Установление наличия крови
Достоверное (доказательное) определение присутствия крови основано на обнаружении форменных элементов (клеток) и красящего вещества крови – гемоглобина и его производных в представленных образцах. Наиболее распространенными методами исследования являются морфологический метод. Вспомогательными методами – тонкослойная хроматография, микролюминесценции, спектральный и микроспектральный анализы. В основе их лежит способность гемоглобина и его производных поглощать волны света определенной длины.
Для каждого производного гемоглобина характер этих спектров специфичен по количеству, расположению, ширине и интенсивности полос поглощения. Для установления наличия крови практически пользуются спектрами производных гемоглобина – гемохромогена и гематопорфирина, полученными после обработки части следа соответствующими реактивами. Для такого исследования достаточно ничтожно малое количество объекта, реакция очень чувствительна, а ее результаты определяются с помощью спектральных насадок СПО-1, АУ-16, спектроскопа прямого видения и микроскопа. Микроспектральное исследование позволяет установить наличие крови даже после попыток ее удаления (стирки) в следах большой давности. Обнаружение спектра гемохромогена или гематопорфирина удостоверяет присутствие крови.
Метод тонкослойной хроматографии является основным и позволяет получить положительный результат даже в сложных случаях. Данный метод основан на том, что растворитель при прохождении через вытяжки, нанесенные на силуфолевые пластины, приводит к разложению крови на компоненты, после чего последние подвергают обработке спиртовым раствором бензидина и 3 %-ным раствором перекиси водорода.
Метод микролюминесценции основан на том, что производные гемоглобина, в частности гематопорфирин, обладают яркой флюоресценцией в УФЛ. Метод информативен при исследовании старых и замытых следов крови.
Определение вида крови
Проведение такого исследования, с одной стороны, диктуется обстоятельствами происшествия, когда в процессе расследования возникают версии о происхождении крови на предметах не только от человека, но и от птиц, млекопитающих, рыб, а с другой – определяется дальнейшим исследованием групповой принадлежности крови в следах, которое нельзя проводить без установления вида крови.
Для определения вида крови чаще всего пользуются реакцией белковой преципитации (Чистовича-Уленгута). В реакции преципитации участвуют два компонента: вытяжка из пятна крови и иммунная сыворотка, преципитирующая определенный вид белка. В основе данной реакции лежит взаимодействие белка из пятна крови с соответствующей сывороткой, при положительном результате реакции образуется осадок – преципитат. Выпускаются сыворотки, осаждающие белок человека, рогатого скота (крупного, мелкого), лошади, свиньи, кошки, собаки, птицы. Следует иметь в виду, что могут быть приготовлены сыворотки, осаждающие белки и других животных.
Кроме основного опыта с вытяжкой из пятна крови ставят контрольные опыты, в том числе и с вытяжками из предмета вне пятен крови, поскольку белок человека может присутствовать на предметах (чаще всего на одежде) и не только с кровью (например, выделения из носа, пот, моча и т. п.). В подобных случаях невозможно определить вид крови. Если положительный результат с сывороткой на белок человека не был получен, эксперт обязан ставить реакцию преципитации с сыворотками, изготовленными на белки различного вида животных, до получения положительного результата.
В настоящее время для определения видовой принадлежности крови используют реакции преципитации в агаровом геле, встречного иммуноэлектрофореза, иммунофлюоресценции.
Реакция преципитации в геле была предложена О. Ouchterlony (1949). Ее принцип состоит в следующем: в агаре в две лунки помещают антиген и антитело, они диффундируют друг в друга и в месте контакта образуется полоса преципитации.
Встречный иммуноэлектрофорез (электропреципитация) впервые был предложен Bussardom (1959). Сущность реакции заключается в следующем: глобулиновые фракции сывороток, содержащие антитела, направляются от «+» к «-», а антигены – от «-» к «+». Таким образом, двигаясь навстречу друг другу, они образуют полосу преципитации. Данная реакция может быть проведена как в агаровом геле, так и на пленках ацетатцеллюлозы.
РИФ-реакция иммунофлюоресценции была предложена в 1942 г. Coons и соавторами. Она основана на люминесценции антител, меченных различными флюорохромами, при этом антитела вступают в контакт с антигенами на поверхности объектов исследования. Используется непрямая реакция иммунофлюоресценции, состоящая из двух этапов:
1) контакт антигена с нефлюоресцирующей сывороткой;
2) обработка объекта исследования люминесцирующей сывороткой.
После установления принадлежности крови человеку определяют ее группу.
Определение группы крови
При расследовании таких тяжких преступлений, как убийство, изнасилование, совершенных при отсутствии свидетелей, выяснение возможной принадлежности крови потерпевшему, подозреваемому приобретает особо важное значение.
Определять групповую принадлежность можно в следах крови на предметах, в тканях расчлененных частей трупов, в жидкой крови, изъятой у потерпевших или подозреваемых в качестве образцов. При исследовании трупа с повреждениями, сопровождающимися наружным кровотечением, определение группы крови, изъятой из трупа, обязательно. В дальнейшем могут быть обнаружены следы крови на предметах, у лиц, подозреваемых в совершении преступления, на транспортных средствах, месте происшествия. Групповая принадлежность этих следов должна сопоставляться с групповой принадлежностью образцов крови погибшего.
Определение групповой принадлежности крови основано на обнаружении особых веществ, имеющихся на поверхности эритроцитов (антигены) и в сыворотке крови (агглютинины). В сыворотке крови здорового человека, как правило, не встречаются агглютинины, вступающие в реакцию с антигенами, находящимися в эритроцитах данного лица. На этом основано разделение всех людей на группы. Групповые признаки развиваются еще в утробном периоде жизни. Впоследствии данные признаки качественно не меняются. В сухой крови и ее следах агглютинины могут сохраняться несколько лет. Антигены сохраняются значительно дольше.
Кроме эритроцитов, такие же антигены содержатся в органах и тканях человека, его выделениях, что дает возможность определять их групповую принадлежность. Каждый человек обладает характерным для него индивидуальным набором антигенов и сывороточных белков.
Групповая принадлежность следов крови практически определяется в пределах эритроцитарной изосерологической системы АВО, при необходимости по системам Р, Льюис, MNSs, Резус, глобулиновой системы сыворотки. В жидкой крови возможно более широкое определение. Имеется возможность выявить или исключить в пятнах жидкой крови значительно большее количество системы как эритроцитов, так и сыворотки, системы ферментов и др.
По системе АВО кровь людей разделяется на четыре группы: O(I), A(II), В(Ш) и AB(IV). При определении групповой принадлежности образцов жидкой крови исследуются отдельно эритроциты и сыворотка. При исследовании пятен ставится контрольная реакция материалом предмета – контроль предмета-носителя.
Трудности определения групповой принадлежности крови в пятнах связаны главным образом с влиянием самого материала, предмета, на котором обнаружены следы крови, а также с небольшим количеством крови в пятнах, первоначальной силой антигенов и агглютининов.
Определение групповой принадлежности крови позволяет исключить ее принадлежность определенному лицу (потерпевшему или подозреваемому) или указать, что такое исключение нельзя сделать.
Групповая принадлежность жидкой крови определяется в связи с разрешением вопросов о спорном отцовстве, замене детей, краже ребенка и, как исключение, о спорном материнстве. Исследование основано на закономерностях передачи потомкам по наследству групповых признаков.