Определение массовой доли белковых веществ

Полумикрометодом

 

Метод основан на окислении органического вещества при сжигании его в концентрированной серной кислоте в присутствии катализатора, отгонке образующегося аммиака паром, улавливании его раствором серной кислоты и определении содержания азота методом обратного титрования.

Белковые вещества определяют, умножая количество общего азота на коэффициент 6,25.

Оборудование и реактивы: весы аналитические класса 2 с пределами измерения от 0 до 200 г; электроплитка бытовая или газовые горелки; холодильник шариковый; воронка капельная; бюретка вместимостью 50 см3 с делениями на 0,1 см3; каплеуловитель; колбы для сжигания, вместимостью 100 см3; колба мерная вместимостью 100 см3; колбы плоскодонные или круглодонные вместимостью от 500 до 700 см3; колбы плоскодонные вместимостью от 250 до 300 см3; капельница; вода дистиллированная; кислота серная концентрированная и раствор 0,01 моль/ дм3 (0,02 н); натрия гидроксид, раствор 330 г/ дм3 (33 %-ный) прокипяченный и раствор 0,02 моль/ дм3 (0,02 н); медь сернокислая 5-водная; калий сернокислый; метиловый красный, раствор 0,2 г/ дм3 (0,02 %-ный); растворяют 0,02 г метилового красного в 100 см3 спирта 600 г/ дм3 (60 %-ного); индикатор смешанный (Таширо).

Проведение анализа. Испытаний. Навеску исследуемого продукта массой от 0,2-0,3 г (при исследовании продуктов с повышенным содержанием воды навеску увеличивают до 3 г, жидкой навески берут 5 г) взвешивают с абсолютной погрешностью не более 0,0005 г в закрытую с одной стороны трубочку из фильтровальной бумаги, помещают в колбу для сжигания (колбу Кьельдаля) вместимостью 100 см3, добавляют несколько кристаллов медного купороса и приливают от 10 до 20 см3 концентрированной серной кислоты плотностью 1840

кг/ м3.

Затем колбу с содержимым осторожно нагревают в вытяжном шкафу, не допуская разбрызгивания жидкости. Когда содержимое колбы станет однородным, прекращают нагревание, дают остыть, после чего добавляют 0,5 г сернокислого калия и продолжают нагревание до тех пор, пока жидкость в колбе не станет прозрачной, зеленовато-голубой окраски без бурого оттенка. Внутренние стенки колбы должны быть совершенно чистыми. Это достигается осторожным взбалтыванием содержимого колбы для смывания со стенок темных обугленных частиц пробы.

По окончании сжигания содержимое колбы охлаждают и осторожно количественно переносят в мерную колбу вместимостью 100 см3. Из полученного раствора отбирают пипеткой 10 см3 жидкости и через воронку вносят в колбу прибора для отгонки аммиака, смывая остаток с воронки дистиллированной водой.

Отгонку аммиака водяным паром ведут в приборе, приведенном на рис. 2.2.

Рисунок 3.2. Прибор для отгонки: 1- парообразователь; 2 - предохранительный клапан; 3 – воронка; 4 – колба-смеситель; 5 – холодильник; 6 – колба-приемник.

 

Приемником служит коническая колба 6, в которую наливают из бюретки 25-30 см3 раствора серной кислоты 0,01 моль/ дм3 и опускают в нее конец трубки холодильника 5. Затем закрывают нижнее отверстие предохранительного сосуда 2. Через воронку 3 наливают в колбу-смеситель 4 5-6 см3 раствора гидроксида натрия 330 г/ дм3; воронку 3 заменяют стеклянной палочкой или применяют зажим Мора и затем пускают пар.

Отгонку с водяным паром продолжают до тех пор, пока в приемную колбу не отгонится от 50 до 60 см3 жидкости. По окончании отгонки конец холодильника обмывают дистиллированной водой, собирают воду в приемник и титруют избыток серной кислоты раствором 0,02 моль/ дм3 гидроксида натрия в присутствии индикатора.

Массовую долю общего азота в процентах вычисляют по формуле:

 

, (3.4)

где - объем раствора гидроксида натрия 0,02 моль/ дм3, пошедший на титрование серной кислоты в контрольном анализе, см3; - объем раствора гидроксида натрия 0,02 моль/ дм3, пошедший на титрование серной кислоты в рабочем анализе, см3; - коэффициент пересчета на точный раствор гидроксида натрия, 0,02 моль/ дм3, г; 0,0028 - количество азота эквивалентное 1 см3 гидроксида натрия 0,02 моль/ дм3, г; - навеска исследуемой пробы, г; 6,25 – коэффициент пересчета азота на белковые вещества; - объем, в котором растворена сожженная навеска, см3; - объем раствора, взятый для отгонки, см3.

Вычисление проводят до второго десятичного знака.