Выращивание мицелия в жидкой среде

Выращивание мицелия в жидкой среде (питательном растворе), способом, позволяющим избежать заражения в 99 % случаях.
В любой аптеке покупаем любое лекарство для капельницы. Лекарство продается в 400 мл и 200 мл стеклянных бутылочках с резиновой пробкой.
Далее, выламываем предохранительный, алюминиевый кружок, находящейся на самом верху пробки, но НЕ удаляем алюминиевый ободок, который удерживает саму пробку.
Затем с помощью двух иголок и одного шприца (желательно большого объема), выкачиваем содержимое бутылочки. Пользоваться удобнее именно двумя иголками, и не высасывать жидкость из бутылочки, а наоборот, заполнять бутылочку воздухом. В результате избыточного давления, жидкость полностью удаляется из бутылочки в течении нескольких минут.
Естественно, чтобы жидкость вытекала, бутылку нужно перевернуть вверх ногами.
После того, как вся жидкость удалена из бутылки. Закачиваем в бутылку, примерно 100 мл чистой воды и энергично трясем. Это делается для того, чтобы промыть бутылочку и окончательно избавиться от остатков лекарства. Проделать эту процедуру лучше 2-3 раза.
Теперь мы готовим питательный раствор. Раствор можно приготовить и из меда, но, на мой взгляд, удобнее использовать фруктозу. Во-первых, проще контролировать концентрацию раствора, отмеряя нужное кол-во вещества, во-вторых, раствор абсолютно не имеет цвета, (что облегчает обнаружение мицелия :) ), к тому же, фруктоза продается везде и по своему составу, она совершенно одинаковая, а также, фруктоза может храниться довольно длительный промежуток времени, без видимых изменений.
Для приготовления раствора необходимо полностью растворить фруктозу в воде. Рекомендуемая концентрация 2 грамма фруктозы, на 100 мл воды. Повышенные концентрации фруктозы в растворе, приводят к образованию более «жидкого» мицелия, то есть при приготовлении 4 % раствора фруктозы, мицелий, даже через длительный промежуток времени, будет легко засасываться в шприц через иглу. А при пониженных концентрациях, например, при приготовлении 1 % раствора фруктозы, мицелий, через некоторое время, будет образовывать довольно плотные сгустки, которые очень трудно втягиваются через иглу, но зато в таком виде, мицелий дольше хранится.
Раствора, следует приготовить около 300 мл (если используется бутылка емкостью 400 мл). Если используется бутылка меньшего объема, то раствора следует приготовить примерно на 2/3 от объема бутылки. Не следует заполнять бутылочку раствором «под завязку», так как при дальнейшей стерилизации, в результате нагревания, алюминиевый ободок который удерживает пробку, может не выдержать. Далее, закачиваем раствор в бутылочку. Для этого также, лучше использовать две иглы и один шприц. Вторая игла, позволит воздуху выходить из бутылки, не образовывая избыточного давления. После того, как мы залили раствор в бутылку, ее следует простерилизовать.
Стерилизовать бутылочку, можно как в кастрюле, так и в скороварке. Единственное условие, стерилизацию следует проводить не более 30 мнут, иначе может произойти карамелизация фруктозы, и на ней ничего не вырастет.
После стерилизации, даем бутылочке остыть, до комнатной температуры. И только после полного остывания, производим инокуляцию споровой взвесью. Затем помещаем бутылочку в теплое (~ 25C), темное место и ждем результатов. По прошествии 24-48
часов, обычно начинается бурное разрастание мицелия. Но в некоторых случаях, первые признаки разрастания мицелия проявляются лишь на 5-7 день. В любом случае, неделя контрольный срок, если за это время ничего не произошло, и раствор по-прежнему, абсолютно прозрачный, стоит все переделать заново.
Главное отличие этого метода в том, что благодаря использованию герметично закрытой бутылки, вероятность заражения питательного раствора посторонними микроорганизмами сводится к нулю.
Хранить мицелий, выращенный таким способом, следует в холодильнике. Для длительного хранения этот метод не подходит. Максимальный, гарантированный срок хранения: 2 месяца.

Клонирование грибов

Слово "клонирование" ассоциируется для многих со знаменитой овцой Долли, выращенной из клеток другой овцы. Воображение рисует тут же сложную аппаратуру, пробирки с мутной жидкостью и пульсирующие в них части чего-то живого, лаборатории в которых куют жуткие планы потомки Франкенштейна.
На самом же деле клонирование является ничем иным, как изъятием клеток из одного живого организма и выведением из них нового. Этот новый организм будет являться генетически идентичной копией оригинала - позже рождённый близнец, так сказать. Как бы сложен и сомнителен с этической точки зрения не был данный процесс, в случае грибов клонирование является обычным и естественным явлением. Многие наверняка сталкивались с ним: выброшенные в компост части собственноручно собранных грибов, непригодные к готовке, неожиданно прорастали новыми грибами.
Клонирование, о котором пойдёт речь ниже, является ничем иным, как таким же процессом, взятым под контроль.
Итак, потребуется: стерильные чашки Петри с агаром и, собственно грибы (одного будет достаточно). Естественно, не стоит для клонирования оставлять какие-нибудь опята-замухрышки, а наоборот именно те, которые обладают важными для вас в данном случае качествами. Обычно клонирование проходит успешно, даже когда используются грибы, пролежавшие пару-тройку дней в холодильнике, но лучше всего, конечно, пользоваться свежим материалом.
Едем дальше. Как только подготовлена "лаборатория" (герметически закрывающийся ящик со стеклом в крышке, лампой накаливания и простой лампой, а кроме того с закрывающимися отверстиями для рук на передней стенке) и руки тщательно дезинфицированы, гриб помещается в ящик. Именно в этой последовательности, а не наоборот!
Затем гриб разрывается на две части. При это нужно следить за тем, чтобы не прикасаться ко внутренней поверхности или её краям руками (даже если вы очень постарались при дезинфекции, на руках могут остаться не очень дружелюбные бактерии, которые запросто могут все ваши попытки клонировать что-либо свести на нет). Не советую резать гриб: поскольку наружная поверхность всякого гриба всегда более или менее сильно загрязнена, бактерии могут с лезвием ножа попасть и вглубь грибного тела.
Острым, стерилизованным на огне и остуженным на воздухе скальпелем вырезаем как можно маленький кусочек ткани из середины грибного тела (вообще-то не имеет никакого значения, откуда именно вырезается этот самый кусочек - из шляпки или ножки - потому вырежем оттуда, где гриб наиболее толст). Очень важно полностью извлечь ткань изнутри гриба.
Некоторые грибы обладают волокнистой структурой и потому с трудом поддаются разрезанию. Проще всего в таких случаях сделать сначала два параллельных разреза перпендикулярно ножке. После этого маленькие части ткани без особого труда извлекаются наружу.
Эти частички помещаем по одной в чистые чашки Петри с агаром.
Вот и всё. Через три-пять дней грибные нити станут видимыми, а очень скоро из них разовьётся полноценный мицелий, который будет расти точно так же, как и обычный, полученный из спор.
Не стану повторять, что всё, связанное с инокуляцией, должно проходить в стерильной среде. Всегда держите это в голове и одной проблемой станет меньше. :)

Материалы:

«Культивирование грибов на кухне и в лаборатории.» http://www.geocities.com/dms27.rm/kultivir.htm
«Выращивание грибов. Советы начинающим.» http://entheogen.ru/shrooms/teks/mw_gs.shtml
«Выращивание Psilocybe Cubensis по технологии Psilocybe Fanaticus (PF TEK).» http://entheogen.ru/shrooms/teks/pf_rus_tek.shtml
«Получение спорового шприца из отпечатка.» http://rotten.splane.ru/syringe.htm
«Выращивание мицелия в жидкой среде.» http://entheogen.ru/shrooms/teks/liquid_anticont.shtml
«Клонирование грибов.» http://rotten.splane.ru/clone.htm

  • PsilocybeКонец формы