Вскрытие и микробиологическое исследование погибших животных

При экспериментальном заражении вскрытие животного после его гибели, характер изменений и результат бактериологического исследования внутренних органов позволяют выяснить причину смерти животного, пути распространения возбудителей в организме и место их локализации. В некоторых случаях животных приходится умерщвлять на определенных этапах эксперимента. Существует несколько способов умерщвления. Наиболее часто применяют следующий: животное помещают в банку или плотно закрывающийся сосуд, в который опускают кусок ваты, смоченный эфиром или хлороформом. Гибель животного наступает через несколько минут. Одним из способов умерщвления мелких животных, например мышей, является декапитация (мышам срезают голову). Для умерщвления кроликов используют воздушную эмболию: вводят иглу в вену, соединяют ее со шприцем без жидкости и, нажимая на поршень, вводят воздух в вену; животное погибает мгновенно.

Вскрытие следует производить непосредственно после гибели животного, чтобы избежать проникновения микроорганизмов из кишечника в кровь и другие органы. При отсутствии такой возможности трупы сохраняют на холоду.

Вскрытие производят на специальном столе, в отдельной комнате, если такая имеется.

На столе должно находиться все необходимое для вскрытия, бактериологического исследования патолого-анатомического материала: доска или кювета, залитая парафином, для фиксации животного; газовая горелка или спиртовка; сосуд со спиртом и ватой на дне, в котором находятся простерилизованные инструменты (ножницы, скальпель, хирургический и анатомический пинцеты и др.); стерильные ватные тампоны, бактериальная петля, стерильные пастеровские пипетки, предметные стекла, чашки Петри, пробирки с питательными средами. Выбор сред зависит от вида микроорганизмов, которых считают причиной гибели животного.

Все наблюдения, сделанные во время вскрытия, протоколируют. Отмечают вид животного, номер, время и место заражения, материал, примененный для заражения, время гибели, обнаруженные изменения и т. д.

Во время вскрытия надо следить за тем, чтобы жидкость и кусочки тканей и органов не попали на стол. После каждой манипуляции инструменты промывают водой или спиртом и прожигают. Сделанные посевы надписывают. Мазки фиксируют в пламени горелки или в специальной фиксирующей жидкости (например, в смеси Никифорова).

Вскрытие состоит из следующих этапов: 1) фиксация животного; 2) осмотр наружных покровов; 3) вскрытие и исследование грудной полости; 4) вскрытие и исследование брюшной полости.

Фиксация. Животных укладывают брюшком вверх. Кроликов и морских свинок привязывают за лапки к находящимся в углах доски крючкам или кольцам. Мышам и крысам лапки можно приколоть кнопками или иглами. Лапки при этом широко раздвигают.

Осмотр наружных покровов. Ватой, смоченной дезинфицирующим раствором, протирают всю поверхность тела. Осматривают наружные покровы и делают разрез кожи по средней линии, начиная от лобка до нижней челюсти, стараясь не повредить при этом боковые надрезы. Инструменты, использованные для вскрытия кожи, протирают, обжигают или меняют и только тогда продолжают вскрытие. Пинцетом захватывают край кожного лоскута и скальпелем отсепаровывают его от подкожной клетчатки. Отмечают состояние паховых и подмышечных лимфатических узлов, подкожной клетчатки, расширение сосудов, кровоизлияние, нагноения и т. д.

При обнаружении изменения лимфатических узлов (припухания, отека, нагноения) делают мазки и посев их содержимого на специальные среды.

Для вскрытия грудной полости захватывают пинцетом мечевидный отросток, под ним делают разрез, в который вставляют ножницы, и перерезают с обеих сторон ребра в месте соединения их с хрящами грудной кости. Грудину отбрасывают вверх и осматривают грудную полость. При осмотре легких и сердца отмечают их цвет, величину, консистенцию. При наличии изменений производят посев и делают мазки из измененной части легкого. Далее срезают кусочек легкого и опускают его в баночку или пробирку с водой. Здоровое легкое всплывает на поверхность, больное тонет. Обязательно делают посев крови из сердца. Для этого придерживают сердце пинцетом у его основания, прижигают раскаленным скальпелем верхушку сердца и стерильной пастеровской пипеткой прокалывают прожженный участок, кровь при этом поднимается в капилляр. Набранную кровь выдувают по каплям в питательные среды и делают из нее мазки.

При вскрытии брюшной полости пинцетом приподнимают кожу брюшной стенки, ножницами делают разрез от лобка до диафрагмы, затем делают два боковых надреза - у лобка и диафрагмы, широко открывая этим брюшную полость. Осматривают все органы брюшной полости, из измененных органов делают посев на питательные среды, мазки и мазки-отпечатки. При отсутствии внешних изменений обязательно производят посев и делают мазки из селезенки, печени и мезентериальных узлов. Для посева прижженную поверхность органа надрезают стерильным скальпелем, из глубины органа вырезают кусочек, часть его опускают в питательную среду, из другой части делают мазки-отпечатки, прикладывая срезанную часть к стеклу, и мазки. Отпечатки всех органов можно сделать на одном стекле, соблюдая определенную последовательность в их расположении. Этот метод принят при эксперименте на животных, зараженных возбудителями особо опасных инфекций. Зная последовательность расположения отпечатков различных органов, можно не надписывать каждый отпечаток (рис. 30).

Рис. 30. Приготовление мазков-отпечатков органов и мазка крови на одном стекле. 1 - лимфатические узлы; 2 - легкое; 3 - селезенка; 4 - печень; 5 - мазок крови

После окончания вскрытия производят тщательную уборку рабочего места. Труп животного укладывают в банку или специальный сосуд (например, ведро) и под контролем ответственного лица сжигают или автоклавируют. Если нельзя уничтожить труп сразу после вскрытия, его заливают дезинфицирующим раствором (5% карболовая кислота или 5% лизол). Доску или кювету протирают спиртом и прожигают или заливают на сутки дезинфицирующим раствором. Инструменты осторожно с помощью чистого пинцета укладывают в стерилизатор и кипятят 30-40 мин. После работы с патогенными спорообразующими бактериями инструменты автоклавируют. Посевы помещают в термостат.

Зафиксированные мазки окрашивают и изучают.

Контрольные вопросы

1. С какой целью проводят вскрытие лабораторных животных?

2. Из каких этапов состоит вскрытие лабораторных животных?

3. Как готовят мазки и мазки-отпечатки из органов и тканей? Какие правила надо соблюдать при приготовлении отпечатков на одном предметном стекле?

4. Как дезинфицируют оборудование и инструменты в ходе и по окончании вскрытия?

В микробиологической практике животных используют также в качестве доноров. Кровь животных применяют как в цельном виде, так и для получения ее отдельных составных частей (сыворотка, плазма, эритроциты и т. д.). Кровь и сыворотка крови могут быть использованы как ингредиенты сред, а также для изучения иммунных свойств после вакцинации.

Чаще используют кровь кролика, морских свинок, реже - крыс и мышей, из крупных животных - кровь лошадей, баранов, быков.

Способ получения крови зависит от вида животного и цели исследования.