Глава 7 МЕТОДЫ СТЕРИЛИЗАЦИИ
ОЦЕНКА ЭФФЕКТИВНОСТИ ДЕЙСТВИЯ АНТИСЕПТИКОВ И ДЕЗИНФЕКТАНТОВ. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ БАКТЕРИЙ К АНТИМИКРОБНЫМ ПРЕПАРАТАМ
Введение.Уничтожение патогенных для человека микробов является одной из важнейших проблем в профилактике и лечении различных заболеваний. Для борьбы с микробами используют методы асептики, антисептики, дезинфекции и антимикробной терапии. Каждый метод имеет свои особые цели и условия применения.
Тема 7.1. МЕТОДЫ ОЦЕНКИ АНТИМИКРОБНОГО ДЕЙСТВИЯ ХИМИЧЕСКИХ И ФИЗИЧЕСКИХ ФАКТОРОВ
Введение.Асептика — система мероприятий, предупреждающих внесение (попадание) микроорганизмов из окружающей среды в ткани или полости человеческого организма при лечебных и диагностических манипуляциях, а также в материал для исследования, в питательные среды и культуры микроорганизмов при лабораторных исследованиях. Асептика предусматривает соблюдение особых санитарно-гигиенических правил и приемов работы, а также специальную обработку инструментов, материалов, рук медицинских работников, помещений и т.д. с целью частичного (дезинфекция) или полного (стерилизация) уничтожения микробов.
Антисептика — комплекс лечебно-профилактических мероприятий, направленных на уничтожение микроорганизмов, способных вызвать инфекционный процесс, на поврежденных участках кожи и слизистых оболочек, путем обработки микро-бицидными веществами — антисептиками.
Стерилизация — полное уничтожение микроорганизмов, включая вегетативные формы и споры. Существуют 3 основные группы методов стерилизации: физические, механические и химические. Выбор метода, используемого для решения практической задачи, зависит от стерилизуемого объекта.
Дезинфекция — обеззараживание объектов окружающей среды. В отличие от стерилизации дезинфекция приводит к гибели большинства, но не всех форм микробов и, таким образом, обеспечивает только снижение микробной контаминации (загрязнения), а не полное обеззараживание объекта. Поэтому предметы, подвергшиеся дезинфекции, не являются абсолютно безопасными.
▲ План
▲ Программа
1. Асептика, антисептика и дезинфекция. Антисептики и дезинфектанты.
2. Антимикробное действие физических и химических факторов.
3. Методы стерилизации; аппаратура, используемая для стерилизации.
4. Методы контроля эффективности стерилизации, действия антисептических и дезинфицирующих веществ.
Демонстрация
1. Аппаратура, используемая при стерилизации: автоклав, сушильный шкаф, аппаратура для фильтрации и УФ-облучения.
А Заданиестудентам
1. Учесть результаты опытов, поставленных с бактериальными тест-объектами для контроля эффективности стерилизации, проведенной путем кипячения и авто-клавирования. Сделать заключение.
2. Определить по готовым посевам антибактериальное действие УФ-лучей на стафилококки и кишечную палочку.
3. Учесть результаты опытов, поставленных для определения антимикробного действия антисептических и дезинфицирующих веществ. Сделать заключение.
Методические указания
Методы стерилизации
I. Физические методы.Воздействие высоких температур. Высокая температура обладает микробицидным действием благодаря способности вызывать денатурацию важнейших биополимеров, в первую очередь белков.
Стерилизация сухим жаром в сушильно-стерилизационном шкафу (печи Пастера) основана на бактерицидном действии нагретого до 165—170 °С воздуха в течение 45 мин. При более высокой температуре происходит обугливание ватных пробок, бумаги, в которую завернута посуда, а при более низкой температуре требуется большой срок стерилизации. Сухим жаром стерилизуют стеклянную посуду (чашки Петри, пробирки, пипетки и др.).
Автоклавирование — стерилизация перегретым водяным паром (при повышенном давлении) в паровом стерилизаторе (автоклаве). Один из наиболее эффективных методов стерилизации, который широко применяют не только в микробиологической, но и клинической практике. Работа с автоклавом требует точного выполнения специальной инструкции и соблюдения правил безопасности. Максимальную температуру пара измеряют специальным термометром, который помещают в автоклав вместе со стерилизуемым материалом. В некоторых случаях используют химические вещества с определенной температурой плавления: бензонафтол (ПО °С), бензойную кислоту (120 °С). Многие питательные среды, перевязочный материал, белье стерилизуют при давлении 1 атм в течение 15—20 мин, питательные среды с углеводами — при 0,5 атм в течение 15 мин, а обеззараживание инфицированного материала производят при 1,5—2 атм в течение 20—25 мин (табл. 7.1.1).
Таблица 7.1.1. Соотношение между давлением, температурой и продолжительностью стерилизации в паровом стерилизаторе (автоклаве)
| Давление пара, атм | Температура, 'С | Время стерилизации, мин |
0 100 30-60 (дробно) 0,5 111 20-30
1 121 15-20 1,5 127 15-20
2 133 15
Стерилизация текучим паром осуществляется в автоклаве при незавинченной крышке и открытом выпускном кране. Данный способ стерилизации основан на антибактериальном действии пара в отношении вегетативных клеток. Он применяется в тех случаях, когда стерилизуемый материал не выдерживает высокой температуры, например питательные среды с витаминами, углеводами. Для полного обеспложивания применяют принцип дробной стерилизации, т.е. стерилизуют материал при 100 "С (или 80-90 °С) в течение 20-30 мин 3 дня подряд. При этом вегетативные клетки погибают, а споры сохраняются и за 1 сут прорастают. Последующее двукратное прогревание обеспечивает достаточно надежную стерильность материала.
Тиндализация — это дробная стерилизация материалов при 56—58 "С в течение 1 ч 5—6 дней подряд. Применяется для стерилизации легко разрушающихся при высокой температуре веществ (сыворотка крови, витамины и др.).
Прокаливание в пламени спиртовки или газовой горелки при-
меняют ограниченно, например для стерилизации бактериологических петель, препаровальных игл, пинцетов.
Воздействие ионизирующих излучений. Микроби-цидное действие ионизирующих излучений основано на их способности вызывать повреждения в молекуле ДНК. Для стерилизации одноразовых медицинских инструментов и бактериологического оборудования, чувствительного к термическим воздействиям (пластиковая посуда для культивирования микробов и клеточных культур, пластиковые шприцы, системы переливания крови и т.д.), обычно применяют стерилизацию у-излучением.
И. Механические методы.Основаны на фильтровании через специальные мембранные фильтры с малым размером пор, способные механически задерживать микроорганизмы. В лабораторной практике широко применяют бумажные и полимерные фильтры. Существуют фильтры с порами различных, строго откалиброванных размеров, что позволяет гарантированно очищать материал не только от бактерий, но и вирусов, а при необходимости и от некоторых макромолекул. Фильтрование используют для стерилизации жидких материалов, не выдерживающих нагревания (сыворотка крови, растворы антимикробных препаратов, компоненты питательных сред для бактерий и культур клеток), для получения бактериальных токсинов и других продуктов жизнедеятельности бактерий. Фильтрование является ведущим методом стерилизации воздуха в тех случаях, когда это необходимо. Для этого воздух пропускают через фильтры, пропитанные микробицидными веществами. Такие системы стерилизации применяют, например, в настольных боксах для работы с возбудителями особо опасных инфекций, а также в операционных блоках, родильных отделениях и т.д.
III. Химические методы.Основаны на обработке объекта химическими веществами, обладающими микробицидным действием и способными при соблюдении определенных режимов воздействия обеспечить полное уничтожение микрофлоры. Химическую стерилизацию обычно применяют для обработки различных приборов и инструментов многоразового использования, чувствительных к высоким температурам (фиброопти-ческие приборы, медицинские имплантаты и др.). К стерилизующим агентам относятся окись этилена, перекись водорода, глю-таровый альдегид, пероксиуксусная кислота, двуокись хлора.
Независимо от метода во всех случаях требуется регулярный контроль эффективности процедуры стерилизации. С этой целью используют биологические индикаторы — известные микроорганизмы, наиболее устойчивые к данному способу обработки (например, споры Bacillus stearothermophilus для контроля эффективности автоклавирования, Bacillus subtilis — для контроля сухожаровой стерилизации). Существуют также физико-химические индикаторы — вещества, которые претерпевают види-
мые изменения (изменяют цвет, агрегатное состояние и т.д.) только при соблюдении правильного режима обработки.
• Методы дезинфекции
Для дезинфекции применяют физические и химические методы.
I. Физические методы.Воздействие высоких темпера
тур.
Кипячение. Шприцы, мелкий хирургический инструментарий, предметные и покровные стекла и некоторые другие предметы помещают в стерилизаторы, в которые наливают воду. Для устранения жесткости и повышения температуры кипячения к воде добавляют 1—2 % раствор бикарбоната натрия. Кипячение производят не менее 30 мин. При кипячении некоторые вирусы (например, вирус гепатита В) и споры бактерий сохраняют жизнеспособность.
Пастеризация основана на антибактериальном действии температуры в отношении вегетативных клеток, но не бактериальных спор. Нагревание материала производится при температуре 50—65 "С в течение 5—10 мин с последующим быстрым охлаждением. Обычно пастеризуют напитки и пищевые продукты (вино, пиво, соки, молоко и др.).
Воздействие ионизирующих излучений. Ультрафиолетовое излучение (УФ) с длиной волны 260—300 мкм обладает достаточно выраженным микробицидным действием, однако некоторые виды микробов и споры резистентны к УФ. Поэтому УФ-облучение не способно обеспечить полного уничтожения микрофлоры — стерилизацию объекта. Обработку УФ обычно используют для частичного обеззараживания (дезинфекции) крупных объектов: поверхностей предметов, помещений, воздуха в медицинских учреждениях, микробиологических лабораториях и т.д.
Гамма-излучение обладает выраженным микробицидным действием на большинство микроорганизмов, включая вегетативные формы бактерий и споры большинства видов, грибы, вирусы. Применяют для стерилизации пластиковой посуды и медицинских инструментов одноразового использования. Следует иметь в виду, что обработка гамма-излучением не обеспечивает уничтожения таких инфекционных агентов, как прионы.
II. Химические методы.Это обработка объекта дезинфектан-
тами — микробицидными химическими веществами. Некото
рые из этих соединений могут оказывать токсическое действие
на организм человека, поэтому их применяют исключительно
Для обработки внешних объектов. В качестве дезинфектантов
обычно используют перекись водорода, хлорсодержащие со
единения (0,1—10 % раствор хлорной извести, 0,5—5 % раствор
хлорамина, 0,1—10% раствор двутретьеосновной соли гипо-
хлората кальция — ДТСГК), формальдегид, фенолы (3—5 % раствор фенола, лизола или карболовой кислоты), йодофоры. Выбор дезинфицирующего вещества и его концентрации зависят от материала, подлежащего дезинфекции. Дезинфекция может быть достаточной процедурой для обеззараживания только таких медицинских инструментов, которые не проникают через естественные барьеры организма (ларингоскопы, цистоскопы, системы для искусственной вентиляции легких). Некоторые вещества (борная кислота, мертиолат, глицерин) применяют как консерванты для приготовления лечебных и диагностических сывороток, вакцин и других препаратов.
• Методы антисептики
В качестве антисептиков используют только малотоксичные для организма соединения, оказывающие антимикробное действие. Наиболее часто применяют 70 % этиловый спирт, 5 % раствор йода, 0,1 % раствор КМп04, 0,5—1 % спиртовые растворы метиленового синего или бриллиантового зеленого, 0,75—4,0 % раствор хлоргексидина, 1—3 % раствор гексахло-рофена и некоторые другие соединения. Антимикробные вещества добавляют также к материалам, используемым при изготовлении перевязочных средств, лейкопластырей, зубных протезов, пломбировочных материалов и т.п. с целью придания им бактерицидных свойств.
Методы контроля эффективности стерилизации, действия антисептических и дезинфицирующих веществ. Изучение антибактериального действия высоких температур. В пробирки с питательным бульоном поместить шелковые нити, смоченные смесью спорообразующей (3 пробирки) и неспорообразующей (3 пробирки) культур. По одной пробирке с каждой культурой подвергнуть автоклавированию или кипячению; контрольные пробирки никакому воздействию не подвергать. После обработки все посевы выдержать в термостате при 37 °С в течение 24 ч. Отметить результат поставленного опыта и сделать заключение.
Контроль стерильности перевязочного материала и хирургических инструментов. Проводят посев исследуемых образцов (или смывов с поверхности крупных инструментов) на три среды: сахарный бульон, тиогликолевую среду и жидкую среду Сабуро. Посевы инкубируют в термостате 14 дней. При отсутствии роста во всех посевах материал считают стерильным.
Изучение антибактериального действия УФ-лучей. Суспензию стафилококка или E.coli в изотоническом растворе хлорида натрия в объеме 1 мл поместить на расстоянии 10—20 см от центра лампы. Облученную и необлученную (контроль) суспензии бактерий засеять в питательный бульон и инкубировать
при 37 "С в течение 16—24 ч, после чего оценить результаты: отсутствие помутнения среды связано с гибелью облученной культуры бактерий, в контроле отмечается помутнение, что свидетельствует о наличии роста.
Определение антимикробного действия антисептических и дезинфицирующих средств. 1. Подготовить два вида тест-объектов: а) шелковые нити, смоченные культурой E.coli; б) шелковые нити, смоченные спорообразующей культурой (с большим содержанием спор). Нити поместить в растворы фенола (5 %), лизола (5 %), хлорной извести (10 %) на 5 и 60 мин, после чего отмыть от исследуемых веществ, засеять в питательный бульон и поместить в термостат до следующего дня. Контрольные пробы действию химических веществ не подвергать. Отметить результат поставленного опыта и сделать заключение.
2. Диски из фильтровальной бумаги смочить растворами исследуемых веществ и поместить на поверхность питательного агара в чашке Петри, засеянной (газоном) тест-культурой стафилококка или кишечной палочки. Чашку инкубировать в течение суток при 37 °С. Об антибактериальном действии исследуемых веществ судят по диаметру зон задержки роста бактерий, образующихся вокруг дисков.
Тема 7.2. МЕТОДЫ ОЦЕНКИ ЭФФЕКТИВНОСТИ ДЕЙСТВИЯ АНТИМИКРОБНЫХ ПРЕПАРАТОВ
Введение. Антимикробные препараты (природные и синтетические антибиотики) используются для лечения заболеваний, вызванных микроорганизмами. Для эффективной терапии необходим подбор препарата, обладающего наибольшей активностью по отношению к данному возбудителю инфекции и оказывающего наименьший вред нормальной микрофлоре человека. Широкое распространение бактериальных штаммов, обладающих различной степенью устойчивости ко многим препаратам (полирезистентностью), делает особенно актуальными качественную (метод дисков) и количественную (метод серийных разведений) оценку чувствительности бактерий к лечебным препаратам.
▲ План
▲ Программа
1. Спектры действия основных групп антимикробных препаратов.
2. Оценка действия на бактерии антимикробных препаратов методом дисков.
3. Определение минимальной ингибирующей концентрации (МИК) антимикробных препаратов методом серийных разведений.
А. Демонстрация
1. Антимикробные препараты различных групп.
2. 
Стандартные бумажные диски, пропитанные антимикробными препаратами, для определения чувствительности к ним бактерий.
3. Таблицы и схемы антимикробных спектров важнейших групп антибиотиков и механизмы их антибактериального действия.
Задание студентам
1. Поставить опыт по определению чувствительности стафилококков к различным антибиотикам методом дисков.
2. По результатам поставленного опыта определить минимальную ингибирующую концентрацию пенициллина для различных бактериальных культур методом серийных разведений.
Методические указания
Количественное определение чувствительности бактерий к антимикробным препаратам методом серийных разведений.Данный метод применяют для определения минимальной подавляющей концентрации (МП К) — наименьшей концентрации антибиотика, полностью подавляющей рост исследуемых бактерий. Готовят основной раствор антибиотика, содержащий препарат в определенной концентрации (мкг/мл или ЕД/мл) в физиологическом или буферном растворе или в специальном растворителе. Основной раствор используют для приготовления серийных (2-кратных) разведений антибиотика в питательной среде — бульоне (в объеме 1 мл) или агаре. Из исследуемой бактериальной культуры готовят суспензию стандартной плотности и засевают по 0,1 мл на среды с разной концентрацией антибиотика, а также на среду без препарата (контроль культуры). Посевы инкубируют при 37 "С 20—24 ч или более (для медленно растущих бактерий), после чего отмечают результаты опыта по помутнению питательного бульона или появлению видимого роста бактерий на агаре, сравнивая с контролем. Наименьшая концентрация антибиотика, полностью подавляющая рост исследуемой культуры, принимается за МПК.
Метод серийных разведений может быть использован для определения чувствительности к антибиотикам любых микроорганизмов, включая прихотливых и медленно растущих, а также облигатных внутриклеточных паразитов (хламидий, рик-кетсий и вирусов). В последнем случае антимикробные препараты в различных концентрациях добавляют в среду для культивирования клеток, после чего клетки заражают чистой культурой тестируемого вируса или бактерии. Результат оценивают по ЦПД или с помощью серологических реакций, позволяющих обнаружить накопление антигенов возбудителя в зараженных клетках (см. главу 10). Чаще всего с этой целью применяют иммунофлюоресцентный метод (ИФ). Наимень-
шую концентрацию препарата, препятствующую развитию ЦПД или накоплению в клетках антигенов возбудителя, принимают за МПК.
Интерпретацию результатов, т.е. оценку клинической чувствительности, осуществляют на основании критериев, приведенных в табл. 7.2.1. К чувствительным относятся штаммы бактерий, рост которых подавляется при концентрациях препарата, обнаруживаемых в сыворотке крови пациента при использовании средних терапевтических доз антибиотиков. К умеренно устойчивым относятся штаммы, для подавления роста которых требуются концентрации, создающиеся в сыворотке крови при введении максимальных лечебных доз препарата. Устойчивыми являются микроорганизмы, рост которых не подавляется препаратом в концентрациях, создаваемых в организме при использовании максимально допустимых доз.
Таблица 7.2.1. Интерпретациярезультатов определения чувствительности бактерий к антибиотикам методом серийных разведений
| Антибиотик | МПК (мкг/мл) | ||
| чувстви- | промежу- | устой- | |
| тельные | точные | чивые | |
| (S) | (D | (R) | |
| Пенициллины | |||
| Бензилпенициллин: | |||
| • для стафилококков | £0,12 | — | >0,25 |
| • для других бактерий | <1,5 | >1,5 | |
| Оксациллин | |||
| • для Staphylococcus aureus | <2 | — | >4 |
| • для других видов стафилококков | <0,25 | — | >0,5 |
| Метициллин | <2 | — | >4 |
| Ампициллин: | |||
| • для стафилококков | <0,25 | — | >0,5 |
| • для E.coli и других энтеробактерий | <8 | >32 | |
| Карбенициллин: | |||
| • для E.coli и других энтеробактерий | <16 | >64 | |
| • для Pseudomonas aeruginosa | <128 | >512 | |
| Пиперрациллин | |||
| • для E.coli и других энтеробактерий | <16 | >64 | |
| • для Pseudomonas aeruginosa | >64 | — | >182 |
| Азлоциллин | <64 | — | >128 |
| Цефалоспорины | |||
| Цефазолин | <8 | >32 | |
| Цефалотин | <8 | >32 | |
| Цефаклор | <8 | >32 | |
| Цефалексин | <8 | >32 | |
| Цефуроксим | <8 | >32 |
Продолжение
| Антибиотик |
МИК (мкг/мл)
| устойчивые (Ю |
| чувствительные (S) |
промежуточные (D
| Цефамандол | <8 | >32 | ||
| Цефотаксим | <8 | 16-32 | >64 | |
| Цефтриаксон | <8 | 16-32 | >64 | |
| Цефоперазон | <16 | >64 | ||
| Цефтазидим | <8 | >32 | ||
| Цефепим | Новые бета | <8 -лактамы | >32 | |
| Имипенем | <4 | >16 | ||
| Меропенем | <4 | >16 | ||
| Хинолоны | ||||
| Налидиксовая кислота | SI6 | — | >32 | |
| Ципрофлоксацин | <1 | >4 | ||
| Офлоксацин | <2 | >8 | ||
| Норфлоксацин | <4 юзиды | >16 | ||
| Аминогли | ||||
| Канамицин | <16 | >64 | ||
| Гентамицин | <4 | >16 | ||
| Тобрамицин | <4 | >16 | ||
| Амикацин | <16 | >64 | ||
| Нетилмицин | <8 | >32 | ||
| Тетрациклины,макролиды, линкозамиды | ||||
| Тетрациклин | <2 | 4-8 | >16 | |
| Доксициклин | <4 | >16 | ||
| Эритромицин | 50,5 | 1-4 | >8 | |
| Азитромицин | <2 | >8 | ||
| Кларитромицин | <2 | >8 | ||
| Алеандомицин | <2 | >8 | ||
| Линкомицин | <2 | >8 | ||
| Клиндамицин | <0,25 | 0,5 | >1 | |
| Антибиотики других групп | ||||
| Хлорамфеникол (лев | омицетин) | <8 | >32 | |
| Фузидиевая кислота | <2 | 4-8 | >16 | |
| Рифампицин | <2 | >8 | ||
| Полимиксин | <50 ЕД/мл | >50 ЕД/мл | ||
| Ванкомицин | <4 | 8-16 | S32 | |
| Фурадонин | <32 | >128 |
Микротест-системы для определения чувствительности к антимикробным препаратам.Микротест-системы предназначены для быстрого определения клинической чувствительности к антибиотикам бактерий определенных видов или родственных групп. Тестируемые препараты в стандартных концентрациях находятся в лунках готовых пластиковых планшетов. Определяют чувствительность исследуемой культуры к двум концентрациям каждого антибиотика: средней терапевтической и максимальной. Материал из изолированной колонии с помощью мерной бактериологической петли (объем 1 мкл) вносят в 5 мл стандартной питательной среды, содержащей индикатор, и готовят суспензию. Готовую бактериальную суспензию разливают в лунки планшета по 0,1 мл и инкубируют при оптимальных для данного вида бактерий условиях температуры и газового состава среды. О росте бактерий судят по изменению цвета индикатора, что позволяет существенно сократить сроки исследования. Если бактерии сохраняют жизнеспособность в присутствии антибиотика, выделение продуктов метаболизма приводит к изменению цвета индикатора. Отсутствие изменения цвета свидетельствует о полном подавлении жизнедеятельности микроба. Результаты определяют через 4 ч инкубации с помощью спектрофотометра.
Определение клинической чувствительности бактерий к антимикробным препаратам методом дисков (диффузионный тест).Метод основан на подавлении роста бактерий на плотной питательной среде под действием антибиотика, содержащегося в бумажном диске. В результате диффузии препарата в агар вокруг диска образуется градиент концентрации антибиотика. Размер зоны подавления роста зависит от чувствительности бактерии и свойств препарата (в частности, скорости диффузии в агаре). Для определения чувствительности в клинической практике применяют готовые стандартные диски со строго определенным содержанием антибиотиков. Содержание препарата определяется исходя из терапевтических концентраций каждого антибиотика и средних значений МПК для патогенных бактерий. Название препарата и его количество обозначено на каждом диске. Для определения чувствительности из исследуемой бактериальной культуры готовят взвесь, содержащую стандартное количество жизнеспособных клеток, и засевают газоном в чашки Петри (диаметр 100 мм) на среды Мюллера-Хинтон или АГВ (специальные среды, не препятствующие диффузии антимикробных веществ и не оказывающие на них негативного воздействия). Диски на засеянную поверхность накладывают с помощью аппликатора на расстоянии 2,5 см от центра чашки по кругу (рис. 7.2.1). На чашку помещают не более 5 дисков. Посевы инкубируют 18—20 ч при 35 С. При корректном выполнении процедуры на фоне равномерного бактериального газона вокруг дисков образуются
зоны подавления роста, имеющие круглую форму. Учет результатов осуществляют путем измерения диаметра зоны подавления роста. За зону, подлежащую измерению, принимают тот участок, на котором рост бактерий отсутствует полностью. Интерпретацию полученных результатов (вывод о чувствительности) осуществляют на основании критериев, приведенных в табл. 7.2.2.
Таблица 7.2.2. Интерпретация результатов определения чувствительности бактерий к антибиотикам методом дисков (на среде АГВ)
| Антибиотик | Диаметр зоны задержки роста (мм) | ||
| чувствительные (S) | промежуточные (D | устойчивые (R) |
Пенициллины
| Бензилпенициллин: | ||||
| • при испытании стафилококков | £20 | 21- | -28 | >29 |
| • при испытании других бактерий | £10 | 11- | -16 | £17 |
| Ампициллин: | ||||
| • при испытании стафилококков | <20 | 21- | -28 | £29 |
| • при испытании грамотрицатель- | ||||
| ных бактерий и энтерококков | <9 | 10- | -13 | >14 |
| Карбенициллин (25 мкг) | £14 | 15- | -18 | >19 |
| Карбенициллин (100 мкг) при | ||||
| испытании P. aeruginosa | £11 | 12- | -14 | £15 |
| Метициллин | £13 | 14- | -18 | >19 |
| Оксациллин (10 мкг) | $15 | 16- | -19 | £20 |
| Азлоциллин (для P.aeruginosa) | £13 | 14- | -16 | £16 |
| Пиперациллин (для P.aeruginosa) | <17 | >18 | ||
| Азтреонам | <15 | 16- | -21 | £22 |
Цефалоспорины
| Цефалотин | S14 | 15-18 | >19 |
| Цефазолин | £14 | 15-18 | >19 |
| Цефуроксим | £14 | 15-18 | >19 |
| Цефокситин | £14 | 15-18 | >19 |
| Цефотаксим | £14 | 15-20 | >21 |
| Цефтриаксон | £14 | 15-20 | £21 |
| Цефоперазон | £14 | 15-18 | >19 |
| Цефтазидим | £14 | 15-17 | £18 |
| Цефалексин | £14 | 15-18 | >19 |
| Цефаклор | £14 | 15-18 | >19 |
| Цефиксим | £15 | 16-19 | £20 |
| Цефепим* | £14 | 15-17 | £18 |
Продолжение
| Антибиотик | Диаметр | зоны задержки роста | |
| (мм) | |||
| чувстви- | промежу- | устой- | |
| тельные | точные | чивые | |
| (S) | (D | (R) | |
| Новые бета-лактамы | |||
| Имипенем* <13 | 14-15 | >16 | |
| Меропенем* <13 | 14-15 | >16 | |
| Хинолоны | |||
| Ципрофлоксацин <15 | 16-20 | >21 | |
| Офлоксацин <12 | 13-16 | >17 | |
| Налидиксовая кислота* <12 | 13-17 | >18 | |
| Аминогликозиды | |||
| Стрептомицин <16 | 17-19 | >20 | |
| Канамицин <14 | 15-18 | >19 | |
| Гентамицин £15 | — | >16 | |
| Сизомицин <15 | — | >16 | |
| Тобрамицин <14 | — | >15 | |
| Амикацин <14 | 15-16 | >17 | |
| Нетилмицин <12 | 13-14 | >15 | |
| Тетрациклины, макролиды, линкозамиды | |||
| Тетрациклин <16 | 17-20 | >22 | |
| Доксициклин <15 | 16-19 | >20 | |
| Эритромицин <17 | 18-21 | >22 | |
| Азитромицин <13 | 14-17 | >18 | |
| Рокситромицин* <14 | 15-18 | >19 | |
| Кларитромицин* £13 | 14-17 | >18 | |
| Линкомицин <19 | 20-23 | £24 | |
| Клиндамицин £14 | 15-20 | >21 | |
| Олеандомицин £16 | 17-20 | >21 | |
| Антибиотики других групп | |||
| Хлорамфеникол <15 | 16-18 | >19 | |
| Фузидиевая кислота <16 | 17-20 | >21 | |
| Рифампицин <12 | 13-15 | >16 | |
| Полимиксин <11 | 12-14 | >15 | |
| Ванкомицин: | |||
| • для стафилококков <11 | — | >12 | |
| • для энтерококков <14 | 15-16 | >17 | |
| Ристомицин <9 | 10-11 | >12 | |
| Фурадонин £15 | 16-18 | >19 | |
| Фурагин £15 | 16-18 | >19 |
*Предварительные данные.
| Глава 8 |
Применение метода дисков имеет ряд ограничений. Метод пригоден только для определения чувствительности быстрорастущих бактерий, образующих в течение 24 ч гомогенный газон на стандартной плотной питательной среде достаточно простого состава (Мюллера—Хинтон или АГВ), не содержащей веществ, способных снижать активность антибиотиков или препятствовать их диффузии. В противном случае полученная информация будет недостоверной.
Таким образом, метод дисков не может быть использован для определения чувствительности к антибиотикам всех медленно растущих и большинства прихотливых бактерий, к числу которых относятся многие возбудители болезней человека (Mycobacterium spp., Helicobacter spp., Bacteroides spp., Prevotella spp., Brucella spp., Mycoplasma spp. и многие другие). При определении чувствительности некоторых прихотливых бактерий, для которых разработаны стандартные тесты {Haemophilus spp., Neisseria spp., определенные виды стрептококков), следует использовать специальные питательные среды и дополнительные критерии при интерпретации полученных результатов.
Метод дисков не дает надежных результатов также при определении чувствительности бактерий к препаратам, плохо диффундирующим в агар, например, полипептидным антибиотикам (полимиксин, ристомицин).
Количественное определение чувствительности бактерий к антимикробным препаратам с помощью Е-теста.Е-тест представляет собой вариант диффузионного метода, позволяющий определять МПК антибиотика. Вместо дисков используют стандартные полимерные полоски, приготовленные по специальной технологии (АВ BIODISK) и содержащие иммобилизованные антимикробные препараты, нанесенные в виде непрерывного градиента концентрации. На другой стороне полоски
Таблица 7.2.3. Определение МПК антимикробных препаратов методом серийных разведений
| Номер пробирки | Разведение антибиотика | Концентрация антибиотика, мкг/мл | Рост бактерий (помутнение среды) |
| 1:100 | — | ||
| 1:200 | — | ||
| 1:400 | — | ||
| 1:800 | 12,5 | — | |
| 1:1600 | 6,25 | + | |
| 1:3200 | 3,12 | + | |
| Среда без антибиотика (контроль) | — | + |
Е-теста нанесена шкала значений МПК. При помещении полоски на поверхность агара регулируемый процесс диффузии обеспечивает создание в питательной среде вокруг полоски стабильного градиента концентрации препарата, соответствующего шкале. Процедура определения чувствительности с помощью Е-теста осуществляется аналогично тестированию методом дисков. После инкубации посева вокруг полоски образуется зона задержки роста, имеющая форму эллипса. Значение МПК соответствует месту пересечения эллипсовидной зоны с полоской Е-теста. Для интерпретации результатов (оценки клинической чувствительности) используют стандартные критерии (табл. 7.2.3).
ЭКОЛОГИЯ МИКРООРГАНИЗМОВ
Введение.Экология микроорганизмов является разделом общей микробиологии и изучает взаимоотношения микро- и макроорганизмов, совместно обитающих в определенных биотопах. В естественных средах обитания (почве, воде, воздухе, живых организмах) микробы входят в состав различных биоценозов. Экология микробов, вызывающих заболевания человека, определяется их способностью выживать во внешней среде, менять хозяев, сохраняться в организме хозяина на фоне действия иммунной системы, а также связана со способами их распространения, передачи и рядом других факторов. Оценка ряда экологических условий является одной из главных задач санитарной микробиологии.
Санитарно-бактериологические исследования лежат в основе практической работы санитарных врачей и эпидемиологов при санитарно-гигиенической оценке объектов окружающей среды, пищевых продуктов, напитков и т.д. и играют ведущую роль в профилактике инфекционных болезней. Важным объектом изучения медицинской микробиологии является нормальная микрофлора организма человека, которая включает микробы, обитающие на кожных покровах, слизистых оболочках различных органов (полости рта, зева, носоглотки, верхних участков дыхательных путей, кишечника, особенно толстой кишки, и т.д.). Одни из них являются постоянными (облигат-ными) обитателями организма человека, другие — временными (факультативными или транзиторными). Нормальная микрофлора — это жизненно важная система организма, которая обеспечивает защиту от многих патогенных микробов, созревание и стимуляцию иммунной системы, продукцию ряда витаминов и ферментов, участвующих в пищеварении, и др.
Качественный и количественный состав микрофлоры человека меняется в течение жизни и зависит от пола, возраста, характера питания и др. Кроме того, колебания в составе микрофлоры человека могут быть обусловлены возникновением заболеваний и применением лекарственных препаратов, прежде всего антибиотиков и иммуномодуляторов. Оценка качественного и количественного состава микрофлоры организма человека по определенным показателям позволяет выявить его нарушение (дисбактериоз) и связанные с ним последствия.
Тема 8.1. МИКРОФЛОРА ВОДЫ, ВОЗДУХА И ПОЧВЫ. МЕТОДЫ САНИТАРНО-БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОГО ИССЛЕДОВАНИЯ ВОДЫ, ВОЗДУХА И ПОЧВЫ
▲ План
ж Программа
1. Микрофлора воды, воздуха и почвы.
2. Санитарно-показательные микроорганизмы и их значение.
3. Методы определения коли-индекса, коли-титра и микробного числа воды.
4. Методы определения микробного числа воздуха.
5. Методы определения перфрингенс-титра, коли-титра и микробного числа почвы.
А Демонстрация
1. Санитарно-бактериологическое исследование воды методом мембранных фильтров.
2. Санитарно-бактериологическое исследование воздуха. Аппарат Кротова. Рост микроорганизмов на МПА в чашке Петри. Рост гемолитических стрептококков на кровяном агаре.
3. Санитарно-бактериологическое исследование почвы. Рост Proteus vulgaris (по Шукевичу).
а Задание студентам
1. Провести оценку санитарно-бактериологического состояния воды по результатам определения микробного числа, коли-индекса и коли-титра.
2. Провести оценку санитарно-бактериологического состояния воздуха по результатам определения микробного числа.
3. Провести оценку санитарно-бактериологического состояния почвы по результатам определения микробного числа, коли-титра, перфрингенс-титра и титра термофильных бактерий.
4. Сделать посев смыва с кожи рук на глюкозопептон-ную среду.
▲ Методические указания
• Микробиологические методы исследования окружающей среды
Для оценки санитарно-гигиенического состояния различных объектов окружающей среды, воды, пищевых продуктов и др. проводят санитарно-бактериологические исследования, целевое назначение которых состоит в определении эпидемической опасности. Однако прямое обнаружение патогенных микробов связано с рядом трудностей, обусловленных прежде всего низкой концентрацией данных микробов, которые, как правило, не могут размножаться в воздухе, воде, почве. Поэтому в санитарно-микробиологической практике применяют косвенные методы, основанные на определении общей микробной обсемененности того или другого объекта и на обнаружении в нем так называемых санитарно-показателъных бактерий (табл. 8.1.1).
Таблица 8.1.1. Санитарно-показательные бактерии окружающей среды и пищевых продуктов
| Объект | Характер загрязнения | Санитарно-показательные бактерии |
| Вода | Фекальное | Бактерии группы кишечных палочек Escherichia coli, Citrobacter freundii, Enterobacter aerogenes, Enterococ-cus faecalis |
| Почва | То же | Те же бактерии и клостридии {Clostridium perfringens, CI. sporo-genes и др.) |
| Промышленно-быто- | Термофильные бактерии, Proteus | |
| вые (разлагающиеся отбросы) | vulgaris | |
| Пищевые | Фекальное | Бактерии группы кишечных па- |
| продукты | лочек S. faecalis, P. vulgaris | |
| Орально-капельное | Staphylococcus aureus | |
| Предметы | Фекальное | Бактерии группы кишечных па- |
| обихода | лочек, P. vulgaris, E. faecalis | |
| Орально-капельное | S. aureus | |
| Воздух | То же | S. aureus, S. pyogenes |
| Вода, | Промышленное | Производственные штаммы мик- |
| почва, | робов | |
| воздух |
О микробной обсемененности судят по микробному числу -общему количеству микробов, содержащихся в единице объема или массы исследуемого объекта (1 мл воды, 1 г почвы, 1 м3 воздуха). Содержание санитарно-показательных бактерий оценивают по двум показателям — титру и индексу. За титр принимают тот минимальный объем или массу исследуемого материала, в которых обнаруживают санитарно-показательные бактерии; индекс показывает количество санитарно-показательных бактерий, содержащихся в 1 л жидкости, 1 г плотных веществ, 1 м3 воздуха. К санитарно-показательным бактериям относятся представители облигатной микрофлоры организма человека и теплокровных животных, для которых средой обитания являются кишечник или респираторный тракт. Они обладают следующими свойствами: 1) постоянно выделяются в большом количестве из организма во внешнюю среду; 2) не имеют других мест обитания; 3) способны сохраняться в окружающей среде в течение тех же сроков, что и патогенные бактерии, паразитирующие в кишечнике или респираторном тракте; 4) не способны интенсивно размножаться на каких-либо объектах вне организма хозяина и изменять свои свойства. Перечисленные признаки присущи ряду бактерий, которые признаны санитарно-показательными для различных объектов окружающей среды (см. табл. 8.1.1).
Санитарно-показательными микробами, свидетельствующими о фекальном загрязнении окружающей среды, являются бактерии группы кишечной палочки (БГКП). Они принадлежат к разным родам семейства Enterobacteriaceae. Дифференциально-диагностические признаки БГКП представлены в табл. 8.1.2. Обнаружение E.coli в каких-либо объектах окружающей среды или пищевых продуктах считается наиболее достоверным показателем свежего фекального загрязнения. Наличие бактерий родов Citrobacter и Enterobacter указывает на относительно давнее фекальное загрязнение. Присутствие Clostridium perfrin-gens, С. sporogens и других клостридий в почве свидетельствует о ее фекальном загрязнении, причем как свежем, так и давнем, поскольку эти бактерии образуют споры, что позволяет им длительно сохраняться в окружающей среде (в частности, в почве). Обнаружение в объектах окружающей среды Enterococ-cusfaecalis также свидетельствует об их фекальном загрязнении. К группе термофильных бактерий относятся неродственные бактерии, представители различных семейств, способных размножаться при температуре 60 °С и выше {Lactobacillus lactis, Streptococcus thermophilus и др.). Они не являются постоянными обитателями кишечника человека и не служат критериями фекального загрязнения окружающей среды. Резкое увеличение количества этих бактерий может свидетельствовать о загрязнении почвы разлагающимися отбросами, поскольку они размножаются в саморазогревающемся навозе и компостах.
Таблица 8.1.2. Дифференциально-диагностические признаки БГКП
| Вид бактерий | Признак | |||||
| продукты сбраживания | метиловый красный | реакция Фо- геса— Проска- уэра | индоло- образо- вание | рост на цитрат- ной среде | рост в присутствии KCN |
Escherichia Смесь + — +
coli кислот
Citrobacter То же + — р + +
freundii
Enterobacter Бутан- — + — + +
aerogenes диол
Условные обозначения: (+) — положительная реакция, (—) — отрицательная реакция, р — различные реакции.
Бактерии, принадлежащие к роду Proteus {P.vulgaris и др.) семейства Enterobacterceae, широко распространены в природе. Эти гнилостные бактерии в большом количестве встречаются на разлагающихся останках животных и растений. Обнаружение этих бактерий в каких-либо пищевых продуктах свидетельствует о гнилостном распаде.
Гемолитические стрептококки (S.pyogenes), являясь транзитными обитателями носоглотки и зева, выделяются с капельками слизи воздушно-капельным путем. Сроки выживания гемолитических стрептококков в окружающей среде практически не отличаются от сроков, характерных для большинства других возбудителей воздушно-капельных инфекций. Обнаружение гемолитических стрептококков в воздухе помещений указывает на возможное его загрязнение микробами, содержащимися в зеве, носоглотке, верхних дыхательных путях человека и являющимися возбудителями воздушно-капельных инфекций. Staphylococcus aureus является факультативным обитателем носоглотки, зева, а также кожных покровов человека. Его присутствие в воздухе помещений или на находящихся там предметах является показателем воздушно-капельного загрязнения. Одновременное обнаружение золотистого стафилококка и гемолитических стрептококков свидетельствует о высокой степени загрязнения воздуха.
• Санитарно-бактериологическое исследование воды
Определение микробного числа воды. Водопроводную воду засевают в объеме 1 мл, воду открытых водоемов — в объемах 1,0; 0,1 и 0,01 мл. Все пробы вносят в стерильные чашки Петри, после чего их заливают 10—12 мл расплавленного и остуженного до 45—50 °С питательного агара, который тща-
тельно перемешивают с водой. Посевы инкубируют при 37 °С в течение 1—2 сут. Воду из открытых водоемов засевают параллельно на две серии чашек, одну из которых инкубируют при 37 °С в течение 1 сут, а другую — 2 сут при 20 °С. Затем подсчитывают количество выросших на поверхности и в глубине среды колоний и вычисляют микробное число воды — количество микроорганизмов в 1 мл.
Определение коли-титра и коли-индекса воды. Коли-титр воды — минимальное количество воды (мл), в котором обнаруживаются БГКП. Коли-индекс — количество БГКП в 1 л воды. Эти показатели определяют титрационным (бродильным) методом или методом мембранных фильтров.
Метод титрования. Производят посев различных объемов воды в глюкозопептонную среду (1 % пептонная вода, 0,5 % раствор глюкозы, 0,5 % раствор хлорида натрия, индикатор Андреде и поплавок), причем для посевов больших количеств (100 и 10 мл) используют концентрированную среду, содержащую 10-кратные количества указанных веществ.
Воду открытых поверхностных водоемов исследуют в объемах 100; 10; 1,0 и 0,1 мл. Для исследования водопроводной воды делают посевы трех объемов по 100 мл, трех объемов по 10 мл и трех объемов по 1 мл. Посевы инкубируют в течение 1 сут при 37 °С. О брожении судят по наличию пузырьков газа в поплавке. Из забродивших или помутневших проб производят посевы на среду Эндо. Из выросших колоний делают мазки, окрашивают по методу Грама и ставят оксидазный тест, позволяющий дифференцировать бактерии родов Escherichia, Citrobacter и Enterobacter от грамотрицательных бактерий семейства Pseudomonadaceae и других оксидазоположительных бактерий, обитающих в воде. С этой целью стеклянной палочкой снимают 2—3 изолированные колонии с поверхности среды, наносят штрихом на фильтровальную бумагу, смоченную ди-метил-п-фенилендиамином. При отрицательном оксидазном тесте цвет бумаги не изменяется, при положительном она окрашивается в синий цвет в течение 1 мин. Грамотрицатель-ные палочки, не образующие оксидазу, вновь исследуют в бродильном тесте — вносят в полужидкий питательный агар с 0,5 % раствором глюкозы и инкубируют при 37 °С в течение 1 сут. При положительном результате определяют коли-титр и коли-индекс по статистической табл. 8.1.3.
Метод мембранных фильтров. Мембранный фильтр № 3 помещают в воронку Зейтца, вмонтированную в колбу Бунзена, которая присоединяется к вакуумному насосу. Мембранные фильтры предварительно стерилизуют кипячением в дистиллированной воде. Воду из водопроводной сети и воду артезианских скважин фильтруют в объеме 333 мл. Чистую воду открытого водоема фильтруют в объеме 100, 10, 1,0 и 0,1 мл, более загрязненную перед фильтрованием разводят стерильной
Таблица 8.1.3. Определение индекса бактерий группы кишечных палочек при исследовании воды
| Коли индекс |
| Количество положительных результатов |
| Пределы индекса |
Коли-титр
| нижний |
| верхний |
| из 3 объемов по 10 мл |
| из 3 объемов по 1 мл |
из 3 объемов по 100 мл
| Менее 3 | — | — | Более 3300 | |||
| 0,5 | ||||||
| 0,5 | ||||||
| 0,5 | ||||||
| 0,9 | ||||||
| Более! 100 | — | — | Менее 0,9 |
водой. Затем фильтры помещают на поверхность среды Эндо в чашки Петри и после инкубации при 37 °С в течение 1 сут подсчитывают количество выросших колоний, типичных для БГКП. Из 2—3 колоний красного цвета готовят мазки, окрашивают по методу Грама и определяют оксидазную активность. Для этого фильтр с выросшими на нем колониями бактерий переносят пинцетом, не переворачивая, на кружок фильтровальной бумаги, смоченной диметил-п-фенилендиамином. При наличии оксидазы индикатор окрашивает колонию в синий цвет. 2—3 колонии, не изменившие первоначальную окраску, засевают в полужидкую среду с 0,5 % раствором глюкозы. Посевы инкубируют в течение суток при 37 °С. При наличии газообразования подсчитывают число красных колоний на фильтре и определяют коли-индекс. Нормативные показатели для питьевой воды приведены в табл. 8.1.4.
Таблица 8.1.4. Нормативы для питьевой воды (ГОСТ 2874-82)
| Норматив |
Показатель
Число микробов в 1 мл воды, не более 100
Число бактерий группы кишечных палочек в 1 л воды 3
(коли-индекс), не более
Для определения титра Enterococcus faecalis готовят 10-кратные разведения воды. Цельную воду и ее разведения в объеме 1 мл засевают в одну из жидких элективных сред (КФ, поли-
миксиновая и др.), инкубируют при 37 "С в течение 2 сут, через 24 и 48 ч производят высевы на плотные элективно-дифференциальные среды: агар КФ, агар ТТХ (среда с трифенилтетра-золий-хлоридом), полимиксинтеллуритный агар. Идентифицируют стрептококки по виду колоний, морфологии клеток и окраске по методу Грама. На среде с ТТХ стрептококки образуют колонии темно-красного цвета, на агаре с теллуритом — черного цвета.
Состав сред.Среда КФ:2% питательного агара, 1 % дрожжевого экстракта, 2 % лактозы, 0,4 % азида натрия, 0,06 % карбоната натрия, индикатор бромкрезоловый красный.
Полимиксиновая среда: 2 % питательного агара, 1 % дрожжевого экстракта, 1 % глюкозы, полимиксин М 200 ЕД/мл, индикатор бромтимоловый синий.
Полимиксинтеллуритный агар: 2 % питательного агара, 1 % дрожжевого экстракта, 1 % глюкозы, кристаллический фиолетовый 1:800 000, полимиксин М 200 ЕД/мл, 0,01 % теллурита калия.
Агар трифенилтетразолий-хлорид (ТТХ): 2 % питательного агара, 1 % дрожжевого экстракта, 1 % глюкозы, кристаллический фиолетовый 1:800 000, 0,01 % ТТХ.
При определении индекса E.faecalis пользуются статистическими таблицами, применяемыми при установлении коли-ин-декса. Кроме того, с этой целью используют метод мембранных фильтров. Для обнаружения патогенных бактерий воду пропускают через мембранные фильтры, которые затем помещают в жидкие элективные среды или на поверхность плотных дифференциально-диагностических сред.
• Санитарно-бактериологическое исследование воздуха
Определение микробного числа воздуха.Количественные микробиологические методы исследования воздуха основаны на принципах осаждения (седиментации), аспирации или фильтрации.
Седиментационный метод. Две чашки Петри с питательным агаром оставляют открытыми в течение 60 мин, после чего посевы инкубируют в термостате при 37 "С. Результаты оценивают по суммарному числу колоний, выросших на обеих чашках: при наличии менее 250 колоний воздух считается чистым; 250—500 колоний свидетельствует о загрязнении средней степени, при количестве колоний более 500 — загрязненным.
Аспирационный метод. Это более точный количественный метод определения микробного числа воздуха. Посев воздуха осуществляют с помощью приборов. Аппарат Кротова (рис. 8.1.1) устроен таким образом, что воздух с заданной скоростью засасывается через узкую щель плексигласовой пластины, закрывающей чашку Петри с питательным агаром.
Рис.8.1.1. Аппарат Кротова для бактериологического исследования
воздуха.
При этом частицы аэрозоля с содержащимися на них микроорганизмами равномерно фиксируются на всей поверхности среды благодаря постоянному вращению чашки под входной щелью. После инкубации посева в термостате проводят расчет микробного числа по формуле:
а х 1000 х~ у
где а — количество выросших на чашке колоний; V — объем пропущенного через прибор воздуха, дм3; 1000 - стандартный объем воздуха, дм3.
При определении микробного числа воздуха используют питательный агар для выделения гемолитических стрептококков — кровяной агар с добавлением генцианового фиолетового с последующим контрольным микроскопированием и выборочным пересевом подозрительных колоний на кровяной агар.
Состав сред.Кровяной агар с генциановым фиолетовым: 2 % питательного агара, 5-10 % дефибринированной крови лошади, кролика или барана, генциановый фиолетовый (1:50 000).
Желточно-солевой агар (ЖСА): 2 % питательного ага-ра, 10 % хлорида натрия, 20 % (по объему) желточной взвеси (1 желток куриного яйца на 200 мл изотонического раствора хлорида натрия).
Для исследования воздуха могут применяться и другие приборы (Дьякова, Речменского, Киктенко, ПАБ-1 — пробоотбор-
ник аэрозольный бактериологический, ПОВ-1 — прибор для отбора воздуха), с помощью которых определенный объем воздуха пропускают через жидкости или фильтры, а затем делают мерные посевы на питательные среды. Использование ПАБ-1 и ПОВ-1 позволяет исследовать большие объемы воздуха и обнаруживать патогенные бактерии и вирусы.
При исследовании воздуха стационаров (хирургических, аку-шерско-гинекологических и др.) осуществляют непосредственное выделение патогенных и условно-патогенных бактерий — возбудителей внутрибольничных инфекций (стафилококков, синегнойной палочки и др.). При возникновении внутрибольничных инфекций стафилококковой этиологии проводят исследования, направленные на выявление источников и путей распространения инфекций: путем фаготипирования определяют идентичность стафилококков, выделенных из объектов окружающей среды, а также от больных и обслуживающего персонала. Нормативные показатели микробного числа и содержания Staphylococcus aureus, разработанные для воздуха больничных помещений, приведены в табл. 8.1.5.
| S.aureus (в 250 л) |
| Микробное число |
Таблица 8.1.5. Критерии оценки микробного обсеменения воздуха в больничных помещениях
Место отбора проб