Медицинская экология микроорганизмов. Санитарно - бактериологическая оценка объектов окружающей среды, пищевых продуктов.
План занятий:
1. Идентификация выделенной чистой культуры побиохимическим свойствам, учет чувствительности к антибиотикам.
2. Природные микробиоценозы. Экологические среды микробов.
3. Санитарно-показательные бактерии, их характеристика.
4. Определение микробного числа воздуха по методу Коха и с помощью аппарата Кротова.
5. Методы санитарно-бактериологической оценки воды: определение коли-титра, коли-индекса бродильным методом и с помощью мембранных фильтров. Определение микробного числа и коли-фагов.
6. Определение микробной обсемененности кожи рук и предметов обихода методом смывов.
ВВОДНЫЕ ЗАМЕЧАНИЯ
Микроорганизмы распространены повсюду. Большинство их в естественных условиях находятся в определенных взаимоотношениях друге другом. В окружающую среду патогенные бактерии попадают от больных, бактерионосителей и находятся там в течение определенного времени. В связи с этим санитарно-бактериологические исследования направлены на изучение и оценку различных объектов в целях определения их эпидемиологической безопасности. Методы проведения санитарно-микробиологических исследований предусматривают определение общей микробной обсемененности (ОМЧ), определение и титрование санитарно-показательных микроорганизмов, выявление в исследуемых объектах патогенных микробов и их метаболитов.
Непосредственное обнаружение патогенных микроорганизмов, как правило, затруднено из-за их малого количества, в связи с чем используются косвенные методы выявления микробной обсемененности постоянно сопутствующих патогенным бактериям санитарно-показательных микробов. ОМЧ расценивается как показатель интенсивности загрязнения окружающей среды органическими веществами.
Санитарно-показательными называют микроорганизмы, по которым можно косвенно судить о возможном присутствии патогенов в окружающей среде. Облигатные микробы кишечника и дыхательных путей являются санитарно-показательными; обнаружение на объектах окружающей среды E.coli. E.faecalis свидетельствует об их фекальном загрязнении. Выделение S.aureus из воздуха свидетельствует о его дыхательно-капельном загрязнении. Содержание санитарно-показательных бактерий оценивается по титру и индексу.
Цель занятия:
1. Изучить методы и показатели, необходимые для санитарно-бактериологической оценки объектов окружающей среды.
Учебно-целевые задачи:
Знать:
1. Природные микробиоценозы. Экологические связи в микробиоценозах.
2. Экологические среды микробов: микрофлора почвы, воды, воздуха, пищевых продуктов, бытовых и производственных объектов и ее роль в распространении инфекционных болезней.
3. Принципы санитарно-микробиологических исследований. Индикация патогенных микробов в объектах окружающей среды, косвенные методы: определение ОМЧ и санитарно-показательных микроорганизмов: бактерий группы кишечной палочки (БГКП), клостридий, стрептококков, стафилококков.
Уметь:
1. Проводить оценку санитарно-бактериологического состояния воздуха, воды, почвы, пищевых продуктов и смывов по микробиологическим тестам.
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
Санитарно-бактериологическая оценка объектов окружающей среды (ООС).
Санитарно-микробиологическое состояние почвыоценивается на основании сопоставления количества термофильных бактерий и бактерий – показателей фекального загрязнения. Почвы с преобладанием санитарно-показательных бактерий расцениваются как санитарно-неблагополучные, загрязненные фекалиями человека и животных. Присутствие в почве E.coli и E.faecalis указывает на свежее, а Clostridium perfringens – на давнее фекальное загрязнение. Более точная оценка проводится с помощью определения коли-индекса – количество БГКП, или т.н.колиформных бактерий,обнаруженных в 1 г почвы; перфрингенс-титра– масса почвы ( в граммах), в которой обнаружена 1 микробная клетка Clostridium perfringens; общей численности сапрофитных, термофильных и нитрифицирующих бактерий в 1 г почвы.
Санитарно-микробиологическое состояние водыоценивается по: 1). микробному числу– количеству мезофильных хемоорганотрофных бактерий в 1 мл воды; 2). коли-титру – наименьшему объему воды (мл), в котором обнаруживаются БГКП; 3). коли-индексу- количеству БГКП в 1 л воды; 4). Наличию спор сульфитредуцирующих бактерий и цист лямблий.
Санитарно-микробиологическое состояние воздухазакрытых помещений оценивают по: 1).микробному числу –количесву колонеобразующих единиц (КОЕ), обнаруживаемых в 1 м3 воздуха; 2).наличию санитарно-показательных бактерий – представителей микрофлоры дыхательных путей (золотистый стафилококк, гемолитический стрептококк).
Санитарно-микробиологическая оценка пищевых продуктоввключает определение 1). микробного числа и 2).санитарно-показательных микроорганизмов (БГКП); 3).патогенных возбудителей.
Микрофлора воздуха.Нормативы.
Чистый воздух зимой: ОМЧ не более 4500, гемолитических стрептококков – до 35;
Грязный воздух зимой: ОМЧ более 7000, гемолитических стрептококков – более 70.
Нормативные показатели микробной обсемененности воздуха в помещениях больницы
| Операционные | ОМЧ | Золотистый стафилококк (в 250 л) |
| до начала работы | не более 500 | не допускается |
| во время работы | не более 1000 | не допускается |
| родильные комнаты | не более 1000 | не допускается |
| палаты для недоношенных детей | не более 750 | не допускается |
Санитарно-бактериологическое исследование воздуха проводится седиментационным и аспирационным методами. Седиментационный метод по Коху заключается в том, что чашки Петри со средой оставляют открытыми на 5-10 минут на общую обсемененность и не менее 40 минут на обсемененность патогенной кокковой микрофлорой. Засеянные чашки инкубируют 24 часа в термостате и столько же при комнатной температуре. Количество выросших колоний соответствует степени загрязненности воздуха. На площадь 100 кв.см в течение 5 минет оседает столько бактерий, сколько их содержится в 10 л воздуха.
Аспирационный метод - более точный количественный метод определения микробного числа воздуха. Посев воздуха осуществляется с помощью аппарата Кротова или других современных аспираторов. Аспиратор устроен таким образом, что воздух с заданной скоростью просасывается через узкую щель пластины, закрывающей чашку Петри с питательным агаром. При этом частицы аэрозоля с содержащимися на них микроорганизмами равномерно фиксируются на всей поверхности среды благодаря постоянному вращению чашки под входной щелью.
Микрофлора воды.
Микробиологические и паразитологические показатели для питьевой воды
| Показатели | Единицы измерения | Нормативы |
| Термотолерантные колиформные бактерии (440С) | Число бактерий в 100 мл | Отсутствие |
| Общие колиформные бактерии (370С) | Число бактерий в 100 мл | Отсутствие |
| Общее микробное число | Число образующих колонии бактерий в 1 мл | Не более 50 |
| Коли-фаги | Число бляшкообразующих единиц (БОЕ) | Отсутствие |
| Споры сульфитредуцирующих клостридий | В 100 мл число спор в 20 мл | Отсутствие |
| Цисты лямблий | Число цист в 50 мл | Отсутствие |
Метод мембранных фильтров.
Мембранный фильтр помещают в воронку Зейтца, вмонтированную в колбу Бунзена, которая присоединяется к вакуумному насосу. Воду фильтруют в объеме 300 мл. Затем фильтры помещают на поверхность среды Эндо в чашки Петри и после инкубации при 370С в течение суток подсчитывают количесиво выросших колоний, типичных для БГКП.
Из 2-3 колоний красного цвета готовят мазки, окрашивают по Граму и ставят оксидазный тест, позволяющий дифференцировать бактерии родов Escherichia, Citrobacter, Enterobacter от грамотрицательных бактерий семейства Pseudomonadaceae и других оксидазоположительных бактерий, обитающих в воде. Для этого фильтр с выросшими на нем колониями бактерий переносят пинцетом, не переворачивая, на кружок фильтровальной бумаги, смоченной диметил-п-фенилендиамином. При наличии оксидазы индикатор окрашивает колонию в синий цвет. 2-3 колонии, не изменившие первоначальную окраску, засевают в полужидкую среду с 0,5% раствором глюкозы. Посевы инкубируют в течение суток при 370С. При наличии газообразования подсчитывают число красных колоний на фильтре и определяют коли-индекс.
Метод бродильной пробы.
1-й день. Воду в объеме 100 мл берут 3 пробы, 10 мл (3 пробы) засевают соответственно на 10 мл и 1 мл концентрированной среды ГПС (глюкозопептонная среда) или ЛПС (лактозопептонная среда). 1 мл воды (3 пробы) засевают на 10 мл разведенной среды ГПС с «поплавками». Посевы инкубируют при 370С 24 часа.
2-й день. Из всех объемов воды, независимо от результатов (кислота – газ), делают пересев на две чашки со средой Эндо (одна – с добавлением раствора основного фуксина или раствора разоловой кислоты, другая – с добавлением молока или желатина – для обнаружения протеолиза. Посевы инкубируют при 370 С.
3-й день. С чашек из каждого засеянного объема отбирают 2-3 лактозоположительные, протеолизоотрицательные, оксидазоотрицательные, грам-отрицательные палочки и отвивают на полужидкий агар с глюкозой и индикатором Андреде или бромтимоловым синим (укол в столбик). Посевы инкубируют 20 часов при 370С.
4-й день. Производят учет результатов. Определяют, какой объем воды на полужидком агаре с глюкозой дает образование кислоты и газа, и делают расчет коли-титра и индекса по таблице ГОСТа 48963-73.
Микробное число определяют при посеве 1мл исследуемой воды. Оксидаз ный тест позволяет отбросить оксидазоположительные колонии (псевдомонады, аэромонады, вибрионы и др.). Микроскопия мазков из колоний позволяет исключить грамположительиую споровую флору и шаровидные бактерии. Окисление глюкозы, лактозы до кислоты и газа при 37°С подтверждает принадлежность бактерий к кишечной группе.