Физические методы стерилизации.
1. Прокаливание производится на пламени спиртовой или газовой горелки. Этим способом стерилизуют бактериологические петли, препаровальные иглы, пинцеты и некоторые другие инструменты.
2. Кипячение применяют для стерилизации шприцев, мелкого хирургического инструментария, предметных и покровных стекол и т. п. Стерилизацию кипячением проводят в стерилизаторах, в которые наливают воду и с помощью подогрева доводят до кипения. Для устранения жесткости и повышения температуры кипения к воде добавляют 2% гидробикарбонат натрия. Инструменты кипятят обычно в течение 30 мин., но данный метод не обеспечивает полной стерилизации, т. к. споры бактерий при этом не погибают. Для уничтожения возбудителей болезни Боткина необходимо кипячение 45-60 мин.
3. Стерилизация сухим жаром производится в сушильном шкафу или печи Пастера при температуре 160 - 170 гр. С в течение 1-1,5 часов с момента достижения заданной температуры, при более высокой температуре происходит обугливание ватных пробок, бумаги, в которую завернута посуда, а при более низкой - требуется больший срок стерилизации. Сухим жаром стерилизуют стеклянную посуду - пробирки, чашки Петри, пипетки и прочее.
4. Стерилизация насыщенным паром под давлением (автоклавирование) - это один из самых эффективных методов стерилизации, аснрванный на сильном гидролизующим действии насыщенного пара. Проводится'в автоклаве. Таким способом стерилизуют питательные среды МПА и МПБ, растворы или посуду с заразным материалом, белье, перевязочный материал. Существуют следующие режимы автоклавирования: при давлении 0,5 атм., 112 гр. С, при 1 атм., 121 гр. С, при 1,5 атм., 127 гр. С, при 2 атм., 134 гр. С. длительность автоклавирования 20 мин., после достижения нужных параметров давления и температуры.
5. Стерилизация текучим паром проводят при Т = 100 гр. С. Применяется в тех случаях, когда материал не выдерживает более высокой температуры (например, питательные среды с витаминами, углеводами, желатином и др.). Стерилизацию текучем паром проводят в автоклаве при открытом выпускном кране и незавинченой крышке или в аппарате Коха. На дно автоклава или аппарата Коха наливают воду и нагревают до 100 гр. С., образующийся пар движется вверх через заложенный материал и стерилизует его. Режим стерилизации - в течение трех дней по 30-60 мин. В первый день вегетативные формы микроорганизмов при такой стерилизации гибнут, а споры сохраняются. На третий день стерилизации обеззараживается вся споровая флора, которая, после первого и второго прогревания, завершает свою вегетацию.
6. Тиндализация - это дробная стерилизация материалов при Т = 56-60 гр. С в течение 5-6 дней подряд. Применяется при стерилизации легко разрушающихся при высокой (100 и выше) температуре веществ (сыворотки, витамины и пр.).
7. Пастеризация - однократное нагревание материала до 50-80 гр. С, в течение 30 мин., с последующим быстрым охлаждением, при таком способе стерилизации уничтожаются не споровые микроорганизмы. Применяется при стерилизации пищевых продуктов (вино, пиво, молоко, соки, др.), которые после пастеризации рекомендуется хранить в холоде.
8. Стерилизация ультрафиолетовыми лучами применяется для стерилизации воздуха в микробиологических лабораториях, боксах, операционных и т. д. для этого используют бактерицидные лампы различной мощности.
Механическая стерилизация (фильтрование).
Фильтрование проводят с помощью мелкопористых бактериальных фильтров разных типов, задерживающих только клеточные формы микроорганизмов или их споры. Бактериальные фильтры изготавливаются из фарфора, каолина, мелкопористого стекла, асбеста и др. материалов. Для фильтрования используют специальное устройство -аппарат Зейтца, в котором используются бактериальные фильтры.
Фильтрованием стерилизуют жидкие материалы, не выдерживающие нагревания (сыворотку крови, антибиотики и др.).
Химическая стерилизация
Применяется если объекты нельзя автоклавировать (питательные среды, пластмассовая лабораторная посуда и др.). Стерилизующее химическое вещество должно быть не только токсичным, но и летучим, для быстрого исчезновения из простерилизованного объекта. К таким веществам относятся окись этилена, которая губительно действует на вегетативные и споровые формы микроорганизмов. Применение вещества ограничено, так как оно токсично, нестойко (быстро испаряется), взрывоопасно.
Дезинфекция.
Дезинфекцией называется уничтожение патогенных микроорганизмов в окружающей человека среде.
Дезинфекция бывает профилактической и очаговой, текущей и заключительной. Она позволяет предупредить распространение инфекционных болезней среди населения. Профилактическую дезинфекцию проводят в жилых объектах, предприятиях переработки животного сырья, в местах общественного пользования, в сооружениях водоснабжения, медицинских учреждениях, бактериологических лабораториях.
Очаговая дезинфекция осуществляется в эпидемическом очаге: в больнице или дома, где находится больной - бактериовыделитель. Дезинфекция, которая проводится после госпитализации, выздоровления или смерти больного - называется заключительной.
Задачей текущей дезинфекции является обеззараживание выделений больного (испражнения, моча, рвотные массы, мокрота) и предметов обихода, на которые могут попасть патогенные микроорганизмы.
Задачей заключительной дезинфекции является - обеззараживание предметов с которыми соприкасается больной, в ряде случаев проводится ремонт помещений.
Основные дезинфектанты. В практике дезинфекции применяются многие химические антимикробные вещества. По механизму действия на микроорганизмы их разделяют на несколько групп: 1) денатурирующие (коагулирующие) белки - фенол, лизолы, соли тяжелых металлов, спирты, кислоты; 2) омыляющие (растворяющие) белки - щелочи; 3) окисляющие белки - хлорная известь, хлорамин, калия перманганат, пероксиды; 4) поверхностно-активные вещества, вызывающие повреждение клеточной стенки бактерий, - мыла, детергенты. Отдельно выделяют формальдегид, противомикробное действие которого объясняют взаимодействием препарата с аминогруппами белков.
Контрольные вопросы.
1. Какие физические факторы оказывают влияние на жизнедеятельность микроорганизмов?
2. Какие вещества относятся к дезинфицирующим и как они различаются по механизму воздействия на микроорганизмы?
3. Перечислите какие взаимоотношения существуют между микроорганизмами?
4. Назовите способы стерилизации?
5. Что такое пастеризация, тиндализация?
6. В чем заключается метод стерилизации - фильтрованием?
7. Что такое биологическая стерилизация?
РАЗДЕЛ 5
ОСНОВЫ ИММУНОЛОГИИ.
ПРАКТИЧЕСКАЯ РАБОТА №10
Серологическая реакция
Серологические реакции-реакции взаимодействия между антигена и антителом протекают в две фазы:
1-ая Фаза - специфическая - образование комплекса антигена и соответствующего ему антитела. Видимого изменения в этой фазе не происходит, но образовавшийся комплекс становится чувствительным к неспецифическим, факторам, находящимся, в среде (электролиты, комплемент, фагоцит);
2-ая фаза - неспецифическая. В этой фазе специфический комплекс антиген-антитело взаимодействует с неспецифическими, факторами среды, в которой происходит реакция. Результат их взаимодействия может быть, видим невооруженным глазом (склеивание, растворение и т.п.)
Различают реакции агглютинации, преципитации, связывания комплемента и др.
Применение серологических реакций. Одно из основных применений серологических реакций - лабораторная диагностика инфекций. Их используют:
1. для выявления антител в сыворотке больного, т. е. для серодиагностики;
2. для определения вида или типа антигена, например выделенного от больного микроорганизма, т. е. для его идентификации,
Посуда. Должна быть чистой и сухой. Применяют пробирки, пипетки градуированные и пастеровские, колбы, цилиндры, предметные и покровные стекла, чашки Петри, пластины из пластмассы с лунками.
Инструменты и оборудование. Петля, штативы; лупа, агглютиноскоп, термостат, холодильник, центрифуга, весы химические с разновесом.
Исследуемый материал.
Сыворотка крови -1 это жидкая часть, выделяемая: после образования фибринового сгустка и осаждения форменных элементов.
Сыворотку обычно получают на второй неделе болезни, когда можно ожидать наличие в ней антител, иногда пользуются сыворотками выздоравливающих и переболевших.
Для получения сыворотки кровь берут из вены в количестве 3-5 мл в стерильную пробирку и направляют в лабораторию, сопровождая этикеткой, с указанием фамилии и инициалов больного, предполагаемого диагноза и даты.
Кровь следует брать натощак или не раньше чем через 6 ч после еды. В сыворотке крови после еды могут содержаться капельки жира,: которые делают ее мутной и не пригодной для исследования.
Для получения сыворотки кровь оставляют на 1 ч при комнатной температуре или ставят в термостат при 37 С на 30 минут для образования сгустка.
Образовавшийся сгусток отделяют от стенок пробирки пастеровской пипеткой или петлей. Пробирку помещают в холодильник на некоторое время (обычно на 1 ч, но не более 48 ч) для лучшего отделения сыворотки из сжавшегося на холоде сгустка. Затем сыворотку отсасывают стерильной пастеровской пипеткой, снабженной резиновым баллоном или шлангом. Сыворотка должна быть совершенно прозрачной без примеси клеток.
Иммунные сыворотки получают из крови людей или животных (чаще кроликов и лошадей), иммунизированных по определенной схеме соответствующим антигеном (вакциной). В полученной сыворотке; определяют ее титр (активность). Титр - наименьшее количество антител, которое склеивает данное количество антигена. Готовят сыворотки обычно на производстве.
Реакция агглютинации.
Реакция агглютинации основана на специфическом взаимодействии антител (агглютитинов) с целыми микробами или другими клетками. Врезультате взаимодействия образуются частицы агломераты, выпадающие в осадок, называемый агглютинатом. В реакции агглютинации могут участвовать бактерии, простейшие грибы, дрожжи, риккетсии, эритроциты и другие клетки, как живые, так и убитые. Причем, находящиеся в агглютинате микроорганизмы остаются живыми, но теряют свою подвижность. Протекает реакция в две фазе:
1) - соединение антигена с антителом;
2) -образование видимою агглютината.
Таким образом, реакция агглютинации - это склеивание и выпадение в осадок корпускулярных антигенов под действием специфических антител в присутствии электролита в корпускулярном виде. Для реакции нужны:
1. Антитела (агглютинины), содержащиеся в сыворотке больного или иммунной сыворотке.
2. Антигены - взвесь живых или убитых микроорганизмов, взвесь эритроцитов или других клеток.
3. Изотонический раствор хлорида натрия.
Реакцию применяют для серодиагностики при брюшном тифе, паратифах, бруцеллезе и др. Антителом при этом является сыворотка больного, а антигеном - известный микроб. При идентификации микробов или других клеток антигеном служит их взвесь, а антителом - известная иммунная сыворотка.