Кольцепреципитация реакциясы

Пробиркада агглютинация реакциясы.

Алдымен сары суларды ерітулерін дайындайды, олар титрына байланысты 1:50, 1:100 немесе 1:1000 райды. Сосын сары суларды ерітулер сериясын атардаы алдыы пробиркадан келесі пробиркаа 1 мл-ді тасымалдау арылы жасайды. Соы пробиркадан 1 мл ерітілген сары суды бірдей клемді сатау шін алып тастайды. Баылау пробиркасына (контроль антигена) 1 мл натрий хлоридіні изотоникалы ертіндісін яды. Сарысу ерітілген рбір пробиркаа жне баылау пробиркасына пастер пипеткасымен 1 мл 3 млрд микроб денелері бар 2 тамшы бактерия массасын енгізеді. Пробиркаларды шайап, термостата 2 саата 37С ояды, сосын 1 тулік блме температурасында сатайды. Агглютинация реакциясыны нтижесін баылау пробиркасынан бастап, аырын шайап, рбір пробирканы кезекпен баалайды.

Агглютинация реакциясыны интенсивтілігін келесі белгілер бойынша анытайды: ++++ толы агглютинация – аггютинат хлопьясы наыз млдір сйытыта, +++ толы емес агглютинация – хлопья лсіз палесцирлеуші сйытыта, ++ жартылай агглютинация – хлопьяны круге болады, сйыты аздап лайланан, + лсіз, кдікті агглютинация- сйыты те лайлы, ондаы хлопьялар крінбейді, - агглютинация жо, сйыты біркелкі лайлы.

Бл реакцияжіішке пробиркаларда (диаметр 0,5см) жасалады, рбір пробиркалара 0,2-0,3 мл преципитациялы сарысуын осады. Осыдан кейін Пастер пипеткасымен 0,1-0,2 мл антиген ерітіндісін абаттастырады. Пробиркаларды аырын вертикальды баыта ауыстырады. Реакцияны нтижесін 1-2 минуттан кейін орытындылайды. Егер реакция о болса, сарысу мен зерттелетін антигенні шекарасында приципитат а тсті саина пайда болады. Ал баылау пробиркаларында приципитат тзілмейді

16. Сахаролитикалы белсенділікті анытау

Микроорганизмдерді кмірсуларды ферменттеу абілетін анытау шін ыса жне зын «ала» атарларды олданады. ыса атарды рамына моно- жне дисахаридтері (глюкоза, лактоза, сахароза, мальтоза жне алты атомды спирт – маннит) бар Гисс ортасы кіреді. зын «ала» атара, сонымен оса, осымша моносахаридтері (арабиноза, ксилоза, рамноза, галактоза, т.б.), полисахаридтері (инсулин, крахмал, гликоген, т.б.) жне спирттері (глицерин, дульцит, инозит, т.б.) бар орталарды енгізеді. Индикатор ретінде барлы орталара Андреде реактивін немесе баса реактивтерді осады.

Зерттелетін бактерияларды таза культурасын «ала» атар орталарына ілмек кмегімен себеді. Егулерді 37⁰С-та 18-24 саат бойы инкубациялайды. Егер бактериялар кмірсуларды ышыл заттара дейін ыдыратып ферменттесе, орта тсіні згеруі байалады: кмірсуды ышыла жне газ трізді заттара дейін ыдырауында, орта тсіні згеруімен атар алытыда (поплавок) газ тйіршігі пайда болады. Егер жартылай сйы агары бар ортаны олданса, газ тзілуін баананы блінуі кезінде баылайды. Ферментация болмаса, орта тсі згермейді. Бактериялар Гисс ортасына кіретін кмірсуларды ана ферменттейтіндіктен, біршама ала бейнені круге болады. Сондытан тсті индикаторы мен кмірсулары бар ортаны жиынтыын «ала» атар деп атаан.

17.Протеолитикалы ферменттерді анытау.

Протеолитикалы ферменті анытау шін 10-20 желатин баанасына , пептонды суа бактериялар даылын укол арылы себеміз. Желатинде даылдар бірнеше кн бойы 20-22 температурада инкубацияланады. Протеолитикалы ферменттер аныталса, воронка немесе шырша трізді фигура тзіп, бактериялар желатинді ыдыратады.

18. Пептолитикалы ферменттерді анытау Нтижелерін интерпретациялау.

Пептонды судаы себінділерде 37С –та 2-3 тулікте инкубациялананнан кейін пептонны ыдырау німдерін анытайды – аммиака, индола, ккіртсутекке реакциялар ояды.

Аммиака реакция. Ламкус аазыны жіішке жолаын пробирканы астына орек ортасына тимейтіндей етіп бекітеді. аазды кгеруі аммиакты бар екенін длелдейді.

Индола реакция. Эрлих дісі: бактерия даылы бар пробиркаа 2-3 мл эфир осады, оларды араластырып, Эрлих реактивін осады. Индол болан жадайда ызылт (розовое) тске боялады, байап абаттастыранда бірреттік саина тзіледі.

Ккіртсутекке реакция. Ккіртсутекті анытауа арналан реактиві бар орек ортасыны баанасына уколмен бактерия даылын себу жасайды. Ккіртсутек болса, агарды араюы болады.

19. Ауадан микробты тазалыын анытау шін себінді алу.

Ауаны санды микробиологиялы дістеріні негізінде седиментациялы,аспирациялы(фильтрация) дістер жатады.

Седиментациялы діс.2 орек ортасы бар Петри тостааншасын 60 минут бетін ашы алдырады.Одан кейін себінділерді 37 С термостатта инкубациялайды.Инкубациядан кейін, ортада сіп шыан колонияларды саны бойынша зерттейді.Егер колониялар:250-ден кем болса,ауа таза;250-300 ауаны орташа ластананын;500-ден кп болса,ауа ластанандеп есептеледі.

Аспирациялы діс.Бл ауа рамындаы микробтарды санды анытауды е наты дісі. Ауаны себінділерін приборлар арылы жзеге асырады. Кротов аппаратыны рылысыауа белгіленген жылдамдыпен жіішке плексигласты пластинаны саылауы арылы сорылып, оректік агары бар Петри тостааншасына келіп тсуге негізделген.Осы кезде рамында микроорганизмдер бар аэрозольді блігі барлы оректік ортаны бетінде біркелкі бекиді, себебі кіреберістегі саылауда тран тостаанша немі айналып трады.Себінділерді инкубациялааннан кейін термостатта микробтарды санын мына формуламен анытайды:

Х=

мндаы:а-тостааншада сіп шыан колонияларды саны;V-прибордан ткен ауаны клемі, ;1000-ауаны стандартты клемі, .Ауадаы микробты санын анытаанда гемолитикалы стрептококктарды блінуі шін оректік агарды олданады.Генциан фиолет осылан анды агарды баылау шін микроскоптайды жне кдікті колонияларды тадап алып анды агара себеді.

оректік орталарды рамы:Генциан фиолет осылан анды агар:2% оректік агар,5-10% атты,тышанны немесе ойды дефибринденген аны,генцианді фиолет(1:50 000).

Сары-тзды агар:2% оректік агар,10%натрий хлориді,20%(клемі бойынша)сарыуыз оспасы(1тауы жмыртасыны сарыуызы: 200мл натрий хлоридіні изотоникалы ерітіндісіні атынасына).

Ауаны зерттеу шін баса да приборлар(Дьякова,Речменского,Киктенко,ПАБ-1-пробоотборник аэрозольный бактериологияеский,ПОВ-1-прибор для отбора воздуха) олданылады.Оларды кмегімен ауаны аныталан клемін сйыты немесе фильтр арылы ткізіп,оректік орталарда лшем(мерные)себінділер жасайды.ПАБ-1 мен ПОВ-1 ауаны лкен клемі мен патогенді бактериялар мен вирустарды зерттеу шін олданылады.

20.Судан микробты тазалыын анытау шін себінді алу: толы емес

Су бырларындаы суды 1 мл клемінде , ал ашы су ьсоймаларында 1,0; 0,1; 0,01мл клемде себеміз. Барлы сынамаларды стерильді Петри чашкасына салып, содан кейін олара 10-12 мл еріген жне 45-50 ⁰С дейін суытылан оректік агарды яды, оны сумен жасылап араластырады. Себулерді 37 ⁰C та 1-2 тулік инкубациялаймыз. Ал ашы су оймаларыны суын параллель екі чашка серияларына себеміз. Біреуін 37 ⁰C та 1 тулік инкубациялаймыз, ал екіншісін 2 тулік бойы 20 ⁰C та инкубациялайды. Содан со бетінде жне тбінде пайда болан колонияларды санын анытаймыз жне судаы микробтарды санын анытаймыз – 1 мл судаы микроорганизмдер млшері.