Посев и регистрация результатов
Стерильную среду предварительно разливают в пробирки (колбы)
и стерилизуют. В пробирки (колбы) следует наливать одинаковый объем среды. Посев проводят из каждого разведения или из 4…5 последних, причем каждое разведение высевают в 3…5 повторностях (параллельных пробирках). Количество посевного материала везде одинаково и, как правило, составляет 1 мл. Засеянные пробирки помещают в термостат. Время инкубации колеблется от 2 до 15 суток и зависит от скорости роста микроорганизмов, численность которых определяют. После инкубации регистрируют рост микроорганизмов, используя различные показатели: помутнение среды, образование пленки, осадка, газа или накопление в среде определенных продуктов метаболизма.
Наиболее вероятное число микроорганизмов в единице объема рассчитывают по таблице Мак – Креди (таблица 1), разработанной на основании методов вариационной статистики.
Таблица 1 –Наиболее вероятное количество клеток микроорганизмов в единице объема исходной суспензии (по Мак –Креди)
| Число-вая характе- ристика | Наиболее вероятное число микроорганизмов при засеве параллельных пробирок | Чис-ловая характе- ристика | Наиболее вероятное число микроорганизмов при засеве параллельных пробирок | ||||||
| 0,0 | 0,0 | 0,0 | 0,0 | ― | 1,6 | 1,1 | 0,8 | ||
| 0,5 | 0,3 | 0,2 | 0,2 | ― | ― | 1,4 | 1,0 | ||
| ― | ― | 0,5 | 0,4 | ― | ― | 1,6 | ― | ||
| ― | ― | 0,7 | ― | ― | ― | 1,4 | 1,1 | ||
| 0,5 | 0,3 | 0,2 | 0,2 | ― | ― | 1,7 | ― | ||
| 0,9 | 0,6 | 0,5 | 0,4 | 2,5 | 0,9 | 0,6 | 0,5 | ||
| ― | ― | 0,7 | 0,6 | 5,0 | 1,4 | 0,9 | 0,7 | ||
| ― | ― | 0,9 | ― | ― | 2,0 | 1,2 | 0,9 | ||
| 0,9 | 0,6 | 0,5 | 0,4 | ― | ― | 1,6 | 1,2 | ||
| ― | ― | 0,7 | 0,6 | 6,0 | 1,5 | 0,9 | 0,7 | ||
| ― | ― | 0,9 | ― | 13,00 | 2,0 | 1,3 | 0,9 | ||
| ― | ― | 0,7 | 0,6 | 20,0 | 3,0 | 1,6 | 1,2 | ||
| ― | ― | 0,9 | ― | ― | ― | 2,0 | ― | ||
| ― | ― | 0,9 | ― | 25,0 | 2,0 | 1,3 | 0,9 | ||
| ― | ― | 1,2 | ― | 70,0 | 3,0 | 1,6 | 1,2 | ||
| 0,6 | 0,4 | 0,3 | 0,2 | 110,0 | 3,5 | 2,0 | 1,4 | ||
| 1,2 | 0,7 | 0,5 | 0,4 | ― | 4,0 | ― | ― | ||
| ― | 1,1 | 0,8 | 0,6 | ― | 3,0 | 1,7 | 1,2 | ||
| ― | ― | 1,0 | 0,8 | ― | 3,5 | 2,0 | 1,4 | ||
| 1,3 | 0,7 | 0,5 | 0,4 | ― | 4,0 | ― | ― | ||
| 2,0 | 1,1 | 0,8 | 0,6 | ― | ― | 2,0 | 1,4 |
Продолжение таблицы 1
| ― | ― | 1,1 | 0,8 | ― | ― | 3,0 | ― | ||
| ― | ― | 1,3 | ― | ― | 2,5 | 1,1 | 0,8 | ||
| 2,0 | 1,1 | 0,8 | 0,6 | ― | 4,0 | 1,6 | 1,1 | ||
| 3,0 | 1,5 | 1,1 | 0,8 | ― | 6,5 | 2,0 | 1,4 | ||
| ― | ― | 1,3 | 1,1 | ― | ― | 2,5 | ― | ||
| ― | ― | 1,6 | ― | ― | 4,5 | 1,6 | 1,1 | ||
| ― | 7,5 | 2,0 | 1,4 | ― | ― | 11,5 | 2,5 | ||
| ― | 11,5 | 3,0 | 1,7 | ― | ― | 16,5 | 3,0 | ||
| ― | 16,0 | 3,5 | 2,0 | ― | ― | 20,0 | 4,0 | ||
| ― | 9,5 | 2,0 | 1,4 | ― | ― | 30,0 | ― | ||
| ― | 15,0 | 3,0 | 1,7 | ― | ― | 35,0 | ― | ||
| ― | 20,0 | 3,5 | 2,0 | ― | ― | 25,0 | 3,5 | ||
| ― | 30,0 | ― | ― | ― | ― | 40,0 | 4,0 | ||
| ― | 25,0 | 3,0 | 1,7 | ― | ― | 70,0 | ― | ||
| ― | 45,0 | 3,5 | 2,0 | ― | ― | 140,0 | ― | ||
| ― | 110,0 | 4,0 | ― | ― | ― | 160,0 | ― | ||
| ― | 140,0 | 5,0 | ― | ― | ― | ― | 4,0 | ||
| ― | ― | 3,5 | 2,0 | ― | ― | ― | 5,0 | ||
| ― | ― | 4,5 | 2,5 | ― | ― | ― | 2,5 | ||
| ― | ― | ― | 2,5 | ― | ― | ― | 3,0 | ||
| ― | ― | 2,5 | 1,3 | ― | ― | ― | 4,0 | ||
| ― | ― | 3,5 | 1,7 | ― | ― | ― | 6,0 | ||
| ― | ― | 5,0 | 2,0 | ― | ― | ― | 7,5 | ||
| ― | ― | 7,0 | 2,5 | ― | ― | ― | 3,5 | ||
| ― | ― | 3,5 | 1,7 | ― | ― | ― | 4,5 | ||
| ― | ― | 5,5 | 2,0 | ― | ― | ― | 6,0 | ||
| ― | ― | 8,0 | 2,5 | ― | ― | ― | 8,5 | ||
| ― | ― | 11,0 | ― | ― | ― | ― | 5,0 | ||
| ― | ― | 14,0 | ― | ― | ― | ― | 7,0 | ||
| ― | ― | 6,0 | 2,0 | ― | ― | ― | 9,5 | ||
| ― | ― | 9,5 | 2,5 | ― | ― | ― | 12,0 | ||
| ― | ― | 13,0 | 3,0 | ― | ― | ― | 15,0 |
Продолжение таблицы 1
| ― | ― | 17,0 | ― | ― | ― | ― | 17,5 | ||
| ― | ― | 20,0 | ― | ― | ― | ― | 8,0 | ||
| ― | ― | 11,0 | ― | ― | ― | 35,0 | |||
| ― | ― | 14,0 | ― | ― | ― | 45,0 | |||
| ― | ― | 17,5 | ― | ― | ― | 25,0 | |||
| ― | ― | 20,0 | ― | ― | ― | 35,0 | |||
| ― | ― | 25,0 | ― | ― | ― | 60,0 | |||
| ― | ― | 13,0 | ― | ― | ― | 90,0 | |||
| ― | ― | 17,0 | ― | ― | ― | 100,0 | |||
| ― | ― | 25,0 | ― | ― | ― | 180,0 | |||
| ― | ― | 30,0 | ― | ― | ― | ― | ― |
Для этого первоначально составляют числовую характеристику, которая включает три цифры. Первая цифра слева показывает число пробирок в том последнем разведении, при высеве из которого во всех засеянных пробирках был отмечен рост. Две следующие цифры обозначают число пробирок, в которых отмечен рост микроорганизмов при высеве из двух последующих разведений. Затем по таблице 1 находят наиболее вероятное число микроорганизмов, соответствующее данному значению числовой характеристики. Количество микроорганизмов в 1 мл (1 г) исходного субстрата соответствует этому числу, умноженному на то разведение, которое было взято для получения первой цифры числовой характеристики.
Примеры расчета
Пример 1