Технология получения вирусных энтомопатогенных препаратов
Из всех энтомопатогенных препаратов вирусные обладают наиболее высокой специфичностью по отношению к насекомому-хозяину. Они поражают обычно не более одного вида. Их ярко выраженная видоспецифичность обусловливает практически полную безвредность вирусных препаратов для человека, флоры и фауны. Вирусы отличает высокая устойчивость к неблагоприятным воздействиям окружающей среды (температуре, влажности), они способны сохранять свою активность в течение 10—15 лет, находясь вне насекомого.
Заражение происходит при питании вредителя. Попавшие в кишечник тельца-включения при щелочных значениях рН разрушаются. Освобожденные вирионы проникают через стенку кишечника в восприимчивые клетки, в ядрах которых осуществляется репликация вирусов. Высвободившись, они заражают другие клетки, что в итоге приводит к гибели личинок насекомого.
Отличительной особенностью вирусов является то, что они могут размножаться только в живой ткани. Это создает определенные трудности в организации промышленного производства таких энтомопа-тогенов, так как технология размножения вирусов должна быть связана с использованием живых насекомых-хозяев. Последнее представляет собой достаточно трудоемкий процесс.
В СССР в 80-е гг. прошлого века осуществлялся выпуск трех вирусных энтомопатогенных препаратов: вирин-ЭКС (против капустной совки), ЭНШ (против непарного шелкопряда) и АББ (против американской белой бабочки).
Производство любого из вирусных препаратов начинают с разве-
деиия насекомого-хозяина на искусственных питательных средах, обеспечивающих их физиологически здоровое состояние. На определенной стадии развития (обычно на стадии гусеницы) насекомых заражают, добавляя вирусную суспензию к корму. При этом инокулят предварительно получают от нескольких больных личинок.
После заражения насекомых выдерживают в строго определенных условиях, обеспечивающих максимальное накопление вируса в их тканях. Через 7 — 9 сут собирают мертвые и отмирающие личинки, подсушивают их при 33 — 35 °С, измельчают механическим способом для вывода телец-включений из тканей. К полученной массе добавляют физиологический раствор или дистиллированную воду из расчета 1 мл на гусеницу, взвесь измельченных тканей фильтруют.
При производстве препарата вирии-ЭКС полиэдры осаждают из фильтрата центрифугированием. Осадок суспендируют в минимальном количестве дистиллированной воды и добавляют в него предварительно простерилизованный глицерин до титра 1 млрд полиэдров в 1 мл. Готовый препарат разливают во флаконы в количестве, соответствующем одной или нескольким гектариым нормам.
Данная технология позволяет увеличить количество полиэдров в 5 — 10 тыс. раз по сравнению с расходом инокулята. С одной гусеницы в среднем удается получить до 36 млрд полиэдров, что составляет около 30 % ее сухой массы.
При производстве препарата вирин-ЭНШ в фильтрат добавляют лактозу, а после перемешивания — ацетон в соотношении 4 : 1 объему суспензии. После отстаивания иадосадочиую жидкость сливают, а осадок подсушивают до полного удаления ацетона. При изготовлении готовой формы препарата в виде дуста сухой осадок смешивают с мелкодисперсным наполнителем — каолином или бентонитом — до получения титра 1 млрд полиэдров в 1 г. Масляную форму вирин-ЭНШ готовят путем диспергирования осадка в предварительно про-стерилизованном 50%-м растворе глицерина до титра 2 млрд полиэдров в 1 мл, потом стерильно добавляют равный объем солярового масла, перемешивают и разливают во флаконы.
Вирусные энтомопатогенные препараты применяют путем внесения полиэдров в плотные популяции насекомых с целью возникновения в них эпизоотии. Эффект может быть значительным, если энтомопато-гепный вирус отсутствует в популяции. Данный способ обработки предполагает внесение небольших количеств препарата.
В другом случае путем опрыскивания или опыления проводится массированная обработка растений на зараженных участках в период рождения личинок или на ранних стадиях их развития. Эффект достигается после внесения значительных количеств препарата в результате однократной или повторной обработки защищаемых растений.
Если требуется защита не от одного, а от нескольких вредителей, то действие вирусных энтомопатогенных препаратов сочетают с другими средствами борьбы.