Оформление результатов работы

 

Результаты ра­боты заносят в табл. 6.

 

Таблица 6 – Высаливание белков

Название белка	Используемая соль	Степень Насыщения	Образование осадка
Глобулин
Альбумин

Контрольные вопросы

Каким образом можно разделить яичный альбумин и глобулин?

 

СЛОЖНЫЕ БЕЛКИ

Лабораторная работа 20. Гидролиз нуклеопротеидов дрожжей

Сложными белками называются белки, которые кроме белковой части содержат небелковый компонент, называемый простетической группой. В зависимости от химической при­роды простетической группы сложные белки делятся на нуклеопротеиды, хромопротеиды, фосфопротеиды, глюкопротеиды, липопротеиды и металлопротеиды.

Нуклеопротеиды представляют собой сложные белки, со­стоящие из простого белка и небелковой части – нуклеино­вых кислот. Нуклеопротеиды являются необходимой состав­ной частью клеток тканей, растений, микробов. Они обнару­живаются как в ядре, так и в цитоплазме.

 

1 Цель работы –изучить химический состав сложных белков – нуклеопротеидов

 

Для изучения химического состава нуклеопротеидов про­водят гидролиз дрожжей, которые берут в качестве источни­ка богатого нуклеопротеидами. При проведении частичного гидролиза нуклеопротеиды распадаются на белки, преиму­щественно основного характера (протамины и гистоны), и нуклеиновые кислоты. При более полном гидролизе белки и нуклеиновые кислоты распадаются на свои основные компо­ненты. Это можно представить в виде следующей схемы:

 

Нуклеопротеиды

 

Белок Нуклеиновые кислоты

(протамин или гистон) (полинуклеотиды)

 

Полипетиды Мононуклеотиды

 

Пуриновые или Фосфорная

пиримидиновые основания кислота

 

Рибоза или дезоксирибоза

 

Приборы и материалы

Песчаная баня

Электроплитка

Фильтр

Дрожжи

Серная кислота 10 %

Гидроксид натрия 10 %

Гидроксид натрия 30 %

Сульфат меди 1%

Сульфат меди 7 %

Молибденовый реактив

Описание работы

В колбу помещают 1 г дрожжей, приливают 8 мл 10 % серной кислоты, закрывают пробкой, в которую вставлена в качестве холодильника трубка длиной 25 – 30 см, взбалты­вают и закрепляют в штативе под углом 45°.

Гидролиз проводят при нагревании около часа, считая от момента закипания. После окончания гидролиза жидкость охлаждают и фильтруют через складчатый фильтр. С фильт­ратом проводят следующие реакции.

1. Биуретовая реакция на полипептиды.

К пяти каплям гидролизата добавляют 10 капель 10 % раствора NaOH и 1 – 2 капли 1 % раствора сернокислой меди до появления сине-фиолетового окрашивания, что сви­детельствует о присутствии в пробе полипептидов.

2. Проба на пуриновые основания.

К десяти каплям гидролизата прибавляют одну каплю концентриро­ванного раствора аммиака для нейтрализации и пять капель 1 % раствора азотнокислого серебра. Постепенно образу­ется осадок серебряных соединений пуриновых оснований.

3. Качественная реакция на углевод (рибозу и дезоксирибозу).

Качественные реакции основаны на способности моносахаридов, имеющих свободный гликозидный гидроксил, восстанавливать металлы (медь, висмут, железо) в щелочной среде. При этом металлы восстанавливаются из окисной формы в закисную или (в случае закиси) до свободного состояния; сахара же дают различные продукты окисления.

Проба Троммера заключается в восстановлении гидроксида меди (II) в гидрооксид меди (I) в щелочной среде под влиянием рибозы и дезоксирибозы, присутствующих в гидролизате дрожжей:

 

CuSO₄ + 2NaOH Cu(OH)₂ + Na₂SO₄;

Рибоза рибоновая кислота + 2CuOH

Cu₂O + H₂O

К пяти каплям гидролизата добавляют пять капель 30 % гидроксида натрия и несколько капель 7 % рас­твора сульфата меди до появления неисчезающей мути гидроксида меди. При нагревании до кипения выпадает желтый осадок гидрата оксида меди (II) и красный осадок оксида меди (I).

4. Молибденовая проба на фосфорную кис­лоту. К пяти каплям гидролизата добавляют десять капель молибденового реактива, представляющего собой раствор молибденовокнелого аммония в азотной кислоте, и кипятят. При охлаждении пробирки под струей холодной водопровод­ной воды выпадает кристаллический осадок лимонно-желтого цвета, обусловленный образованием фосфорно-молибденово-кислого аммония.