ПРИБОР ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ДЕФОРМИРУЕМОСТИ

ЭРИТРОЦИТОВ АВТОМАТИЧЕСКИЙ

ИДА-4

ИНСТРУКЦИЯ ПО ЭКСПЛУАТАЦИИ

 

Содержание

 

1. Подготовка прибора к работе

2. Приготовление рабочей суспензии

3. Проведение измерений

4. Вычисление индекса ригидности

5. Завершение работы

 

Подготовка прибора к работе

 

Укрепить кронштейн с затвором на высоте 10-20 см. над поверхностью рабочего стола на каком-нибудь штативе за стержень.

Установить в кронштейн, укрепленный на стержне, нижнюю часть резервуара, заполнить ее при закрытом затворе физиологическим раствором, положить сверху (на поверхность жидкости) мембранный фильтр (мембранный фильтр выглядит как тонкая прозрачная пленка, которую пинцетом нужно снять с защитной голубой бумажки) и навинтить верхнюю часть резервуара до упора. При этом необходимо следить, чтобы под фильтром не оставалось пузырьков воздуха. Под резервуаром установить ёмкость для сбора вытекающей жидкости, например чашку Петри.

Прибор готов к измерениям.

 

 

Приготовление рабочей суспензии

 

Суспензию эритроцитов для работы на приборе ИДА-4 можно готовить из цельной крови или из отмытых от плазмы эритроцитов. В первом случае необходимо иметь не менее 150 мкл капиллярной или венозной крови, взятой на гепарине, ЭДТА или цитратном растворе. Непосредственно перед измерением кровь разбавляют ресуспендирующим раствором. Если используются фильтры F-3-17 (3-средний диаметр пор, 17-толщина пленки, измеренные в мкм) то гематокрит измеряемой суспензии эритроцитов не должен превышать 0,1%. Если в качестве консерванта использовались цитрат или ЭДТА, то ресуспендирующий раствор не должен содержать кальция (во избежание образования сгустков). Измерения следует проводить не позднее, чем через час после приготовления суспензии. В случае работы с отмытыми клетками целесообразно, чтобы исходная суспензия имела гематокрит 40-70% и находилась в холодильнике или при комнатной температуре не более 4-х часов. Соответствующая ресусперндирующая среда должна содержать глюкозу и альбумин. Ресуспендирующая среда для отмытых эритроцитов или крови, взятой на гепарине может содержать также кальций.

Непосредственно перед измерением исходную суспензию отмытых эритроцитов разбавляют ресуспендирующей средой (можно без альбумина и глюкозы) до гематокрита не превышающего 0,1%.

В качестве примера приведен состав ресуспендирующей среды, забуференной HEPES-ом:

 

NaCl - 145 мМ - 8480 мг/л;

KCl - 5 мМ - 372 мг/л;

HEPES - 5 мМ - 1190 мг/л;

CaCl₂ 2H₂O - 50 мг/л;

Альбумин сывороточный - 5000 мг/л;

Глюкоза - 1000 мг/л;

pH = 7,4.

 

Pекомендуется перед проведением измерений профильтровать ресуспендирующий раствор через фильтр с порами 0,2 мкм для удаления взвешенных частиц (пыль, бактерии), влияющих на измерения. Следует иметь в виду, что стерильность раствора не гарантирует отсутствие посторонних частиц на результаты измерений.

 

Проведение измерений

 

При закрытом затворе и установленном фильтре до верху заполнить кювету верхнего резервуара ресуспендирующим раствором (вровень с краями кюветы).

Установить датчик на резервуар, надев его до упора. Убедившись, что на табло блока регистрации установились нули («00.00»), а знак «точка» между нулями мигает.

Открыть затвор. При этом цифровые показания на табло должны изменяться в сторону увеличения.

После остановки отсчета времени на табло (показания более не меняются) закрыть затвор и занести показание в рабочий журнал, обозначив эту величину как время протекания 250 мкл ресуспендирующего раствора через фильтр - t_b.

Снять датчик (фильтр не снимать!!!), снова залить ресуспендирующий раствор в резервуар и повторить измерение t_b (время протекания буфера). Измерение t_b с одним фильтром следует проводить не менее 4-х раз.

Удалить из верхней части резервуара ресуспендирующий раствор (фильтр не снимать!!!). Заполнить кювету верхней части резервуара (точно также, как и раствор) суспензией эритроцитов.

Установить датчик и измерить время протекания через тот же фильтр 250 мкл суспензии – обозначив его в журнале, как t_s (время протекания суспензии).

Отвинтить верхнюю часть резервуара, тщательно промыть все детали, контактирующие с суспензией, под струей воды. Стряхнуть воду и собрать блок фильтрации с новым фильтром.

Прибор готов к новому измерению.

Для каждой пробы крови (эритроцитов) измерение t_s желательно проводить не менее 3-х раз (каждый раз устанавливая новый фильтр).