Общие принципы изготовления диагностических сывороток
1. Подбор штаммов возбудителя;
2. Культивирование соответствующих штаммов на питательных средах;
3. Стандартизация до определенной концентрации микробов в 1 мл;
4. Инактивация методом нагревания;
5. Гипериммунизация животных (лошадей, волов, овец, кроликов);
6. Взятие крови через 8-10 дней после последней инъекции антигена;
7. Отделение сыворотки;
8. Консервирование сыворотки (фенол, тиомерсал);
9. Отстаивание в течение 2 месяцев;
10. Фильтрация через бактериальные фильтры;
11. Фасовка, лиофильная сушка;
12. Контроль: стерильность, активность, специфичность.
Аллергены
Микробные белки и продукты жизнедеятельности микроорганизмов. Применение основано на явлении инфекционной аллергии, т.е. гиперчувствительности замедленного типа в ответ на введение в ранее инфицированный организм гомологичного антигена.
1. Бруцеллин ВИЭФ;
2. ППД-туберкулин для млекопитающих, для птиц, КАМ-аллерген;
КАМ-аллерген применяется для постановки симультанной пробы – одновременное введение животному ППД-туберкулина для млекопитающих и КАМ-аллергена.
3. Маллеин – для диагностики сапа у лошадей;
Изготовление аллергенов.
Каждый аллерген готовится по своей технологии.
Маллеин:
Стерильный фильтрат убитой нагреванием бульонной культуры сапной бактерии. Имеет вид прозрачной светло-желтой стерильной жидкости. Представляет собой продукт жизнедеятельности сапных культур. Для получения маллеина вирулентные штаммы засевают в колбы с МПБ с добавлением глицерин, выдерживают при температуре 37 градусов в течение 4 месяцев. Автоклавируют для инактивации возбудителя. Осаждают. Фильтруют через бактериальные фильтры. Разливают Контроль на стерильность, безвредность, специфичность, активность.
Диагностические бактериофаги
Применение бактериофагов основано на явлении специфического лизиса фагами соответствующих видов или вариантов бактерий. По известному бактериофагу можно определить вид или вариант бактерий.
Для диагностики сибирской язвы выпускают 2 фага:
1. Сибиреязвенный фаг «К» ВИЭВ;
2. Сибиреязвенный фаг «Гамма» МВА.
Для диагностики листериоза выпускают 2 бактериофага:
1. L2A;
2. L4A.
Для диагностики бруцеллеза: Тб. Стафилококковые фаги. О-сальмонеллезный фаг. Коли-фаги.
Общие принципы приготовления диагностических бактериофагов
1. Культивирование на питательных среда авирулентных штаммов возбудителей;
2. Добавление соответствующих фагов для лизиса. Активность фага должна быть не ниже 10-8;
3. Выдерживают при температуре 37 градусов 10-17 часов;
4. Фильтрация через стерилизующие асбестовые пластинки;
5. Фасовка по флаконам;
6. Контроль (стерильность, специфичность, активность).
Лечебно-профилактические биопрепараты
Применяются для профилактики и лечения больных животных.
Гипериммунные сыворотки (моновалентные и поливалентные; антибактериальные, противовирусные, антитоксические, сыворотка реконвалесцентов), гамма-глобулины, бактериофаги.
Гипериммунные сыворотки
Биологические иммунные препараты, полученные из сыворотки крови животных, гипериммунизированных бактериальными или вирусными антигенами и содержащие большое количество антител против какого(-их)-либо возбудителя (-лей).
Антибактериальные
Содержат антитела против возбудителей бактериальных инфекций.
Противовирусные
Содержат антитела против возбудителей вирусных инфекций.
Антитоксические
Содержат антитела, нейтрализующие токсины бактериальных и вирусных инфекций.
Смешанные
Содержат антитела против возбудителей бактериальных и вирусных инфекций.
Реконвалесцентов
Получена от переболевших животных
Моновалентные – против 1го вида (сероварианта), поливалентные – против нескольких, либо против одного вида возбудителя у разных видов животных.
Принцип изготовления (на предприятиях биологической промышлнности)
1. Подбор продуцентов (чаще лошади, также волы, ослы, мулы, реже свиньи, овцы, кролики), приобретают их в благополучных по инфекционным и кровепаразитарным заболеваниям;
2. Карантинирование животных–продуцентов, в это же время проводят их всесторонний осмотр;
3. Создание грунд-иммунитета (вакцинируют соответствующей вакциной);
4. Гипериммунизация животных (многократное парентеральное введение антигена в нарастающих дозах);
5. Взятие крови (у лошадей 16-20 мл на 1 кг ЖМ, КРС 16 мл/кг, овцы 14 мл/кг, свиньи 11 мл/кг). Первое взятие – через 7-10 дней после последнего введения антигена;
6. Получение сыворотки: кровь в термостат при температуре 37 градусов на 3 часа, чтобы свернулась, затем в прохладное место (+8градусов) на 24-48 часов. Образовавшуюся сыворотку сливают в стерильную посуду;
7. Консервирование (фенол, тиомерал);
8. Отстаивание в течение 2 месяцев;
9. Фильтрация через бактериальные фильтры;
10. Фасовка;
11. Контроль (стерильность, безвредность, активность).
Создают быстрый иммунитет (в течение суток), но он является пассивным, непродолжительным (10-14 дней).
Лечебные дозы в 5-10 раз больше профилактических. Большие дозы сыворотки вводятся в разные точки. Если состояние тяжелое – можно ввести внутривенно, но предварительно подогреть. Могут вызвать анафилактический шок или подъем температуры.
Иммунные глобулины
Представляют собой 10% водный раствор глобулиновой фракции белка, выделенной из соответствующей иммунной сыворотки. Иммунные глобулины – концентрат специфически активных белков (иммуноглобулинов), освобожденных от балластных белковых фракций.
Получают из гипериммунных сывороток.
В гипериммунной сыворотке содержатся альфа-, бета-, гамма-глобулины, альбумины. При изготовлении иммунных глобулинов из гипериммунной сыворотки осаждают балластные белки (альфа-, бета-глобулины, альбумины). Методов осаждения очень много. Самый распространенный – фракционное осаждение белков этанолом при низких температурах (3 этапа). Другие методы: высаливание нейтральными солями, для этого используют сернокислый аммоний, сульфат натрия, гипосульфит. Риваноловый метод. Диализ, ферментация и т.д.
Иммуноглобулины в меньших дозах оказывают больший лечебный или профилактический эффект по сравнению с иммунными сыворотками.
Контроль иммунных глобулинов: стерильность, активность, безвредность.
Бактериофаги
Могут быть моно-, би- и полифагами.
Коли-гертнер фаг.
Принцип изготовления
Напоминает принцип изготовления диагностических, но есть разница.
1. Культивирование на питательных средах фагочувствительных штаммов;
2. Добавление фагов, 6-10 часов для лизиса;
3. Фильтрация;
4. Консервирование смесью хинозола и фенола;
5. Фасовка;
6. Контроль (стерильность, безвредность, активность).
Активность: десятичные разведения до 10-11, в каждую пробирку по 0,05 мл соответствующей культуры. термостат на 24 часа (37 градусов). Титр начинают определять через 6 часов. Титр – наибольшее разведение бактериофага, в котором бульон остается прозрачным. Фаг считается активным при титре не ниже 10-7.