ДНК и синтезирующие особый трансформирующий белок). Компетент-

Ность клетки определяется также факторами внешней среды. Этому мо-

Жет способствовать обработка клеток полиэтиленгликолем или хлори-

Дом кальция. После проникновения в клетку одна из нитей рекомби-

Нантной ДНК деградирует, а другая за счет рекомбинации с гомологич-

Ным участком реципиентной ДНК может включиться в хромосому или

Внехромосомную единицу. Трансформация является наиболее универ-

Сальным способом передачи генетической информации и имеет наи-

Большее значение для генетических технологий.

Конъюгация – один из способов обмена генетического материала, при

Котором происходит однонаправленный перенос генетической информа-

Ции от донора к реципиенту. Этот перенос находится под контролем осо-

Бых конъюгативных плазмид (фактор фертильности). Перенос информа-

Ции от донорской клетки в реципиентную осуществляется через специ-

Альные половые ворсинки (пили). Возможна передача информации и с

Помощью неконъюгативных плазмид при участии плазмид-помощниц.

Передача всего набора генов вируса или фага, приводящая к развитию

В клетке фаговых частиц, называется трансфекцией. Методика примени-

Тельно к бактериальным клеткам включает получение сферопластов, очи-

Стку инкубационной среды от нуклеаз и добавление очищенной фаговой

ДНК (присутствие протаминсульфата повышает эффективность транс-

Фекции). Методика применима к животным и растительным клеткам с

Участием специальных челночных вирусных векторов.

Скрининг и отбор рекомбинантных клеток

После переноса сконструированных ДНК, как правило, лишь небольшая

Часть реципиентных клеток приобретает необходимый ген. Поэтому очень

Важным этапом является идентификация клеток, несущих ген-мишень.

На первой стадии идентифицируют и отбирают клетки, несущие век-

Тор, на основе которого осуществлен перенос ДНК. Отбор проводят по

Генетическим маркерам, которыми помечен вектор. Главным образом

Маркерами являются гены устойчивости к антибиотикам. Поэтому отбор

Проводят высевом клеток на среды, содержащие конкретный антибиотик.

После высева на этих средах вырастают только клетки, в составе которых

Находится вектор с генами антибиотиковой устойчивости.

На второй стадии отбирают клетки, несущие вектор и ген-мишень. Для

этого используют две группы методов: 1) основанные на непосредствен-

Ном анализе ДНК клеток-реципиентов и 2) основанные на идентификации

Признака, кодируемого геном-мишенью. При использовании первой груп-

Пы методов из клеток, предположительно содержащих нужный ген, выде-

Ляют векторную ДНК, и в ней проводится поиск участков, несущих дан-

Ный ген. Далее проводят секвенирование части нуклеотидной последова-

тельности гена. Возможен другой метод – гибридизация выделенной из

Клеток ДНК с зондом (искомый ген или соответствующая ему мРНК); вы-

Деленную ДНК переводят в одноцепочечное состояние и вводят ее во

Взаимодействие с зондом. Далее определяют наличие двуцепочечных гиб-

ридных молекул ДНК. Во втором варианте возможен непосредственный

отбор клеток, синтезирующих белок – продукт транскрипции и трансля-

Ции гена-мишени. Применяются также селективные среды, поддержи-

Вающие рост только клеток, приобретших ген-мишень.

С помощью методов генетической инженерии возможно конструиро-

вание новых форм микроорганизмов по заданному плану, способных син-

Тезировать разнообразные продукты, в том числе эукариотических орга-

Низмов. Рекомбинантные микробные клетки быстро размножаются в кон-

Тролируемых условиях и способны утилизировать при этом разнообраз-

Ные, в том числе, недорогие субстраты.

Основные проблемы, возникающие при генетических манипуляциях,

заключаются в следующем: 1) гены при трансформации, попадая в чуже-