Тема: Ифекционный ринотрахеит птиц
К числу малоизученных заболеваний, недавно появившихся на территории Украины, необходимо отнести пневмовирусную инфекцию птиц (синдром опухшей головы). Экономический ущерб от данной болезни связан не только с падежом и выбраковкой цыплят-бройлеров, но и недополучением инкубационного яйца. Кроме того, иммуносупрессия, вызываемая пневмовирусом, делает птицу чувствительной к инфекциям, в том числе вызванным условно-патогенной микрофлорой.
Определение заболевания.
Ринотрахеит индеек (РТИ) – высококонтагиозное заболевание, характеризующееся симптомами поражения верхних дыхательных путей, поражающее птицу всех возрастов. У утят и кур вспышка данного заболевания сопровождается опуханием головы. Ринотрахеит птиц, ранее именовавшийся ринотрахеитом индеек (TRT) в настоящее время чаще называется пневмовирусной инфекцией птиц. Пневмовирусные заболевания птиц – общее название двух, сходных по клиническим признакам, респираторных синдромов, которые наблюдаются у разных видов птицы: у индеек - ринотрахеит (Turkey Rhino Tracheitis – TRT) это воспаление носовых ходов, синусов и трахеи; у кур и цыплят - синдром опухшей головы (SHS –Swollen head syndrome).
Этиология. Заболевание вызывает РНК – содержащий вирус. Парамиксовирусы (от. Греч. Para – около и myxa – слизь) - группа вирусов, поражающая позвоночных животных. Возбудитель заболевания РНК-содержащий вирус семейства Paramyxoviride. Коллинз (1989) изучал антигенную связь трех вирусов ринотрахеита индейки. Считается, что эти типы антигенно аналогичны. Эти ученые предложили, чтобы вирус TRT был отнесен к роду Pneumovirus семейства Рaramyxoviridae. Птичьи пневмовирусы (APV, Вирус ринотрахеита Турции) и человеческие metapneumovirus (hMPV) - патогенны для птиц и людей и сопровождаются респираторными симптомами.
Морфология вируса.
Размер вирионов от 120 до 300 нм. Оболочка вирионов имеет выступы - нити длиной 8 нм и содержит АГ- компоненты. Внутренний компонент - нуклеокапсид (G-АГ) представляет собой длинную заостренную пуговку диаметром 13 нм. Структурные единицы - протеины этой трубки (капсомеры) расположены по спирали вокруг центральной оси, внутри них находится РНК. В составе вируса обнаружены 3 основных и 5 минорных белковых компонентов. К основным относятся гемагглютинин, белок внутренней оболочки и белок РНП. Нейраминидаза - один из минорных компонентов. Кроме этого, в вирионах вируса обнаружена эндорибонуклеаза, а в вирусе, полученном из хронически инфицированных клеток Z РНК- зависимая ДНК-полимераза (обратная транскриптаза). Возможно, имеется связь между наличием обратной транскриптазы и способностью вируса вызывать хронически протекающую инфекцию. Очищенный нуклеокапсид не обладает РНК-полимеразной активностью, так как не содержит необходимых белков, либо в процессе приготовления препарата нуклеокапсидов инактивируется сам энзим.
Антигенная структура.
Вирус содержит гемагглютинин и нейраминидазу, М-, F-белки и S (РНП) - антигены, различающиеся по локализации в вирионе, иммуногенности и АГ-активности. Каждый вирион содержит определенное число идентичных молекул HN, каждая молекула HN содержит 2 домена: НА и NA.
Различия в вирулентности штаммов вируса связаны с изменением в структуре HN-гена, кодирующего ГА-нейраминидазу. Большинство аминокислотных замен располагается в четырех участках N-конца HN-белка.
Антигенная активность.
Гликопротеидный ГА-нейраминидазный комплекс вируса обладает выраженной антигенной и протективной активностью на индейках.
Антигенная вариабельность и родство.
Подавляющее большинство штаммов вируса ринотрахеита птиц антигены в иммунобиологическом отношении.
Устойчивость.
При 37°С эти изменения наступают через несколько часов и даже дней, при 20 и 8°С для утраты вирусом своей биологической активности нужны месяцы и даже годы. Вирус устойчив к низкой температуре, в замороженном состоянии активность его сохраняется более 2-х лет. Инфекционность, гемагглютинирующая активность и иммуногенность вируса разрушаются при 56°С в период 5 мин - 6 часов. Вирус устойчив к рН в диапазоне от 2 до 10, быстро разрушается при воздействии ультразвука. Растворы формалина (1-2%-ные), гидроксида натрия (1-2%-ные), мыльного крезола (1%-ный) и фенола (3-4%-ные) его быстро убивают.
Стабильность вируса в значительной мере зависит от среды, в которой он находится. Под воздействием дневного света инфекционность его снижается за 4 часа. ГА свойства сохраняются при более длительной инактивации, чем инфекционные. Установлено, что висцеротропные велогенные штаммы обладают термочувствительным, а лентогенные - термостабильным ГА, т.е. вирулентность штаммов прямо не связана с термостабильностью ГА.
Эпизоотологические данные. Заболеваемость колеблется от 10-ти до 75 %. Летальность – 3-7%. Вирус впервые был выделен в Южной Африке. Данное заболевание в последствии было названо ринотрахеитом Турции или TRT.
Заболевание зарегистрировано в Великобритании, Франции, Испании, Германии, Венгрии, Италии, Нидерландах, Тайване, Японии, Мексике, Центральной и Южной Америке.
В 1996 году данная болезнь индеек вспыхнула в Колорадо, и данный пневмовирус впоследствии был изолирован в Национальной Ветеринарной Лаборатории Услуг (NVSL) в Алесе, Iowa. В начале 1997 года присутствие данного вируса подтверждалось серологически в индейках Миннесоты.
Источник инфекции - больная птица. Вирус распространяется горизонтально. Заражение происходит при контакте больной птицы со здоровой, а также через инфицированную воду и пищевые отходы.
Особенно быстро инфекция распространяется аэрогенно. Больная птица через 2 дня после заражения и за день до появления клинических признаков болезни выделяет вирус с выдыхаемым воздухом, во время кашля.
Распространение инфекции на большие расстояния связано с перевозкой птицы, тушек вынужденно убитой птицы, инфицированной тары, яиц из неблагополучного хозяйства, а также необезвреженной одежды, обуви. В яйцах, собранных от больной птицы, зародыш при инкубации погибает от вируса. При довольно плотной посадке птиц на птицефабриках вирус распространяется довольно быстро.
Патогенез Вирус проникая в организм, размножается в клетках респираторной системы, разрыхляет клетки кровеносных сосудов, нарушает их порозность и вызывает воспалительно-некротические процессы. Через 24 – 36 часов вирус локализуется в трахеи и легких, вызывая тяжелые некрозо-дистрофические процессы.
Вирус также можно обнаружить в паренхиматозных органах, костном и головном мозге, мышцах, трахеальной слизи, толстом и тонком кишечниках, содержится в различных выделениях. В период выраженной клинической картины болезни в изобилии выделяется во внешнюю среду с фекалиями, трахеальной слизью и выдыхаемым воздухом. Переболевшие птицы могут долго быть вирусоносителями.
Данный вирус обладает выраженным тропизмом к органам дыхания.
Клинические признаки и течение. Симптомы болезни довольно разнообразны. При легкой форме ринотрахеита птиц наблюдают угнетение, слабость, расстройство функции органов дыхания, тремор, опистотонус. Из полости клюва выделяется вначале катаральный, затем гнойный экссудат. Птица вытягивает шею вперед и делает зевательные движения, кашель можно услышать ночью. Цыплята собираются в кучки и долгое время так сидят. Такая клиника характерна для бройлеров до 20-дневного возраста. С 20-дневного возраста у цыпленка заметны увлажнение глаз и отек (опухание) инфраорбитальных синусов, ринит. При этом ярко выражена разница в упитанности больных и здоровых цыплят.
С возрастом симптоматика нарастает, у цыплят развивается конъюнктивит, слезотечение, кожа вокруг глаз воспаляется, наблюдаются мутные выделения из носовых отверстий, а позднее пенистые истечения из глаз, птицы испытывают зуд и трутся о клетку, пытаясь его уменьшить. Такие симптомы характерны для бройлеров 32-33-дневного возраста. Именно с этого возраста наблюдается резкое увеличение гибели больной птицы. В этот возрастной период у цыплят наряду с респираторным синдромом отмечаем развитие диареи, при этом каловые массы приобретают зеленовато-коричневый цвет. В этих случаях заболевание затягивается на несколько недель и при бактериологическом исследовании удается выделить только E.coli.
Из-за развившегося гнойного конъюнктивита, воспаления подглазничных синусов глазная щель у бройлеров резко сужена (“узкоглазая птица”). Как следствие проявления отека и воспаления соединительной ткани головы развивается синдром “опухшей головы”. Kроме того, у больной птицы отмечают нервные явления, проявляющиеся шаткой походкой. Tакая клиническая картина характерна для 39-41-дневной птицы. Довольно часто из-за сепсиca, вызываемого кишечной палочкой, регистрируется падеж птицы. У взрослого поголовья затяжные случаи болезни приводят к серьезным убыткам. С развитием эпизоотического процесса происходит изменение возрастной восприимчивости цыплят к пневмовирусной инфекции. Если в начале распространения инфекции клинические признаки у заболевшей птицы начинали проявляться с 30-дневного возраста, то в последующем они могут проявляться уже с 14-15-дневного возраста.
Патологоанатомические изменения. При вскрытии трупов павших цыплят отмечают следующие изменения:
1. Атрофия тимуса, бурсы, слепокишечных и пищеводных миндалин
2. Серозный отек подкожной клетчатки головы и век
3. Серозно-катаральный конъюнктивит, блефарит, ринит, трахеит
4. Гнойный отит
5. Изменение цвета костного мозга и жировые отложения в нем
6. Истощение, анемия, отставание в росте.
Диагностика.
Диагностика заболевания без лабораторных исследований затруднительна, так как патологоанатомических изменений не отмечается. Исследования парных сывороток и сравнительные исследования сывороток от больных и здоровых цыплят в ИФА, а также обнаружение генома вируса молекулярно-биологическими методами в патматериале, полученном от больных цыплят позволяют установить диагноз.
Компанией IDEXX Laboratories Inc. разработан набор для ИФА-диагностики одновременно А, В и С подтипов вируса, что имеет важное практическое значение, так как ныне доступные коммерческие наборы позволяют выявлять только антитела к подтипу вируса, антиген которого нанесен на планшет.
Также показаны новые достижения в ПЦР-диагностике пневмовирусной инфекции на основе применения F-теста, который обладал большей чувствительностью, чем существующий G-тест (M. Cecchinato, Италия; С. Naylor, Великобритания). Наилучшими полевыми пробами для вирусологических исследований считаются целая голова и шея птицы с трахеей. Пробы должны переводиться очень быстро – на льду или, в случае необходимости, в замороженном виде. Для молекулярных исследований используют пробы слизи из трахеи от больных птиц.
Для первичного выделения пМПВ из полевого материала, были успешно использованы эмбрионы, инокулированные в желточный мешок и трахеальная органная культура эмбрионов кур и индеек. Не зависимо от тест-системы, которая использовалась при выделении вируса, его идентификация может быть подтверждена электронной микроскопией, иммунопероксидазным и иммунофлюоресцентным методами. После выделения, вирус может быстро адаптирован к выращиванию на других клеточных культурах, включая фибробласты эмбрионов кур, культуру клеток печени эмбриона кур и клетки Vero.
Основная проблема, препятствующая попыткам выделить вирус из полевого материала, это очень короткое время нахождения вируса в организме птиц после первоначального заражения. В связи с этим, во многих странах мира в настоящее время разрабатывают и применяют методы диагностики пневмовируса птиц с помощью обратной транскрипции — полимеразной цепной реакции (ОТ-ПЦР) в различных модификациях с последующим рестрикционным анализом или секвенированием, а также дифференциацией с помощью типоспецифических праймеров. В ФГУ ВНИИЗЖ оптимизирована система обнаружения и штаммовой дифференциации пМПВ на основе ПЦР, которая позволяет изучать изоляты без их выделения на эмбрионах. При интерпретации результатов ELISA возникают разногласия, т.к. использование различных антигенов в различных наборах, обуславливает большую разницу в интенсивности взаимодействия гомологических и гетерологических антигенов и антител. Выделение пневмовируса птиц из полевых проб с использованием общепринятых методов является трудоемким и длительным процессом, кроме того, показано, что выделять вирус от цыплят сложнее, чем от индеек.
Сотрудниками ФГУ ВНИИЗЖ разработана нормативно-техническая документация на иммуноферментную тест-систему для выявления антител к пневмовирусу птиц (ТУ 9388-130-00495527-03). Кроме того, настоящее время во ВНИИЗЖ проходит лабораторные испытания экспериментальная инактивированная вакцина против пневмовирусной инфекции птиц. Диагноз ставится комплексно, проводят вирусологическое, бактериологическое и гистологическое исследование патологического материала. При бактериологическом исследовании из всех пораженных тканей выделяют патогенные штаммы E. coli, которая по видимому, играет важную роль в возникновении болезни. При вирусологическом исследовании выделяют также аденовирусы, вирусы ринотрахеита индеек, инфекционного бронхита, возбудителя инфекционной бурсальной болезни и др.
Диагноз считается установленным при выделении пневмовируса и его идентификации с применением РН, ELISA, ИФ.
Лечение не разработано.
Для профилактики вторичных бактериальных инфекций применяют антибиотики широкого спектра действия.
Иммунитет и специфическая профилактика.У переболевшей птицы возникает длительный иммунитет.
Специфическая профилактика пМПВ основана на применении живых и инактивированных вакцин. Вакцины против респираторных заболеваниях уже давно используются в современном птицеводстве, но профилактика не всегда обеспечивает 100% гарантию. Поэтому пМПВ представляет одну из главных проблем в промышленности птицеводства и требует в развитии новых подходов к разработке вакцин. Известно, что против европейских изолятов ( подтипов А и В) разработаны живые и инактивированные вакцины, а против американского подтипа С они не разработано и до сих пор Эффективность профилактики зависит от иммуногенной активности вакцины, метода введения, дозы, и реактивности организма. В этой связи выбор схемы вакцинации птиц должен основываться на серологических контролях пассивного иммунитета в цыплят и контроли эффективности проведения прививки. Для специфической профилактики пМПВ используют вирусные живые и инактивированные вакцины фирм Интервет, Пулвак, Мериал и другие.