Сущность иммуноферментного метода (ИФМ).
В основе лежит иммунная реакция взаимодействия Аг с АТ. Они маркируются ферментами – пероксидазой или щелочной фосфатазой. После образования иммунного комплекса в систему вносят субстрат, кот-й расщепляется ферментом. Среда окрашивается в жёлто-коричневый (при использовании пероксидазы) или жёлто-зелёный цвет (при использовании фосфатазы).
Этот метод позволяет непосредственно регистрировать взаимодействие Аг с АТ. Метод высоко чувствителен (Аг достаточно 1 нг/мл).
Типы вирусных гепатитов.
Формы вирусных гепатитов:
1) гепатиты с парентеральным (кровяно-контактный) мех-мом передачи – B, C, D, G, TTV. Характерно хроническое течение и вирусоносительство;
2)гепатиты с энтеральным мех-мом передачи – A, E, F. Передаются пищевым, водным и контактным путём, не исключены гемотрансфузионный и половой пути. Такие гепатиты всегда острые, протекают благоприятно и безвирусоносительства.
12. Какие серологические реакции применяются для диагностики гриппа?
1. Метод иммунофлюоресценции – это экспресс-диагностика. Аг светится ярко-зелёным цветом в ядре и цитоплазме клеток.
2. ИФМ – для ранней диагностики гриппа, выявляют М-белок вируса.
3. Р-я гемагглютинации – определяют подтип гемагглютинина (заражение куриного эмбриона).
4. Р-я связывания комплемента – определяют типовую принадлежность вирусов (тоже при заражении куриного эмбриона).
5.Р-я торможения гемагглютинации – определяют разновидность штамма вируса (на курином эмбрионе).
13. Какие серологические реакции применяют для диагностики вирусных инфекций?
1. Р-я нейтрализации – основана на подавлении цитопатогенного эффекта после смешивания вируса со специфичными АТ. Неизвестный вирус смешивают с известной антисывороткой и вносят в монослой клеток. Если клетки погибли, то вирус соответствует антисыворотке.
2. Р-я торможения гемагглютинации – применяют для идентификации вирусов, способных агглютинировать эритроциты.
3. Прямая иммунофлюоресценция – метод быстрый. Заражённые клетки светятся.
4. Иммуноэлектронная микроскопия – сложный и дорогой метод. Определяют различные виды вирусов.
Выявление противовирусных АТ в сыворотке:
1. Р-я торможения гемагглютинации;
2. Р-я связывания комплемента;
3. Р-я иммунофлюоресценции;
4. Иммуноферментный метод.
Выявление вирусных Аг:
1. Иммуноферментный метод.
2. Гибридизация ДНК.
3.ПЦР – полимеразно-цепная р-я.
14. Какие вирусы вызывают острые кишечные заболевания?
2-е место после ОРВИ.
1. Энтеровирусы – полиовирусы (полиомиелит), вирусы Коксаки А и В, ЕСНО-вирусы.
2. Ротавирусы.
3. Кишечные коронавирусы – гастроэнтерит.
4. Калицивирусы – гастроэнтериты, гепатиты.
5.Астровирусы - диарея, рвота.
15. Из каких этапов складывается процесс взаимодействия вируса с клеткой?
Процесс взаимодействия вируса с клеткой называется репродукцией. Выделяют её раннюю и позднюю фазы (синтез белков, сборка вириона, выход из клетки).
Ранняя фаза репродукции:
I. Адсорбция вириона на чувствительной клетке – зависит от электрического взаимодействия частиц на поверхности вируса и клетки; а также от pH, среды, t°. В дальнейшем взаимодействие носит специфический характер. Сначала образуется единичная связь прикрепительного белка вируса с рецептором клетки – обратимая адсорбция (вирион ещё можно удалить – изменив pH, используя ультразвук). Когда образуются множественные связи – это необратимая адсорбция.
II. Проникновение в клетку – пенетрация.
III. «Раздевание» вириона – разрушение белковой оболочки.
Есть вирусы «голые» и «одетые». «Голые» вирусы не имеют суперкапсида – это особая оболочка поверх капсида из 2-х слоёв липидов и 1 слоя белков. Белки образуют выросты, кот-е пронизывают 2 слоя липидов. «Одетые» вирусы имеют суперкапсид.
«Голые» вирусыпроникают в клетку путём эндоцитоза – погружение участка клеточной мембраны в месте их адсорбции. Этот процесс называется виропексис.
«Одетые» вирусыпроникают в клетку путём слияния суперкапсида с клеточной мембраной при участии F-белков. Слияние происходит при кислых значениях pH.
При проникновении «голых» вирусов в клетку образуются вакуоли (эндосомы). При проникновении «одетых» вирусов в цитоплазму происходит частичное разрушение белковой структуры вирионов и модификация их нуклеопротеидов – «раздевание». Модифицированные частицы теряют некоторые св-ва.
Типы вирусных геномов.
Вирусы содержат только 1 тип нуклеиновой к-ты – ДНК или РНК:
1) Вирусные ДНК – циркулярные или линейные 2-нитевые структуры. В вирусной ДНК на концах молекулы имеются повторяющиеся нуклеотидные последовательности – это позволяет молекуле замыкаться в кольцо;
2) Вирусные РНК – 1- или 2-нитевые молекулы. В 1 нити – 2-11 сегментов (это ведёт к увеличению кодирующей ёмкости):
а) + нити РНК – одиночные цепочки, имеющие «шапочки» на концах для распознавания рибосом. Функции: служат для синтеза структурных белков, матрицей для репликации РНК;
б) – нити РНК – не способны транслировать генетическую информацию на рибосомах. Также служат матрицей для синтеза РНК.
17. Арбовирусы. Какие типы флавивирусов вызывают энцефалит и омскую лихорадку?
Арбовирусы – возбудители вирусных природно-очаговых инфекций, передающихся через укусы кровососущих членистоногих. Возбудитель проникает прямо в кровь, вирусы репродуцируются в эндотелии сосудов и фагоцитах. Поэтому появляется сыпь и кровоизлияния.
Арбовирусы: тогавирусы, флавивирусы, буньявирусы, реовирусы.
Клещевой весенне-летний энцефалит – возбудитель РНК-геномный арбовирус рода флавивирусов.
Омская геморрагическая лихорадка - возбудитель РНК-геномный вирус рода флавивирусов. Этот вирус близок к вирусу клещевого энцефалита.
18. Каковы методы микробиологической диагностики клещевого энцефалита?
Вирусологические, биологические и серологические методы. Материал для исследования – кровь (в период вирусемии), спинномозговая жидкость (при менингоэнцефалите), моча и секционный материал.
1. Выделение возбудителя из крови проводят заражением куриных эмбрионов или культур. После появления признаков болезни вирус достигает высокого титра. Готовят Аг, используют их в РТГА и РСК. Окончательно идентифицируют вирус в РН.
2.Вирусспецифические АТ определяют в парных сыворотках с помощью РСК, РТГА, РПГА, РН.