Окраска зерен волютина по методу Нейссера
1.На фиксированный мазок нанести ацетат синьки Нейссера на 2—3 мин.
2. Добавить раствор Люголя на 10—30 с.
3. Промыть препарат водой.
4. Докрасить водным раствором везувина или хризоиди-на в течение 0,5—1 мин.
5. Промыть препарат водой, высушить и микроскопировать.
Зерна волютина представляют собой включения полифосфатов, имеющие в отличие от цитоплазмы щелочную реакцию,
|
|
и поэтому избирательно воспринимают ацетат синьки, окрашиваясь в темно-синий цвет. Цитоплазма клетки, обладающая кислой реакцией, воспринимает щелочной краситель везувин и окрашивается в желтый цвет (рис. 2.2.4; на вклейке). Обнаружение макрокапсул по методу Бурри—Гинса
1. Смешать каплю взвеси микробных клеток с каплей туши и при помощи стекла со шлифованым краем сделать мазок таким же образом, как мазок из крови, высушить и фиксировать.
2. На мазок нанести водный раствор фуксина на 1—2 мин.
3. Промыть водой, высушить на воздухе и микроскопиро-вать.
Бактерии окрашиваются в красный цвет. Капсулы не окрашиваются анилиновыми красителями, остаются прозрачными и контрастно выделяются на черно-розовом фоне (рис. 2.2.5; на вклейке).
Рис.2.3.1. Актиномицеты.
Рис.2.3.2. Спирохеты, а — трепонемы; б — боррелии; в лептоспиры.
Тема 2.3. МОРФОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ
И УЛЬТРАСТРУКТУРА АКТИНОМИЦЕТОВ И СПИРОХЕТ
Введение. Актиномицеты (Actinomyces) относятся к порядку Actinomycetales, включающему семейства Actinomycetaceae, Strep-tomycetaceae и Nocardiaceae. Актиномицеты имеют нитевидную форму. Они способны к ветвлению и могут образовывать структуры, напоминающие мицелий одноклеточных грибов (рис. 2.3.1). Встречаются также палочко- и кокковидные формы. Нити имеют длину 100—600 мкм и толщину 0,2—1,2 мкм. Актиномицеты неподвижны, лишены выраженной капсулы, жгутиков и пилей. Как и другие бактерии, актиномицеты окрашиваются простыми методами или по методу Грама. Актиномицеты относятся к фирмикутным бактериям и окрашиваются грамположительно. В отличие от других бактерий они способны размножаться не только поперечным делением, но и спорами.
Спирохеты относятся к порядку Spirochaetales. Они представляют собой извитые подвижные бактерии. Патогенные спирохеты входят в семейство Spirochaetaceae и принадлежат к трем родам: Borrelia, Treponema и Leptospira. Их основные морфологические признаки представлены в табл. 2.3.1.
Клетка спирохеты имеет форму нити, закрученной в виде спирали. Клеточная стенка обладает строением, типичным для грациликутных бактерий. В периплазматическом пространстве располагаются сократительные фибриллы — эндофлагеллы, которые прикрепляются к полюсам клетки с обоих концов, оплетают тело бактерии по направлению к центру клетки, где они переплетаются между собой. Фибриллы обладают сокра-
тительной способностью и определяют спиральную форму и подвижность спирохет.
Патогенные спирохеты имеют длину 3—20 мкм и толщину 0,1—0,5 мкм. Представители отдельных родов различаются по размерам, числу и характеру завитков (см. рис. 2.3.2, табл. 2.3.1). Спирохеты плохо окрашиваются по методу Грама. Боррелии в отличие от трепонем и лептоспир окрашиваются анилиновыми красителями (фуксином). Морфологию трепонем и лептоспир изучают в нативных препаратах ("раздавленная" или "висячая" капля) с помощью темнопольного или фазово-контрастного методов, а также в мазках, окрашенных по методу Романовского—Гимзы или другими специальными методами.
Таблица 2.3.1. Морфологические признаки спирохет
| Род |
| Характер движения |
| Число и характер завитков |
Окраска по методу
Романовского—
Гимзы
Сине-фиолетовая
| Borrelia |
| 3—10, крупные, неравномерные |
Толчкообразное, сгибательно-по-ступательное
| Бледно-розовая |
| Treponema 8—12, мелкие, равномерные |
Плавное, сгиба-тельно-поступа-тельное
| Leptospira |
| Многочисленные первичные завитки, вторичные завитки в виде буквы S |
| Розово-сиреневатая |
Очень активное, вращательно-по-ступательное
А План
Программа
1. Определение формы актиномицетов в препарате, окрашенном по методу Грама.
2. Методы изучения морфологии спирохет с дифференциацией по морфологическим признакам.
3. Определение формы и подвижности спирохет в прижизненных препаратах.
4. Исследование спирохет в окрашенных препаратах.
5. Изучение электронограмм спирохет и спирилл.
Демонстрация
1.Препарат из чистой культуры актиномицетов. Окраска по методу Грама.
2. Подвижность лептоспир (темнопольная микроскопия).
3. Боррелии в препарате толстой капли крови (окраска по методу Романовского—Гимзы).
Задание студентам
1.Изучить морфологию актиномицетов в препарате. Зарисовать.
2. Изучить морфологию лептоспир с помощью метода темнопольной микроскопии. Зарисовать.
3. Изучить морфологию боррелии в препарате толстой капли крови. Зарисовать.
Методические указания
Морфологию спирохет изучают в нативных препаратах ив мазках, окрашенных по методу Романовского—Гимзы. Препараты исследуют спомощью темнопольной или фазово-кон-трастной микроскопии, наблюдая за активным и характерным движением спирохет и особенностями их формы.
Приготовление мазка из крови. На чистое обезжиренное стекло ближе к одному из его концов поместить каплю крови. Другое предметное стекло со шлифованым краем прижать под углом 45° к капле крови, а затем скользящим движением передвинуть его к другому концу нижнего стекла. При этом кровь распределится по предметному стеклу тонким слоем. Высушить препарат на воздухе, фиксировать в жидком фиксаторе (метиловый спирт или смесь этилового спирта и эфира).
Окраска препарата по методу Романовского — Гимзы (смесь метиленового синего, эозина и азура). На мазок нанести рабочий раствор красителя (2 капли красителя на 1 мл дистиллированной воды) на 10—20 мин. Затем препарат промыть водой и высушить на воздухе.
Боррелии — возбудители возвратного тифа (B.recurrentis) окрашиваются в фиолетовый, эритроциты крови — в розово-коричневый, ядра лейкоцитов — в фиолетовый цвет. Трепонемы окрашиваются в бледно-розовый, лептоспиры — в розово-сиреневатый цвет.