смертность от инфекционных заболеваний по Сибирскому региону - 80 %
Туберкулез - хроническое инфекционное заболевание, проявляющееся поражением органов дыхания, костей, суставов, кожи, мочеполовых органов и т.д.
Характеризуется образованием специфических гранулем. В пораженных органах и тканях - формированием клеточно-опосредованной гиперчувствительности.
Отдел: Firmicutes
Порядок: Actinomycetalis
Семейство:Mycobacteriaceae
Род:Mycobacterium
Вид:M. Tuberculosis (95% случаев туберкулеза у человека)
M. Bovis (5% крупный рогатый скот, верблюды, собаки и кошки)
Эпидемиологически значимы - возбудителя выделяют с мочой, калом, слюной и мокротой. Все это является фактором передачи и молоко, мясо.
-M. Africanum (основной возбудитель туберкулеза в Африке)
Морфо-тинкториальные свойства
· Тонкие прямые или слегка изогнутые палочки
· Полиморфные палочки
· Размер 1-10мкм длина, ширина 0.2-0.6 мкм
· Способны образовывать L формы сохраняющими инфицированность, т к в клеточной стенке много липидов и восков
· Грам «+», но окрашиваются плохо
· Не подвижны
· Капсула и спора -
· Кислотоустойчивые
· Агрессивное окрашивание прогревание и обесцвечивание
Культуральные свойства
Микобактерии аэробы
· Опитмальная температура 37-38
· pH 6,8-7,2
· Требовательны к питательным средам ( яйцо, глицерин белки витамины и другие факторы роста) Cреда левеншьейна Йенсена, финна-2
· Растут очень медленно (время генерации 16-18 часов)
· На твердых питательных средах появляются через 14-40 дней
· Цвет топленого молока, слоновой кости
· Шероховатые бугорчатые колонии сухие
· На жидких питательных средах вырастает сухая крошковатая пленка (т.к. липиды и воски) на 7-10 сутки
Эпидемиология
Источник инфекции больной человек активный бациловыделитель, реже животные
Основной путь заражения: воздушно капельный, контактный, возможен алиментарный, редко трансплацентарный.
Резистентность
В окружающей среде очень высокая т.к. много липидов и восков в клеточной стенке.
· Рассеянный солнечный свет 8-10 суток могут выдерживать
· При воздействии прямого солнечного света погибают через 45-55 минут
· В различных объектах сохраняется от месяца до года
К обычным дезинфектантам в обычном количестве и экспозиции не чувствительны,
быстрая резистентность
Факторы патогенности
1. Туберкулопротеины (56% остатка клетки - белки)
- Основные АГ
- Высокотоксмчны
- Вызывают гуморальный и т клеточный иммунный ответ
- Вызывают Развитие ГЗТ (4 тип аллергии)
2. Липиды (10-40% сухого остатка клетки). Состоят из нейтральных жиров, восков, стеринов, фосфатидов, сульфатидов, жирных кислот.
Жирные кислоты (фтоидная, миколовая и др) токсическое действие на ткани
Фосфатидная фракция (содержит фтиоидную кислоту) - специфическая тканевая реакция с образованием эпителиоидных клеток
Восковая фракция (содержит николувую кислоту) - образование гигантских многоядерных клеток
3. Токсический гликолипид (Корд - фактор) - главный фактор патогенности. Располагается в клеточной стенке.
По химической природе - полимер, состоящий из трегалозы, николовой и миколовой жирных кислот.
Корд фактор эффекты
· Оказывает токсическое действие на ткани
· Препятствует фагосомо-лизосомальному слиянию в фагоците - защищает от фагоцитоза
· Блокирует окислительное фосфорилирование в митохондриях макрофагов - защищает палочки от завершенного фагоцитоза
· Подавляет миграцию лейкоцитов в очаг воспаления
Патогенез
Первичное попадание в легкие Микобактерии достигшие альвеол поглощаются макрофагами (не завершенный фагоцитоз) В регионарный лимфо-узел Размножаются микобактерии в макрофаге Белковые факторы сенсибилизируют организм в течении 2-8 недель, в период внутриклеточного размножения развивается специфическая клеточно-опосредованная реакция (гиперчувствительность замедленного типа) в этот период ее можно выявить пробой манту (у детей это туберкулезная интоксикация) лимфоциты продуцируют + моноциты в этот очаг, под воздействием липидов они превращаются в эпителиоидные клетки ограничивая очаг от близ лежащих тканей Образуется гранулема Скопление микобактерий в центре обволакиваются клетки микобактерий (снижение количества О2 - наличие некроза в гранулеме)
Уход в состояние анабиоза и могут храниться в гранулеме десятилетиями. В очаге все гибнет из за отсутствия О2.
Фибробласты синтезируют коллаген происходит кальцификация, но микроорганизмы не погибают.
Очаг в легких+ Лимфаденит (лимфоузел в корнях легких) + Лимфангоит (лимфатические сосуды от очага к лимфоузлу) = первичный туберкулезный комплекс.
Исходы контакта с М. tbs.
Встреча с М. tbs. первичный tbs. Бугорок
1 исход: полное заживление и кальцификация без развития заболевания (90-95%) развитие заболевания
2 исход: диссеменация возбудителя (гематогенно может разнестись в любые органы) 1. Полное заживление и кальсификация без развития заболевания (проба Манту анабиоз микобактерий) развитие заболевания
2. Милиарный tbs., tbs менингит развитие заболевания
Иммунитет
· ПТИ развитие нестерильного специфического иммунитета опосредуется Т-лимфоцитами клеточный иммунитет
· Коррелирует с активность ГЧЗТ (гиперчувствительность замедленного типа)
· АТ не имеют защитного значения защитного протективного эффекта нет
Микробиологическая диагностика
Микробиологический метод
· Прямая микроскопия и микроскопия с обогащением по Цилю-Нильсену. Для обогащения используют флотацию и центрифугирование.
· Люминесцентная микроскопия (не РИФ) – окраска ауромином и родамином.
2. Бак. метод (1,5-3месяца) -Точная идентификация возбудителя и определенной чувствительности к химиопрепаратам.
3. Биологический метод –Заражение морской свинки (дорого)
4. Серологический метод –Серодиагностика (выявление АТ) – ИФА
5. Аллергический метод –КАП с туберкулином (реакция Манту). Туберкулин-аллерген-белковый экстракт культуры. Вводят внутрикожно, учет через 48-72 часа.
6. ПЦР– обнаружение генов резистентности.
7. Диаскинтест –кожно-аллергическая проба.
Профилактика
Вакцина БЦЖ –живая аттенуированная вакцина M. Bovis, вводится при выписке детей из родительского дома. Ревакцинация в 7, 12, 17, 22 и 27-30 лет, лицам с отрицательной реакцией Манту.
Дифтерия
До вакцинации – 400 на 100 тысяч населения.
После введения вакцинации 0,2-0,03 на 100 тысяч населения (с 1976-1977гг).
Эпидемия к 1990 году из-за низкого уровня охвата противодифтерий прививками детей первого года жизни.
1994 год – 15 республик СССР эпидемии.
1995 год – заболевших 88%
Отдел:Firmicutes
Группа: Coryneform
Семейство:Corynebacteriaceae
Род:Corynebacterium
Вид:
1.C. diphtheria
· Биовары: Mitis
· Gravis
· Intermedius
2. C. ulcerans
Морфо-тинкториальные свойства:
· Полиморфные, прямые или слегка изогнутые палочки
· Длина 1-12 мкм, ширина 0,3-0,8 мкм
· Често утолщены на концах (булова) скопления полифосфата
· Грам «+»
· Спору и капсулу не образуют
· В мазках в виде растопыренных пальцев, буквы V, иероглифов, полисадников
· Окраска по Нейсеру на краях зерна валютина
· Образуют L-формы
Культуральные свойства:
· Факультативные анаэробы
· Температура 36-37 С
· рН=7,4-8,0
· Элективная среда – кровяно-теллуритовый агар (КТА) колонии черного или серого цвета (содержание металла), восстанавливает теллурит
· На жидких средах помутнение и осадок
· Черные колонии, гладкие, блестящие на твердой питательной среде.Gravis – на маргаритку.
Патогенные факторы:
· «Экзотоксин» (гистотоксин) блокирует процесс белкового синтеза и тканевого дыхания. Действие на фактор элонгации-2 он его рибозилирует, Связан с АДФ-рибозой, после этого фактор не может встроится в рибосому Нарушение синтеза белка Гибель клетки.
· Делиминизация – паралич – миокарда, нервной системы и адреналовой системы.
· Кодируется в геноме бактериофага умеренного Не все продуцируют токсин – лизогенные штаммы, инфицированные умеренным бактериофагом.
· Адгезины
· Гиалуронидаза
· Нейраминиздаза
· Фосфолипаза и протеаза
· Диструкция и некроз тканей
Атропоноз –носители штаммов
Пути передачи:воздушно-капельный и контактный
Резистентность:сохранена на объектах окраска сохраняется от 1-7 мм. Действуют дезенфектанты.
Патогенез:
Входные ворота:Слизистые ротоглотки, слизистые глаз, влагалище, уретра Размножение возбудителя в месте входных ворот Коагуляционный некроз эпителия, расширение и перенаполнение кровью кровеносных сосудов (гиалуронидаза) отек выполнение фибриногена некротические клетки при разрушении высвобождающих тромбокиназу взаимодействия с фибриногеном образуя сетку фибрина (многослойный плоский эпителий, зев, глотка).
Верхние дыхательные пути эпителий поверхностного слоя, и основа соединительной ткани, нити наверх и сверху пленка, не происходит очищение некротизированных тканей некротизированный труп.
На однослойном плоском эпителии (дыхательные пути) – некроз эпителиального слоя. Пленка не прочно связана с подлежащими тканями Легко отделяется Крупозное воспаление.
Посев одновременно из зева и носа.
Среда КТА, накопление – сывороточный агар.